Geri Dön

C2C12 fare miyoblast hücre hattında kalıcı transfeksiyonun gerçekleştirilmesi

Establishment of stable transfection in C2C12 mouse myoblast cell line

  1. Tez No: 236903
  2. Yazar: MEHMET DENİZ AKYÜZ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. PERVİN DİNÇER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2009
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 49

Özet

Kalıcı transfeksiyon, transfeksiyon yapılmış hücrelerde, ilgilenilen genlerin ifadesinin kontrolü, bir genin susturulması ya da belirli bir proteinin yüksek oranda ifadesinin hücre açısından fizyolojik sonuçlarının gözlenmesi gibi çeşitli amaçlar için kullanılan bir tekniktir. Kalıcı transfeksiyon ile, ilgilenilen genin genoma katılması ve mitotik bölünmeler sonucunda yavru hücrelere aktarılması sağlanır. Bu tez çalışmasının amacı, C2C12 fare miyoblast hücre hattında tetrasiklin ile uyarılabilen gen ifade sistemi oluşturarak kalıcı transfeksiyonu gerçekleştirmektir. Bu nedenle tet repressor (tetR) genini ve blastisidin ilaç direnç genini içeren“pcDNA6/TR”plazmid vektörü C2C12 fare miyoblast hücre hattına transfeksiyonu gerçekleştirilmiştir.pcDNA6/TR plazmid vektörünün C2C12 fare miyoblast hücre hattına kalıcı olarak transfeksiyonunun sağlandığının kanıtlanması için, pcDNA4/TO-EGFP plazmid vektörünün C2C12 hücrelerine geçici olarak transfeksiyonu gerçekleştirilmiş, bunu takiben hücre kültür ortamına tetrasiklin ilave edilerek yeşil floresan protein (EGFP)'in ifadesi floresan mikroskop altında gözlenmiştir.Kalıcı transfeksiyonun gerçekleştirildiği C2C12 fare miyoblast hücre hattının elde edilmesi sonucunda ilgilenilen herhangi bir genin ifade düzeyini kontrollü bir şekilde değiştirerek bu genin kasdaki işlevini ortaya koymak amaçlı yapılacak bir çok çalışma için yararlı olacak bir sistem oluşturulmuştur. Ayrıca, tetrasiklin ile uyarılabilir gen ifade sisteminin oluşturulması sırasında edinilen tecrübeler, ilerleyen dönemlerde bu ve buna benzer kalıcı transfeksiyon gerektiren sistemlerin başka hücre hatlarında oluşturulmasına katkı sağlayacaktır.

Özet (Çeviri)

Stable transfection is a technique used for versatile reasons such as gene silencing, inducing the expression of a gene of interest and observing the physiological effects of the overexpression of a target protein. Stable transfection occurs when the gene of interest is inserted in the nuclear genome of the cell and is transmitted to the daughter cells after mitosis. In this thesis study, in order to generate a stable cell line, we transfected the ?pcDNA6/TR? plazmid vector, which contains tetracycline repressor gene and the blasticidin drug resistance gene to the C2C12 mouse myoblast cell line.To prove that the pcDNA6/TR plazmid vector was transfected stably to the C2C12 mouse myoblast cell line, we transiently transfected the pcDNA4/TO-EGFP plazmid vector and observed the EGFP expression by fluorescence microscopy.The establishment of the stable tranfected C2C12 mouse myoblast cell line created a useful tool for the investigation of the effects of protein expression changes in a muscle like environment. The experience acquired while creating a tetracycline inducible expression system, will contribute to further research studies involving such inducible expression systems.

Benzer Tezler

  1. Fare miyoblast hücre hattında (C2C12 hücre hattı) klf5 geni üzerinde hedefli insersiyon gerçekleştirilmesi

    Generation of targeted insertion in the klf5 gene of mouse myoblasts (C2C12 cells)

    DUYGU AKÇAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. YUSUF ÇETİN KOCAEFE

  2. Hidrojen peroksite maruz kalan fare miyoblast hücre hattında oluşan atrofiye, melatonin uygulanmasının kalpain-1 ifadelenmesine ve atrofik morfolojiye etkisinin incelenmesi

    Investigation of the effect of melatonin administration on calpain-1 expression and atrophic morphology on atrophy of mouse Myoblast cell line exposed to hydrogen peroxide

    NAZLI KARIMISAKHVIDI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    FizyolojiHacettepe Üniversitesi

    Fizyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MURAT TİMUR BUDAK

  3. Kas dejenerasyonunda ve farklılaşmasında Klf5 geninin rolünün araştırılması

    Investigation of the role of Klf5 gene in muscle degeneration and differentiation

    YILMAZ YILDIZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Tıbbi BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÇETİN KOCAEFE

  4. Kolorektal karsinogenezde rol oynayan tümör baskılayıcı genlerin CRISPR/Cas9 sistemi ile susturulması

    Silencing of tumor suppressor genes which are playing role in colorectal carcinogenesis by CRISPR/Cas9 system

    ÖZGE ATCI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyolojiGazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KANUNİ BARBAROS BALABANLI

    DOÇ. DR. AYTEKİN AKYOL

  5. Poli(3-hidroksibutirat) (P3HB) - poli-β-alanin (PBA) fibröz doku iskelelerinin iskelet kası rejenerasyonundaki etkinliğinin incelenmesi

    Investigation of poly(3-hydroxybutyrate) (P3HB) - poly-β-alanine (PBA) fibrous tissue scaffolds in the effectiveness of skeletal muscle regeneration

    ELVAN KONUK TOKAK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Nanoteknoloji ve Nanotıp Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU