Geri Dön

Hücre kültüründe tümör hücrelerine akıllı polimerik taşıyıcılar ile anttisens oligonükleotit aktarımı

Transfer of antisense oligonucletide into tumor cells in cell culture by using intelligent polymeric carriers

PDF İndir

  1. Tez No: 197204
  2. Yazar: ELA KIRSAÇ OSKAY
  3. Danışmanlar: PROF.DR. KEVSER PİŞKİN ÖZDEN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
  6. Anahtar Kelimeler: Antisens Gen Terapi, c-MYC, Melanoma, Poli(N PA), SK-MEL-30, Antisens Gene Therapy, c-MYC, Melanoma, Poly(NIPA), SK-MEL-30
  7. Yıl: 2005
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 115

Özet

HÜCRE KÜLTÜRÜNDE TÜMÖR HÜCRELER NE AKILLI POL MER KTAŞIYICILAR LE ANT SENS OL GONÜKLEOT T AKTARIMIEla Kırsaç OskayÖZBu tezin amacı, melanoma hücrelerinin c-myc gen ekspresyonunu baskılayarakhücrelerin çoğalmasını durdurmak için yüksek transfeksiyon etkinliği gösterenpolimer-anti c-myc ODN konjugatlarını oluşturmak ve karakterize etmektir.Bu amaçla ilk önce karboksil uçlu Poli ( N PA)'in sentezi gerçekleştirilmiş vesuda çözünebilen karbodiimid (EDAC) varlığında dallanmış ve 2 kDa molekülağırlıklı PE ile kopolimerleri oluşturulmuştur. Kopolimer çeşitli yöntemler ilekarakterize edilmiştir; Kopolimerizasyon verimi gravimetrik olarak % 40hesaplanmıştır. Molekül ağırlığı viskozimetreyle ölçülmüş ve 14670 olarakhesaplanmıştır. Kopolimerizasyon oluşumu FTIR ve 1H-NMR ile gösterilmiştir.Kopolimerizasyon sonucu LCST değerlerinin 320C'den 35,5-37 0C'ye yükseldiğigörülmüştür.Anti-c-myc oligonükleotitler c-myc mRNA'nın 5' başlangıç kodonunakomplementer olan 15 bazlık, baz sırası: 5' AACGTTGAGGGGCAT-3' olanoligonükleotitleri ile poli(N P)/PE kopolimerinin farklı oranlarda konjugatlarıoluşturulmuştur. Oluşturulan konjugatlar poli akrilamid jel elektroforezindeincelenmiş, karakterizasyonları ve DNA'ya bağlanma eğilimleri jelde geri kalma ilebelirlenmiştir. Konjugatların çift sarmal, A-T ve G-C baz dizilerine eşit olarakbağlanabildikleri görülmüştür. Ağırlıkça farklı oranlarda (6, 9 ve 12) oluşturulankonjugatların boyutları zeta sizer ölçülmüştür. Poli(N PA) ve dallanmış 2000molekül ağırlığında PE içeren kopolimerlerden oluşan konjugat boyutları oran 6, 9ve 12'ye göre sırasıyla, 25 0C'de 281±8, 350.2±22 37 0C'deve 619±105,232.9±12, 255±15 ve 520±44 olarak bulunmuştur. Poli(N PA) ile oluşturulankopolimerin sıcaklık davranışının konjugat oluşumuna etkisi, ölçülmüş,poli(N PA)'nın uyarı-cevap özelliğine bağlı olarak konjugatların boyutlarındaküçülme olduğu görülmüştür. Anti-c-MYC Oligonükleotitinin, PEI2Dhomopolimerinin ve poli (NiPA)/PEI2D kopolimerinin yükleri ölçüldüğündesırasıyla, - 8,2, + 4,1 ve + 3,7 olarak bulunmuştur . Ağılıkça 6, 9 ve 12oranlarında hazırlanan konjugatların yükleri ise 3,1, 3,6 ve 4,2 olarak ölçülmüştür.Kopolimerlerin konjugatlarının toksik etkileri fibroblast hücrelerinde MTTyöntemiyle araştırılmıştır. Kopolimerlerin toksik etkileri düşük çıkmış konjugatlardaise toksitite ortadan kalkmıştır.Polimer/ODN konjugatlarının melanoma hücrelerinin çoğalmaları üzerindekietkisi hücre kültür ortamında MTT yöntemiyle araştırılmıştır. Maksimum çoğalmabaskılayıcı etki uygulamanın 48' nci saatinde % 48 olarak oran 9'da görülmüştür.Antisens oligonükleotit aktarımında elde edilen sonucun poli(N PA)'insıcaklılığa duyarlılık özelliği ile moleküllerin boyutlarını vücut sıcaklığında aşağıçekmesi olduğu düşünülmektedir.Sonuç olarak sıcaklığa duyarlı, biyolojik sınırlarda kalacak miktarda toksik,polikatyonik poli(N PA)/PE taşıyıcı sistemin SK-MEL-30 melanoma hücrelerineanti-c-MYC oligonükleotitlerin etkin şekilde aktarımını sağladığı ve anti-c-MYColigonükleotitlerinin protein ekspresyonu engelleyerek kanser hücrelerininçoğalmasını baskıladığı tespit edilmiştir.

