Geri Dön

Tet-on sistemi ile metil-CPG-bağlanma bölgesi 3 (MBD3) ekspresyonu susturulmuş fibroblast hücrelerinin embriyonik kök hücre kaynaklı eksozomlar aracılığı ile pluripotent hücrelere programlanması

Reprogramming of methyl-cpg binding domain (MBD3)/tet-on silenced fibroblast cells BY embryonic stem cell derived exosomes into pluripotent cells

PDF İndir

  1. Tez No: 433373
  2. Yazar: CEREN ÖZEL
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. GÖKHAN DURUKSU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Embriyonik kök hücre, eksozom, Mbd3, yeniden programlama, gen susturulması, Tet-On sistem, shRNA, Embriyonic stem cells, Mbd3, reporgramming, exosomes, knockdown, Tet-On system, shRNA, gene silencing
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Kök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 139

Özet

Amaç: Mbd3 proteini kromatin yeniden modelleyici faktörlerden oluşan multi-alt birimli NuRD kompleksinin önemli bir parçasıdır. NuRD gen ifadesinin baskılanmasını histon deasetilasyon ve kromozom yeniden modelleme aktivitesi üzerinden gerçekleştirir. Somatik hücrelerde ifadesi yüksek olan Mbd3 geninin susturulması ise gen ifadesi baskılanmasını ortadan kaldırarak epigenetik hafızanın silinmesine izin vermekte ve geriye-programlamada önemli bir yaklaşım teşkil etmektedir. Eksozomlar, hücreler arası sinyal iletimine aracılık eden bir role sahiptirler. EKH kaynaklı eksozomların pluripotensi faktörlerini kodlayan/düzenleyen mRNA'ları ve miRNA'ları aktardıkları gösterilmiştir. Bu çalışmada EKH'lerinden elde edilen eksozomların Mbd3 geni susturulmuş fibroblast hücreleri üzerinde geriye programlama etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Yöntem: Eksozomlar, fare-EKH kültürünün ikinci gününde ultrasantrifüj yöntemiyle elde edildi. Besleyici tabakadan salgılanan ve serumda bulunan eksozomların karışmaması için fare-EKH kültürü besleyici tabaka ve serum olmadan gerçekleştirilmesini mümkün kılan Nunclon-Vita-Surface kapları üzerinde kültüre edildi. İnsan fibroblastlarında shRNA-aracılı Mbd3 susturulması Tet-On-sistemin kontrolünde gerçekleştirildi. Fibroblastlar Mbd3-susturulmasını takiben eksozomlarla ko-kültür gerçekleştirildi ve eksozomların PKH26 boyanmasıyla eksozom transferi belirlendi. EKH-eksozomların fibroblast hücreleri üzerindeki etkileri gen ekspresyon analiziyle belirlendi. Bulgular: EKH-eksozomları aktarılan Mbd3 susturulmuş hücrelerin çoğalmasında ve potensi seviyelerinde artış gözlemlenirken, gen ekspresyon profilinin büyük ölçüde değiştiği belirlenmiştir. Mbd3 susturulmuş hücrelerde eksozom aktarılmasıyla ilişkili olarak özellikle pluripotensi ile ilgili transkripsiyon faktörlerinin ekspresyonları Nanog,Oct4 ve Sox2 sırasıyla 2300, 1600 ve 470 kat artış göstermişken, proto-onkogen c-Myc faktörünün azaldığı belirlenmiştir. Sonuç: Her iki yaklaşımın uygulandığı hücreler dahil olmak üzere EKH-benzeri hücrelere tamanen programlanma gerçekleşmese de, Mbd3 susturulmuş hücrelerde eksozom ile ko-kültür sonrası pluripotent faktörler çok ciddi derecede artmıştır. Bu eksozomların somatik hücrelerin geri programlanmasında destekleyici bir faktör olarak kullanılabileceği bu çalışmada gösterilmiştir.

