Koyun karaciğeri glutatyon s-transferazının saflaştırılması ve izozimlerinin tanımlanması
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 11430
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. İ. HAMDİ ÖĞÜŞ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1990
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 116
Özet
6. ÖZET Koyun karaciğeri 105000xg supernatanından hekzil-GSH afinite kromatografisi ve kromatofokusing yöntemleri ile 3 bazik ve 4 nötral GST izozimi saflaştırıldı. Kullanılan yöntemle koyun karaciğeri sitozolik proteinlerinin % 4.1 'in oluşturan GST izozimleri % 81.9 verimle elde edildi. Kromatofokusing kolonundan elüsyon pH'lan gözönüne alınarak bu izozimlerin izoelektrik noktalan; sırasıyla, bazik grup için 9.12, 9.05 ve 9.00; nötral grup için 7.15, 6.90, 6.60 ve 6.25 olarak hesaplandı. Bazik ve nötral grup izozimlerin, denenen çeşitli substratlarla grupiçi aktivite farklılıkları göstermedikleri, fakat gruplar arası farklılık bulunduğu saptandı. Bu nedenle izozimlerin diğer özellikleri ayrı ayrı değil, ancak bazik ve nötral olmak üzere iki grup altında araştırıldı. GST izozimlerinin 56°C'de ısıtmaya oldukça duyarlı oldukları (etkinlik yan-ömrü bazik ve nötral gruplar için sırasıyla 4.5 dak. ve 0.5 dak.) saptandı. Bazik GST izozimlerinin optimum pH değeri 8.50, nötral izozimler için ise 7.60 olarak hesaplandı. İzozimlerin, SDS-PAGE ile; N3 izozimi dışında, tümünün homodimerik yapıda olduğu ve alt birimlerin molekül ağırlıkları 24500 ile 27500 arasında değiştiği bulundu. îzozimlere karşı tavşanda ayrı ayrı oluşturulan antikorlar yardımıyla; bazik ve nötral gruptaki izozimlere karşı oluşan bütün antikorların grupiçi diğer izozimlerle çapraz tepkime verdiği ve izoelektrik nokta spektrumunun zıt uçlarında yer alan izozimler arasında çapraz tepkime görülmezken pl değerleri yakın olan nötral ve bazik izozimler arasında da çapraz tepkime gözlendi. Yapılan kinetik deneylerin verileri non-lineer regresyon analizine uygulandı; enzimin kinetik mekanizmasının random sequential mekanizma olduğu sonucuna ulaşıldı. Bazik ve nötral izozimlerin, deneylerde kullanılan elektrofilik substrat olan CDNB için Km değerleri sırasıyla 533 ve 1517 uM; GSH için Km değerleri sırasıyla 551 ve 370 uM olarak bulundu. Her iki GST izoziminin hekzil-GSH ile lineer kompetitif tipte inhibisyona uğradığı ve Kj değerlerinin nötral grup için 11.85 uM ve bazik için 2.57 uM olduğu; benzil-GSH'un, nötral izozimi hiperbolik kompetitif tipte inhibe ettiği ve Kj değerinin 2.05 uM olduğu, bazik izozimi parabolik kompetitif inhibisyona uğrattığı (Kj=5.62 uM) bulundu. BSP; her iki izozimi de nonkompetitif olarak inhibe etti ve Kj değerleri bazik için 16.64 ve nötral izozim için 14.13 uM olarak hesaplandı. i 01 W. O. Yükseköğretim Ruruiö Dokümantasyon MertliOrtamda glutatyon yokken, bazik ve nötral enzim grubu için bilirubinin Kj) değerleri sırasıyla 8.47 ve 7.58 uM, neminin Kj) değerleri sırasıyla 4.07 ve 2.01 uM ve deoksikolatm Kj) değerleri sırasıylal350 ve 650 uM olarak hesaplandı. Ortama İmM GSH eklendiğinde, bilirubinin nötral izozimler için Kj) değeri değişmedi, fakat bazik izozimler için Kq değeri 9.60 uM olarak bulundu. GSH