Geri Dön

Toprak kökenli mikrofunguslarda lipaz üreten suşların araştırılması, lipaz saflaştırılması ve karakterizasyonu

Investigating of lipase producing strains of microfungi with origin soil, purification and characterization of lipase

  1. Tez No: 233646
  2. Yazar: SERDAR ÜLKER
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ŞENGÜL ALPAY KARAOĞLU
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biyoloji, Biochemistry, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2009
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 86

Özet

Bu çalışmada, Rize ilinde çay yetiştirilen topraklardan izole edilen 15 cinse ait 213 mikrofungusun ekstraselülar lipaz aktiviteleri kalitatif olarak test edildi. Bu mikrofunguslar arasında en yüksek aktiviteye sahip olan tür Mucor hiemalis f. corticola IDM11B olarak belirlendi. Bu suşun üretmiş olduğu lipaz saflaştırılarak karakterize edildi.M. hiemalis f. corticola IDM11B suşuna ait ekstraselular lipaz, amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz, Sephadex G-75'in kullanıldığı jel filtrasyon ve Q-Sepharose Fast Flow iyon değişim kromatografileri kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırma basamaklarında fraksiyonlardaki toplam protein miktarları ve lipaz aktiviteleri spektrofotometrik yöntemle belirlendi. Enzim, %27.7 verimle 12.63 kat saflaştırıldı. Saflaştırma basamaklarında elde edilen protein örnekleri SDS-PAGE'te yürütüldü ve moleküler ağırlıklarına göre ayrımları yapıldı. Ayrıca analitik jel filtrasyon yapılarak, enzimin moleküler ağırlığının 46 kDa olduğu belirlendi. Saflaştırılmış enzimin optimum pH'sı, optimum sıcaklığı, sıcaklık ve pH stabilitesi, Km ve Vmaks değerleri hesaplandı. Enzim aktivitesi üzerine bazı metal iyonlarının etkisi incelendi. Enzimin optiumum pH'sı 7.0, optimum sıcaklığı 40 °C olarak belirlendi. pH 7.0- 9.0 aralığında, 4 °C'de 72 saat inkübasyondan sonra enzimin oldukça kararlı olduğu gözlendi. Isıl kararlılık eğrisi incelendiğinde, 90 dakikalık inkübasyon sonunda enzimin 30 °C'de kararlı olduğu, 50 °C'ye kadar aktivitesini % 50 civarında koruduğu tespit edildi. p-NPP varlığında M. hiemalis f. corticola IDM11B lipazının Km ve Vmaks değerleri, Hanes-Woolf grafiği yardımıyla sırasıyla, 1.327 mM ve 91.11 µmol/dk olarak belirlendi. Farklı son konsantrasyonlardaki bazı metal iyonlarının aktiviteyi önemli oranda etkilemediği belirlendi.

Özet (Çeviri)

In this study, extracellular lipolytic activities of 213 microfungal strains belonging to 15 genera isolated from tea growing soil in Rize were investigated. Among these microfungi, Mucor hiemalis f. corticola IDM11B was found as a strain with the highest lipolytic activity. The extracellular lipase of Mucor hiemalis f. corticola IDM11B was homogeously purified using a combination of ammonium sulphate precipitation, dialyze, gel filtration coloumn chromatography with Sephadex G-75 and ion exchange chromatography with Q-Sepharose Fast Flow. The total protein quantities and lipase activities in the fractions through purification steps were determined by spectrophotometric method. Enzyme was purified 12.63 folds with a yield of 27.7%. Protein samples collected at the purification steps were run with SDS-PAGE, and seperated in terms of molecular weights. In addition, molecular weight of enzyme was deteminated to be 46 kDa by analytical gel filtration. Optimum pH, optimum temperature, stability of both temperature and pH, Km, and Vmaks of purified enzyme were calculated and effects of some metal ions on enzyme activity were investigated. Optimum pH and optimum temperature of enzyme were determined as 7.0 and 40°C, respectively. The enzyme activity was observed to be quite stable at the pH range of 7.0?9.0, after 72 hours incubation at 4 °C. When thermostability data were evaluated, it was seen that the enzyme was stable at 30 °C after 90 minutes incubation and nearly retained 50% of its original activity until 50 °C. In the presence of p-NPP as substrate, Km and Vmaks values of M. hiemalis f. corticola IDM11B lipase were calculated by Hanes-Woolf plot as 1.327 mM and 91.11 µmol/dk, respectively. It was determined that different final concentrations of some metal ions did not significantly affect enzyme activity.

Benzer Tezler

  1. Kavun solgunluk patojeni Fusarium oxysporum f.sp. melonis'e karşı farklı kompostlardan elde edilen mikroorganizmaların in vitro antifungal etkileri

    Antifungal effects of microorganisms isolated from different composts against melon wilt pathogen Fusarium oxysporum f.sp. melonis in vitro

    SENEM ÇAKIRBEY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    ZiraatMustafa Kemal Üniversitesi

    Bitki Koruma Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. EMİNE MİNE SOYLU

  2. Domates bitkilerinde sorun toprak kökenli bazı fungal hastalık etmenleri ile mücadelede kök bakterilerinin kullanılma potansiyellerinin belirlenmesi

    Determination of potential use of rhizobacteria in the control of soil-borne fungal disease agents of tomato

    ŞİRİN YILMAZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    BiyolojiMustafa Kemal Üniversitesi

    Ziraat Bölümü

    DOÇ. DR. SONER SOYLU

  3. Crimson Tide karpuz çeşidinde farklı anaç ve değişik depo sıcaklıklarının muhafaza süresince kalite özelliklerinin değişimine etkileri

    Effects of the change in quality characteristics during storage of the different rootstock and different store temperatures on Crimson Tide watermelon cultivar

    ÖZAY BALTAER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    ZiraatMustafa Kemal Üniversitesi

    Bahçe Bitkileri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AHMET ERHAN ÖZDEMİR

  4. Ankara ve Konya illeri şeker pancarı üretim alanlarında toprak kökenli virüslerin araştırılması

    Investigations of soil-borne viruses in sugar beet production areas of Ankara and Konya provinces

    VEDAT CEYLAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    ZiraatOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Bitki Koruma Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NAZLI DİDE KUTLUK YILMAZ

  5. Örtü altında yetiştirilen hıyarlarda sorun olan başlıca toprak kökenli patojenler üzerinde bazı biyofungisitlerin etkinliğinin belirlenmesi

    Determination on efficacy of some biofungicides on main soil-borne pathogens causing diseases on cucumber under protected cultivation

    HÜSNÜ YORGANCI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    ZiraatAdnan Menderes Üniversitesi

    Bitki Koruma Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÖMER ERİNCİK