Özet (Çeviri)

Objective: Mbd3 is a key component of NuRD, a multi-subunit-complex composed of chromatin-remodelling-factors. NuRD complex regulate chromatin structure and promote transcriptional repression via its intrinsic nucleosome remodeling and histone deacetylation activities. Upon silencing of Mbd3, which ubiquitously expressed in all somatic cells, the elimination of the transcriptional repression leads deletion of epigenetic memory, represents a significant approach for reprogramming. Exosomes, act as a mediator of intercellular communication. ESC-derived-exosomes were shown to transfer microRNAs, mRNAs regulating and encoding several pluripotency transcription factors, respectively. In the present study, we aimed to investigate the impact of the exosomes derived from ESCs on the capacity for reprogramming of fibroblasts into pluripotent state. Method: Exosomes were isolated from mESCs by ultracentrifugation following the culture of 2 days. To eliminate effects of feeder layer cells and serum, ESCs cultured on feeder-free Nunclon-Vita-Surface culture plates. Human fibroblasts were modified by shRNA-mediated MBD3-knockdown under the control of Tet-On-system. Following the MBD3 silencing, fibroblasts were co-cutured with exosomes, and exosome transfer were characterized by PKH26-staining of exosomes. The effect of exosomes on fibroblasts was determined by gene expression analyses of pluripotency factors. Results: MBD3-silenced cells showed enhanced cell proliferation and increased stemness character. The considerable change in the gene expression profile was observed in the MBD3-silenced cell line after the exosome application. The expression of Nanog,Oct4 and Sox2 were observed 2300, 1600 and 470 times compared to fibroblast cells, respectively, while proto-oncogene c-Myc expression down-regulated related with exosome treatment. Conclusion: The complete differentiation into ESC-like cells was not observed even in the epigenetically modified and exosome transferred-cell-line. But pluripotent factors were improved significantly after the co-culture with the exosomes. In this thesis, the use of ESC-derived exosomes were shown to be used in reprogramming studies.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    507672

    Establishment of cell lines with inducible expression of shRNA for an estrogen responsive gene

    Östrojen duyarlı bir genin indüklenebilir shRNA ifadesi olan hücre hatlarının oluşturulması

    BURCU KARAKAYA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MESUT MUYAN

  2. Tez No

    35413

    Bazı yeni makrobaşlatıcılar ile değişik yapılarda blok kopolimerlerin sentezi ve karakterizasyonu

    Başlık çevirisi yok

    İSMAİL ÇAKMAK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1994

    Bilim ve TeknolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Fen Bilimleri Eğitimi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYHAN DEMİRBAŞ

  3. Tez No

    393056

    Combined effects of antibiotics on the anaerobic microbial community structure, investigation of metabolites and antibiotic resistance genes

    Antibiyotiklerin anaerobik mikrobiyal komunite üzerindeki etkisinin belirlenip, metabolit oluşumu ve antibyotik direnç gelişiminin incelenmesi

    SEVCAN AYDIN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Biyomühendislikİstanbul Teknik Üniversitesi

    Çevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ORHAN İNCE

  4. Tez No

    444114

    Effects of variable valve timing on the exhaust thermal management of a turbocharged & intercooled diesel engine

    Değişken valf zamanlamasının türboşarjlı & arasoğutuculu bir dizel motorun egzoz ısıl yönetimi üzerindeki etkileri

    HASAN ÜSTÜN BAŞARAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2016

    Gemi Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Gemi İnşaatı ve Gemi Makineleri Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OSMAN AZMİ ÖZSOYSAL

  5. Tez No

    873222

    Çeşitli klinik örneklerden izole edilen acinetobacter spp. suşlarında quorum sensing ve antibiyotik direnç genleri̇ni̇n araştırılması

    Investigation of quorum sensing and antibiotic resistance genes in acinetobacter spp. strains isolated from various clinical samples

    SAİT RAMAZAN GÜLBAY

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    MikrobiyolojiNecmettin Erbakan Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. METİN DOĞAN

Geri Dön