Geri Dön

Koyun karaciğeri glutatyon s-transferazının saflaştırılması ve izozimlerinin tanımlanması

Başlık çevirisi mevcut değil.

  1. Tez No: 11430
  2. Yazar: İBRAHİM ÜNSAL
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. İ. HAMDİ ÖĞÜŞ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 1990
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 116

Özet

6. ÖZET Koyun karaciğeri 105000xg supernatanından hekzil-GSH afinite kromatografisi ve kromatofokusing yöntemleri ile 3 bazik ve 4 nötral GST izozimi saflaştırıldı. Kullanılan yöntemle koyun karaciğeri sitozolik proteinlerinin % 4.1 'in oluşturan GST izozimleri % 81.9 verimle elde edildi. Kromatofokusing kolonundan elüsyon pH'lan gözönüne alınarak bu izozimlerin izoelektrik noktalan; sırasıyla, bazik grup için 9.12, 9.05 ve 9.00; nötral grup için 7.15, 6.90, 6.60 ve 6.25 olarak hesaplandı. Bazik ve nötral grup izozimlerin, denenen çeşitli substratlarla grupiçi aktivite farklılıkları göstermedikleri, fakat gruplar arası farklılık bulunduğu saptandı. Bu nedenle izozimlerin diğer özellikleri ayrı ayrı değil, ancak bazik ve nötral olmak üzere iki grup altında araştırıldı. GST izozimlerinin 56°C'de ısıtmaya oldukça duyarlı oldukları (etkinlik yan-ömrü bazik ve nötral gruplar için sırasıyla 4.5 dak. ve 0.5 dak.) saptandı. Bazik GST izozimlerinin optimum pH değeri 8.50, nötral izozimler için ise 7.60 olarak hesaplandı. İzozimlerin, SDS-PAGE ile; N3 izozimi dışında, tümünün homodimerik yapıda olduğu ve alt birimlerin molekül ağırlıkları 24500 ile 27500 arasında değiştiği bulundu. îzozimlere karşı tavşanda ayrı ayrı oluşturulan antikorlar yardımıyla; bazik ve nötral gruptaki izozimlere karşı oluşan bütün antikorların grupiçi diğer izozimlerle çapraz tepkime verdiği ve izoelektrik nokta spektrumunun zıt uçlarında yer alan izozimler arasında çapraz tepkime görülmezken pl değerleri yakın olan nötral ve bazik izozimler arasında da çapraz tepkime gözlendi. Yapılan kinetik deneylerin verileri non-lineer regresyon analizine uygulandı; enzimin kinetik mekanizmasının random sequential mekanizma olduğu sonucuna ulaşıldı. Bazik ve nötral izozimlerin, deneylerde kullanılan elektrofilik substrat olan CDNB için Km değerleri sırasıyla 533 ve 1517 uM; GSH için Km değerleri sırasıyla 551 ve 370 uM olarak bulundu. Her iki GST izoziminin hekzil-GSH ile lineer kompetitif tipte inhibisyona uğradığı ve Kj değerlerinin nötral grup için 11.85 uM ve bazik için 2.57 uM olduğu; benzil-GSH'un, nötral izozimi hiperbolik kompetitif tipte inhibe ettiği ve Kj değerinin 2.05 uM olduğu, bazik izozimi parabolik kompetitif inhibisyona uğrattığı (Kj=5.62 uM) bulundu. BSP; her iki izozimi de nonkompetitif olarak inhibe etti ve Kj değerleri bazik için 16.64 ve nötral izozim için 14.13 uM olarak hesaplandı. i 01 W. O. Yükseköğretim Ruruiö Dokümantasyon MertliOrtamda glutatyon yokken, bazik ve nötral enzim grubu için bilirubinin Kj) değerleri sırasıyla 8.47 ve 7.58 uM, neminin Kj) değerleri sırasıyla 4.07 ve 2.01 uM ve deoksikolatm Kj) değerleri sırasıylal350 ve 650 uM olarak hesaplandı. Ortama İmM GSH eklendiğinde, bilirubinin nötral izozimler için Kj) değeri değişmedi, fakat bazik izozimler için Kq değeri 9.60 uM olarak bulundu. GSH varlığı hematinin bazik izozim için bağlanma sabitini artırırken (8.41 uM), nötral izozim için pek değiştirmedi (1.66 uM). Bilirubin hem bazik hem de nötral GST izozimlerini parabolik kompetitif inhibisyona uğrattı; bazik ve nötral izozimler için Kj değerleri sırasıyla 20.58 ve 43.66 uM olarak hesap edildi. : Deoksikolatm inhibisyonuna deterjan etkisinin katkıda bulunduğu; ancak CDNB ile kompetisyona girme ihtimalinin dışlanamayacağı sonucuna ulaşıldı. Hematinin; bazik izozimi GSH*a karşı unkompetitif tipte, CDNB'ye karşı non-kompetitif tipte inhibe ettiği görüldü. Nötral izozimin hematinle inhibisyonunun her iki substrat için de parabolik kompetitif nitelikte olduğu görüldü. GST izozimlerinin inhibisyonuna; inhibitor bileşiklerin hidrofobik yapıda olmasının katkıda bulunduğu gözlendi. Substrat olmayan bileşikler için varlığı tartışılan yüksek afiniteli bağlanma bölgesinin varlığı, hematinle yapılan deneylerle, bazik izozimler için saptandı. Fizyolojik ve patolojik hallerde bilirubin ve safra asitlerinin GST aktivitesi üzerine etkisi tartışıldı. 102

