Geri Dön

Expression and analysis of endo beta?1,4-mannanase of Aspergillus fumigatus in heterologous hosts

Aspergillus fumigatus endo beta-1,4-mannanazının heterolog ev sahibi organizmalarda ekspresyonu ve analizi

PDF İndir

  1. Tez No: 177594
  2. Yazar: GÖKHAN DURUKSU
  3. Danışmanlar: PROF. DR. UFUK BAKIR, PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoteknoloji, Genetik, Biotechnology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Arabidopsis thaliana, Arabidopsis thaliana
  7. Yıl: 2007
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Aspergillus fumigatus IMI 385708 (daha önce Thermomyces lanuginosus IMI 158749 olarak bilinen) küfünün hücre dışı endo-1,4-mannanaz (EC 3.2.1.78) geni klonlanmış ve Aspergillus sojae (ATCC 11906) ve Pichia pastoris GS115 `e aktarılmıştır. Her iki ekspresyon sisteminde de yüksek oranda üretim sağlanmıştır. Arabidopsis thaliana `da büyük ölçekli heterolog mannanaz üretimi girişimleri başarılı olamamıştır. İfade düzeyleri karşılaştırıldığında hücre dışı mannanaz aktivitelerine göre A. sojae P. pastoris'den daha iyi bir sistem olduğu görülmüştür. %1 glikoz içeren YpSs ortamında üç günlük inkübasyon sonunda mannanaz üretimi A. sojae (AsT1)'de 204 U/ml'ye ulaşmıştır. P. Pastoris (PpT1)'de ise metanol ile uyarıldıktan 10 saat sonra en yüksek mannanaz aktivitesi değerine ulaşmıştır (61 U/ml). Ekspres edilen enzimler saflaştırılmış ve incelenmiştir. Buna göre her iki enzimin spesifik aktivitesi 349 U/mg protein, AsT1' de optimum pH ve sıcaklık yaklaşık 4,5 ve 45 oC ve PpT1 'de ise 5,2-5,6 ve 60 oC olarak bulunmuştur. Hidrolitik aktivite gösteren P291 - P368 amino asitleri arası içermeyen kırılmış bir mannanaz formu (MAN-S) izole ve karakterize edilmiştir. MAN-S enzimi yaklaşık 6,5-8,0 aralığında pH ile 60 oC 'de sıcaklık optimumuna sahiptir. Keçi boynuzu sakızının mannanaz ile inkübasyonda glikoliz tarafından katalizlenen uzun veya nadir prebiyotik oligosakkarit üretimini olanak veren transglikozilasyon reaksiyonları gözlemlenmiştir. Değişik karbon kaynakları üzerindeki hidrolitik aktivite ürünleri PACE ve MALDI-TOF ile analizi yapılmıştır. Buna göre hekzamannoz ve daha küçük oligosakkaritler karakterize edilmiştir.

Özet (Çeviri)

Extracellular endo-1,4-mannanase (EC 3.2.1.78) gene of Aspergillus fumigatus IMI 385708 (formerly known as Thermomyces lanuginosus IMI 158749) was cloned and transformed into Aspergillus sojae (ATCC 11906) and Pichia pastoris GS115. High level of expression was achieved in both expression systems. Attempts to produce heterologous mannanase in Arabidopsis thaliana, suitable for large scale production, were not successful. Comparison of the expression levels of heterologous mannanase reveals that A. sojae is a better expression system than P. pastoris with respect to extracellular mannanase activity. The production of mannanase in A. sojae (AsT1) after 3 days of incubation reached 204 U/ml in YpSs containing 1 % glucose. In P. pastoris (PpT1), highest production was observed after 10 hrs of induction with methanol (61 U/ml). Expressed enzymes were purified and analyzed. Both enzymes have specific activity c. 349 U/mg protein with pH and temperature optimum of c. 4.5 and c. 60 oC for mannanases from AsT1 and c. 5.2-5.6 and c. 45 oC for mannanases from PpT1. A truncated form of mannanase (MAN-S) deleted at amino acids from P291 to P368, which still displayed hydrolytic activity was also isolated and characterized. MAN-S has pH and temperature optimum of c. 6.5-8.0 and c. 60 oC. During incubation of the mannanase on locust bean gum, transglycosylation reactions, in which longer or rare prebiotic oligosaccharides could be produced catalyzed by glycolysis, was detected. The products of hydrolytic activity of the enzyme on various carbohydrates were analyzed by PACE and MALDI-TOF. Accordingly, hexamannose and smaller oligosaccharides were characterized.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    176916

    Optimization of mannanase production from recombinant Aspergillus sojae and analysis of Galactomannan hydrolysis

    Rekombinant Aspergillus sojae de mannanaz üretiminin optimizasyonu ve Galaktomannan hidroliz analizi

    BENGÜ ÖZTÜRK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    Gıda MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK BAKIR

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL

  2. Tez No

    412

    Çok ince yapı teorisi

    Theory of hyperfine structure

    ŞEMSETTİN ALTINDAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1985

    Fizik ve Fizik MühendisliğiGazi Üniversitesi

    DOÇ. DR. ATİLLA ÖZMEN

  3. Tez No

    78

    Ameliyat öncesi hastaların ameliyata ilişkin duyguları, düşünceleri ve bilgi istekleri

    The Pre-operative patiensts feelings throughts and information requirements concerning their surgical operations

    KADRİYE BULDUKOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1987

    HemşirelikCumhuriyet Üniversitesi

    Hemşirelik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MELİHA ATALAY

  4. Tez No

    966

    Atmosfer etkisinde kalan metallerin korozyonu

    Corrosion of metals under the influence of the atmosphere

    ÜMİT ÖZDİLER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1987

    Kimya MühendisliğiGazi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HAYRİ YALÇIN

  5. Tez No

    143

    Çizgisel kaynaktan ışıyan elektromağnetik dalgaların mükemmel iletken silindir takkesinden optik gibi saçılması

    Başlık çevirisi yok

    ADNAN GÖRÜR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1986

    Makine MühendisliğiUludağ Üniversitesi

    Elektronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. H. ERGUN BAYRAKÇI

Geri Dön