Özet (Çeviri)

TRANSFER OF ANTISENSE OLIGONUCLETIDE INTO TUMOR CELLS INCELL CULTURE BY USING INTELLIGENT POLYMERIC CARRIERSEla Kırsaç OskayABSTRACTThe aim of this thesis is to form and characterize polymer-anti c-myc ODNconjugates in order to provide high transfection efficiency and significantsuppresive effects on c-myc expression of myeloma cells and thereby inhibitingtheir growth.Poly ( NIPA) with carboxyl ends is synthesized and in the presence of watersoluble carbodiimide (EDAC) it is copolymerized with branched PEI ( 2 kDa) .Copolymer is analysed by a series of methods. Copolymerisation efficiency iscalculated gravimetrically as 40 %. The molecular weight is measured byviscosimetry and calculated as 14670. Copolimerisation was furher shown by FTIRand 1H-NMR analyses. Following copolimerisation LCST value increased to 35,5-37 0C from 32 0C . Anti-c-myc oligonucleotides (ODN) were complementary tothe 5? start codon of c-myc mRNA having a sequence of 5?-AACGTTGAGGGGCAT-3?. ODNs were combined with poly (NIPA)/PEI copolymerat different ratios. The conjugates were then analysed with polyacrylamide gelelectrophoresis ( PAGE) and gel retardation was determined for theircharacterisation and assessment of DNA binding affinities. Congugates were ableto bind duplex, AT rich and GC rich sequences equally. Copolymer andconjugates of copolymers with ODNs at different ratios per weight (6, 9 ve 12)were measured by zeta sizer. The sizes at 6, 9 ve 12 ratios were found to be at25 0C 281±8, 350.2±22 and 619±105, at 37 0C 232.9±12, 255±15 and 520±44respectfully. The size of the conjugates decreased at 370C as a result of thecopolymers temperature response behaviour. The charges of anti c-myc ODN,PEI2D homopolymer ve poly (NIPA)/PEI2D copolymer were measured as - 8,2, +4,1 and +3,7 respectfully. A decrease in the electropositivity of PEI is noted uponcopolymerisation with poly (NIPA).Copolymers and conjugates were tested fot toxicity using fibroblast cells anddetermined by MTT test. The copolymer had low levels of toxicity and this wasimproved by conjugate formation.The effects of ODN/polymer conjugates on the growth of melanoma cells weredetermined in cell culture and by measuring their viability with MTT. Themaximum growth suppressive effect was 48% and was obtained at polymer/ODNratio of 9 after 48 hours declining gradually.The efficient transfection achieved by poly (NIPA)/PEI is thought to be due to itstemperature sensitive nature that allows it to decrease its dimentions at bodytemperature.It is concluded that, temperature sensitive policationic poly (NIPA)/PEI providesan efficient vector with very low toxicity for c-myc antisense delivery to SK-MEL-30melanoma cells which results in c-myc and cell growth suppression.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    724196

    Transcription analysis of two lncRNAs, HOTAIR and TINCR, in ASPC-1 and BXPC-3 cancer cell lines

    ASPC-1 ve BXPC-3 kanser hücre hatlarında iki lncRNA, HOTAIR ve TINCR'nin transkripsiyon analizi

    ADNAN OBEID

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    BiyomühendislikBahçeşehir Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DR. ZEYNEP TACER CABA

    PROF. DR. GÜLAY BULUT

  2. Tez No

    861093

    B16-F10 melanoma hücre kültüründe bor elementinin sitotoksik etkisi ile oksidatif stres ve apoptoz üzerine etkilerinin incelenmesi

    Investigation of the boron element's cytotoxic effects and effects on oxidative stress and apoptosis in B16-f10 melanoma cell culture

    MEHMET VAROL

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Kulak Burun ve BoğazKütahya Sağlık Bilimleri Üniversitesi

    Kulak Burun Boğaz Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BUĞRA SUBAŞI

  3. Tez No

    688199

    THP-1 kökenli M1 makrofaj hücreleri ile indüklenen nöroinflamatuar yanıtın düzenlenmesinde protokateşuik asit'in etkilerinin hücre kültüründe araştırılması

    Investigation of the effects of protocatechuecuic acid in cellculture on regulating the neuroinflammatory response induced by M1 macrophage cells of THP-1 origin

    FIDAN BAYRAMOVA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyoteknolojiEskişehir Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÖZDE AYDOĞAN KILIÇ

    PROF. DR. MİRİŞ DİKMEN

  4. Tez No

    536074

    Çocukluk çağı solid tümörlerinde retinoik asitin PI3K/AKT ve RAS/MAPK yolakları üzerine etkisinin western blot yöntemi ile saptanması

    Determining the effect of retinoic acid on PI3K/AKT and RAS/MAPK pathways on childhood solid tumors by using western blot

    ÖZDE ELİF GÖKBAYRAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    OnkolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SAFİYE AKTAŞ

  5. Tez No

    866280

    miR-21 ifadesi arttırılan HEPG2 karaciğer kanseri hücresinde oleandrinin hücre sağkalım ve hücre ölüm mekanizmalarına etkilerinin incelenmesi

    Investigation of the effects of oleandrin on cell survival and cell death mechanisms in HEPG2 liver cancer cell with increased miR-21 expression

    EBRAR KARAKAYA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Biyolojiİstanbul Kültür Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGE RENCÜZOĞULLARI

Geri Dön