varlığı hematinin bazik izozim için bağlanma sabitini artırırken (8.41 uM), nötral izozim için pek değiştirmedi (1.66 uM). Bilirubin hem bazik hem de nötral GST izozimlerini parabolik kompetitif inhibisyona uğrattı; bazik ve nötral izozimler için Kj değerleri sırasıyla 20.58 ve 43.66 uM olarak hesap edildi. : Deoksikolatm inhibisyonuna deterjan etkisinin katkıda bulunduğu; ancak CDNB ile kompetisyona girme ihtimalinin dışlanamayacağı sonucuna ulaşıldı. Hematinin; bazik izozimi GSH*a karşı unkompetitif tipte, CDNB'ye karşı non-kompetitif tipte inhibe ettiği görüldü. Nötral izozimin hematinle inhibisyonunun her iki substrat için de parabolik kompetitif nitelikte olduğu görüldü. GST izozimlerinin inhibisyonuna; inhibitor bileşiklerin hidrofobik yapıda olmasının katkıda bulunduğu gözlendi. Substrat olmayan bileşikler için varlığı tartışılan yüksek afiniteli bağlanma bölgesinin varlığı, hematinle yapılan deneylerle, bazik izozimler için saptandı. Fizyolojik ve patolojik hallerde bilirubin ve safra asitlerinin GST aktivitesi üzerine etkisi tartışıldı. 102
Özet (Çeviri)
Özet çevirisi mevcut değil.
Benzer Tezler
- Characterization and partial purification of sheep kidney and liver cytosolic glutathione-s-transferases: A comparative study
Koyun böbrek ve karaciğer glutatyon s-transferazlarının karşılaştırmalı olarak karakterize edilmesi ve kısmen saflaştırılması
AWNİ ALİ ABU-HİJLEN
Yüksek Lisans
İngilizce
1993
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MESUDE İŞCAN
- Echinocococcus granulorus hidatik kistlerinde oksidantların (ROÜ, RNÜ) etkinliği ve antioksidant sistemlerin araştırılması
The Effectiveness of oxidants (ROI, RNI) in Echinococcus granulorus hydatid cysts and an investigation of their antioxidandt systems
RAMAZAN AMANVERMEZ
- Katarakt oluşumu ile detonsifikasyon enzimlerinden glutatyon S-Transferaz (GST) enzimi polimorfizmi ve DNA tamir enzimlerinden XPD enzimi polimorfizmi arasındaki ilişkinin incelenmesi
Evaluation of possible relationship between cataract formation and GST enzyme polymorphism, a member of antioxidant system, and XPD enzyme polymorphism, a DNA repair enzyme
MUSTAFA ÜNAL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2001
Göz Hastalıklarıİstanbul ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. KEMAL DİKİCİ
PROF.DR. KAZIM DEVRANOĞLU
- Effects of dielectric barrier discharge cold plasma on the quality of dandelion root infusions
Dielektrik bariyer boşaltım soğuk plazmanın karahindiba kökü infüzyonlarının kalitesi üzerine etkisi
BERFİN EDA ELÇİK
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ CELALE KIRKIN GÖZÜKIRMIZI
- Fasciola hepatica ile enfekte koyunların kan ve karaciğer dokularında arginaz, nitrik oksit, bazı antioksidant enzimler ve lipid peroksidasyon düzeyleri ile karaciğer arginaz enziminin biyokimyasal özellikleri
Arginase, nitrik oxide, some antioxidant enzymes and levels of lipid peroxidation in tissues of blood and liver in sheep infected with fasciola hepatica and biochemical properties of arginase enzyme in liver
FULYA BENZER
Doktora
Türkçe
2001
Veteriner HekimliğiFırat ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF.DR. SEMA TEMİZER OZAN