Özet (Çeviri)

Özet çevirisi mevcut değil.

Benzer Tezler

  1. Characterization and partial purification of sheep kidney and liver cytosolic glutathione-s-transferases: A comparative study

    Koyun böbrek ve karaciğer glutatyon s-transferazlarının karşılaştırmalı olarak karakterize edilmesi ve kısmen saflaştırılması

    AWNİ ALİ ABU-HİJLEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1993

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MESUDE İŞCAN

  2. Echinocococcus granulorus hidatik kistlerinde oksidantların (ROÜ, RNÜ) etkinliği ve antioksidant sistemlerin araştırılması

    The Effectiveness of oxidants (ROI, RNI) in Echinococcus granulorus hydatid cysts and an investigation of their antioxidandt systems

    RAMAZAN AMANVERMEZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1997

    BiyokimyaOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. CEMİL ÇELİK

  3. Katarakt oluşumu ile detonsifikasyon enzimlerinden glutatyon S-Transferaz (GST) enzimi polimorfizmi ve DNA tamir enzimlerinden XPD enzimi polimorfizmi arasındaki ilişkinin incelenmesi

    Evaluation of possible relationship between cataract formation and GST enzyme polymorphism, a member of antioxidant system, and XPD enzyme polymorphism, a DNA repair enzyme

    MUSTAFA ÜNAL

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    Göz Hastalıklarıİstanbul Üniversitesi

    Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. KEMAL DİKİCİ

    PROF.DR. KAZIM DEVRANOĞLU

  4. Effects of dielectric barrier discharge cold plasma on the quality of dandelion root infusions

    Dielektrik bariyer boşaltım soğuk plazmanın karahindiba kökü infüzyonlarının kalitesi üzerine etkisi

    BERFİN EDA ELÇİK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ CELALE KIRKIN GÖZÜKIRMIZI

  5. Fasciola hepatica ile enfekte koyunların kan ve karaciğer dokularında arginaz, nitrik oksit, bazı antioksidant enzimler ve lipid peroksidasyon düzeyleri ile karaciğer arginaz enziminin biyokimyasal özellikleri

    Arginase, nitrik oxide, some antioxidant enzymes and levels of lipid peroxidation in tissues of blood and liver in sheep infected with fasciola hepatica and biochemical properties of arginase enzyme in liver

    FULYA BENZER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    Veteriner HekimliğiFırat Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. SEMA TEMİZER OZAN