Geri Dön

İnsan plasental glutatiyon S-transferazının saflaştırılması ve bazı özellikleri

Başlık çevirisi mevcut değil.

PDF İndir

  1. Tez No: 11431
  2. Yazar: N. NURAY ULUSU
  3. Danışmanlar: PROF.DR. NAZMİ ÖZER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 1990
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 73

Özet

Plasental glutatiyon S-transferaz normal plasentadan PBE94 (iyon değiştirici) ve S-hekzilglutatiyon Sepharose 4B (afinite kolonu) kullanılarak %71 verim ve 35 ünite/mg spesifik aktivite ile saf laştırıldı. Enzim preparatının saflığı; SDS/PAGE, kromatofokuslama ve“Ouchterlony double-diffusion”teknikleri kullanılarak gösterildi. Saflaştırılan enzim SDS/PAGE'de 24.000 daltona karşılık gelen tek bir protein bandı, kromatof okuslamada tek bir zirve (pl 4.82) ve“Ouchterlony double diffusion”plağında tek bir çökelme bandı verdi. Basit ardışık model kullanılarak yapılan“steady-state”kinetik analizinden GSH ve CDNB için enzimin Km değerleri sırasıyla 0.4, 0.8 ve 0.3, 2.0 mM olarak bulundu. Seyreltilmiş ve 37 C'de inköbe edilen enzimin iki fazlı inaktivasyona uğradığı ve inaktivasyonun birinci fazının yarı ömrünün 5 dakika, ikinci fazının yarı ömrünün ise 128 dakika olduğu ve inaktivasyonun seyreltme ortamında GSH veya GSSG varsa engellendiği bulundu. Ancak inaktivasyonun geri çevrilmesi ve çevrilme yüzdesinin bu ajanların ne zaman inkübasyon ortamına eklendiğine bağlı olduğu gözlendi. Nitekim %20 aktivite kaybetmiş enzimde reaktivasyon %100 iken, yaklaşık %60 aktivite kaybetmiş enzimde reaktivasyon %71'de kaldı. Bu sonuçlar dimerik enzimin ardışık tepkime mekanizması ile önce tersinir olarak aktif monomerlere daha sonra bu monomerlerin inaktif forma dönüştüğü şeklinde yorumlandı.

Özet (Çeviri)

Placental glutathione S-transferase was purified from a full-term placenta, using PBE94 anion exchanger and S-hexylglutathione coupled Sepharose 4B affinity columns. The enzyme obtained with 71% yield had a specific activity of 35 units per milligram protein. The purity of the preparation was tested using SDS/PAGE, chromatof ocusing and“Ouchterlony double-diffusion”techniques. The purified placental enzyme gave a single protein band or SDS/PAGE corresponding to 24000 daltons. It also gave a single peak on choromatof ocusing pi 4.82 and a single precipitation line on Ouchterlony double diffusion plate with antibody developed against it. Analysis of the steady-state kinetics, using a simple sequential model for the kinetic data obtained with GSH and CDNB as substrates gave Km values for glutathione (0.4 and 0.8mM) and for CDNB (0.3 and 2.0mM). Incubation of the diluted enzyme at 37°C and pH 6.5 resulted in inactivation (t^/p 5 min) which could be prevented by the addition of GSSG or GSH to the incubation medium. Reversal of inactivation was also observed with these agents. The extent of reactivation was found to depend on the time of addition of GSSG or GSH. An enzyme sample which had lost 20% of its initial activity could be fully reactivated where as at 60min of inactivation reversel could be achieved only to 70% of zero-time activity. The results were interpreted in terms of a consecutive mechanism involving potentially reversible dissociation of the dimeric enzyme to yield active monomers in a rate-limiting step, followed by conversion of the active monomers to an inactive form.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    533829

    Çeşitli Arilkumarin Türevlerinin Glutatyon S-Transferaz Aktivitesi Üzerindeki Etkilerinin İncelenmesi

    Investigation of the effects of some arylcoumarin derivatives on the activity of glutathione s-transferase

    BERK ORHAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyokimyaMarmara Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÖZKAN DANIŞ

  2. Tez No

    330744

    Bazı kumarin türevlerinin glutatyon s-transferaz enzimi üzerindeki inhibe edici etkilerinin araştırılması

    Investigation of inhibitory effects of various coumarin derivatives on glutathione s-transferase enzyme

    MUSTAFA MUHLİS ALPARSLAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    BiyokimyaMarmara Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞE OGAN

    DR. ÖZKAN DANIŞ

  3. Tez No

    260538

    Aroclor 1254'e maruz kalan gebe ratlar ile yavrularında oksidatif stresin ve bu strese karşı Vitamin E'nin koruyucu etkisinin araştırılması

    Investigation of protective effect of Vitamin E and oxidative stress in pregnant rats and their pups exposure to Aroclor 1254

    AYŞE SEYRAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyokimyaFırat Üniversitesi

    Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MİNE ERİŞİR

  4. Tez No

    867050

    Assessment of the effects of melatonin on the funtional deficits induced by cellular stress in obese donor derived mesenchymal STEM cells

    Melatonin'in obez donor mezenkimal kök hücrelerinde hücresel strese bağlı olarak oluşan fonksiyon bozuklukları üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesi

    ECE GİZEM POLAT

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATİMA SUSANNA FAUSTINA AERTS KAYA

  5. Tez No

    298852

    Yüksek doz kemoterapi alan akut lösemi hastalarında oral ve intravenöz glutamin tedavisinin mukozit gelişimi üzerine etkisinin karşılaştırılması

    A comparıson of oral and ıntravenous glutamıne therapy effects on mucositis development ın acut leucemıc patıents who receıved hıgh dose chemotherapy

    ASLIHAN DİLARA DEMİR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    HematolojiAtatürk Üniversitesi

    Dahiliye Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. İLHAMİ KİKİ

Geri Dön