Geri Dön

Mutations of THR169 and PRO172 amino acids of BSH enzyme from lactobacillus plantarum and structural and functional analysis of the mutants

Lactobacillus plantarum'un BSH enziminde THR169 ve PRO172 aminoasitlerinin mutasyonu ve mutant enzimlerin yapısal ve fonksiyonel karakterizasyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 533934
  2. Yazar: FATMA TÜRKER
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. MEHMET ÖZTÜRK
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Genetik, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2019
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Bolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 84

Özet

Safra tuzu hidrolaz (STH) (EC 3.5.1.24) enzimi konakçının metabolizması üzerinde çok önemli bir role sahiptir. STH tarafından safra tuzlarında bulunan taurine ve glisin serbest bırakılabilir ki bu durum dekonjugasyon olarak adlandırılır. STH'ın bu özelliğinin sağlığa faydaları vardır örneğin kandaki kolestrolün düşmesini sağlar. Bu yüzden aktif STH içeren probiyotik türler hiperkolestrolemi kaynaklı hastalıkların tedavisinde kullanılmaya başlanmıştır. Buna ek olarak STH aktif türlerin antibiyotik büyüme promotor'e (AGP) alternatif olarak kullanılması araştırılmaktadır. Fakat safra tuzu dekonjugasyonu konakçı üzerinde yan etkileri de görülebilir. Yapılan çalışmalar STH ile kolorektal kanser, safra taşı ve bazı bağırsak hastalıkları arasında ilişki olduğunu göstermektedir. Bu nedenle STH enziminin çalışma mekanizmasını anlamak hayati önem taşımaktadır. BSH'ın insan üzerindeki etkileri iyi çalışılmış olsa da, onun katalitik aktivitesi, substart tercihleri ve katlanması hakkında yeterli bilgi bulunmamaktadır. Bu çalışmada Lactobacillus plantarum B14 türünden korunmuş iki amino asit, Thr-169 ve Pro-172, yönlendirilmiş mutagenez kullanılarak pCON1 konstraktı içinde sırasıyla Valin ve Histidin amino asitlerine dönüştürülüp, pET22b ekspresyon vektörüne aktarılmıştır ve Escherichia coli BRL(DE3) türünde ifade edilmiştir. Elde edilen mutant BSH enzimlerinin aktiviteleri altı farklı safra tuzu olan glikokolik asit, glikodioksikolik asit, glikokenodioksikolik, taurokolik asit, taurodeoksikolik asit ve taurokenodeoksikolik kullanılarak ninhydrin yöntemi ile belirlenmiştir. Sonuçlar T169V mutasyonunun BSH aktivitesini azalttığını göstermiştir. Bundan farklı olarak P172H mutantından inaktif enzim elde edilmiştir. Bu sırada, BSH proteinin bütünlüğü ve katlanması bu mutasyonlardan etkilenmediği görülmüştür. Bulgularımız bu iki aminoasit BSH enziminin katalitik aktivitesinden sorumlu olabileceğini fakat stabilitesinden sorumlu olamayacağını göstermektedir.

Özet (Çeviri)

Bile salt hydrolase (BSH) (EC 3.5.1.24) has a very important role in host metabolism. Glycine and taurine in bile salts can be liberated by BSH which is called deconjugation. This property of BSH exert health benefits to the host such as reduction of blood cholesterol. Therefore BSH active probiotic strains are used in the treatment of hypercholesterolemia related diseases. Moreover, using BSH active strains as an alternative to antibiotic growth promoter (AGP) is under research. However, deconjugation of bile salts may have side effects to the host. Studies showed the relationship between BSH and a couple of diseases; colorectal cancer, cholesterol gallstone and bowel diseases. For this reason, understanding the mechanism of BSH enzyme is crucial. Even though BSH effects on human are well studied, there are not enough information about its mechanism of catalytic activity, substrate preferences and folding. In this study, two conserved amino acids, Thr-169 and Pro-172 from Lactobacillus plantarum B14 strain were substituted for valine and histidine respectively in pCON1 construct by site-directed mutagenesis then mutant bsh genes were inserted into the pET22b expression vector, and expressed in Escherichia coli BRL(DE3) strain. Mutant BSH enzyme activities were determined by ninhydrin assay with six different human bile salts, glycocholic acid, glycodeoxycholic acid, glycochenodeoxycholic acid, taurocholic acid, taurodeoxycholic acid, taurochenodeoxycholic acid. The results showed that T169V mutation decreased the activity of BSH. Distinctly; inactive enzyme was obtained from P172H mutant. Meanwhile, stability and folding of the BSH proteins were not affected by these mutations. Our finding demonstrated that these two amino acids might be responsible for catalytic activity of BSH enzyme but not for stability of it.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    636315

    Sanal tarama ve çok boyutlu moleküler modelleme yöntemleri ile p53-MDM2 potansiyel inhibitörlerinin belirlenmesi

    Identification of p53-MDM2 potential inhibitors with virtual screening and multidimensional molecular modeling methods

    GÜLŞAH AYDIN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Kimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MİNE YURTSEVER

    PROF. DR. SERDAR DURDAĞI

  2. Tez No

    450963

    Molecular dynamics simulation analysis of His226 mutation on the dynamics of the ATPase domain of DNaK

    His226 mutasyonunun DNaK ATPaz domeni üzerindeki dinamiklerinin, moleküler dinamik simulasyonları ile analizi

    ELİF ÇAKMAK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    Biyofizikİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

    YRD. DOÇ. DR. SEFER BADAY

  3. Tez No

    307940

    Mycobacterium tuberculosis suşlarında eflüks pompasını oluşturan gen ekspresyonlarının çoklu ilaç direnç gelişimi üzerine etkisinin araştırılması

    Investigation of the relation of multiple drug resistance with the expression of genes which made of efflux pump in mycobacterium tuberculosis

    MUSTAFA KEREM ÇALGIN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    MikrobiyolojiAnkara Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET KIYAN

  4. Tez No

    195522

    Kalıtımsal ve non-sendromik işitme kaybı olgularının aday lokuslardaki mutasyonel analizi

    Mutational analyses of the hereditary and non-syndromic hearing loss cases in candidate loci

    SAİT TÜMER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    Kulak Burun ve BoğazDokuz Eylül Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. OĞUZ ALTUNGÖZ

  5. Tez No

    494382

    Kanser kökenli hücre hatlarında gözlenen sessiz tümör süpresör gen mutasyonlarının mrna işlemlenmesi üzerine olası etkilerinin saptanması

    Probable effects of silent mutations observed in tumor suppressors genes on mrna spli̇ci̇ng in cancer originated cell lines

    ALİ YÜKSEL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    GenetikDokuz Eylül Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OĞUZ ALTUNGÖZ

Geri Dön