C2C12 fare miyoblast hücre hattında kalıcı transfeksiyonun gerçekleştirilmesi
Establishment of stable transfection in C2C12 mouse myoblast cell line
- Tez No: 236903
- Danışmanlar: PROF. DR. PERVİN DİNÇER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2009
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 49
Özet
Kalıcı transfeksiyon, transfeksiyon yapılmış hücrelerde, ilgilenilen genlerin ifadesinin kontrolü, bir genin susturulması ya da belirli bir proteinin yüksek oranda ifadesinin hücre açısından fizyolojik sonuçlarının gözlenmesi gibi çeşitli amaçlar için kullanılan bir tekniktir. Kalıcı transfeksiyon ile, ilgilenilen genin genoma katılması ve mitotik bölünmeler sonucunda yavru hücrelere aktarılması sağlanır. Bu tez çalışmasının amacı, C2C12 fare miyoblast hücre hattında tetrasiklin ile uyarılabilen gen ifade sistemi oluşturarak kalıcı transfeksiyonu gerçekleştirmektir. Bu nedenle tet repressor (tetR) genini ve blastisidin ilaç direnç genini içeren“pcDNA6/TR”plazmid vektörü C2C12 fare miyoblast hücre hattına transfeksiyonu gerçekleştirilmiştir.pcDNA6/TR plazmid vektörünün C2C12 fare miyoblast hücre hattına kalıcı olarak transfeksiyonunun sağlandığının kanıtlanması için, pcDNA4/TO-EGFP plazmid vektörünün C2C12 hücrelerine geçici olarak transfeksiyonu gerçekleştirilmiş, bunu takiben hücre kültür ortamına tetrasiklin ilave edilerek yeşil floresan protein (EGFP)'in ifadesi floresan mikroskop altında gözlenmiştir.Kalıcı transfeksiyonun gerçekleştirildiği C2C12 fare miyoblast hücre hattının elde edilmesi sonucunda ilgilenilen herhangi bir genin ifade düzeyini kontrollü bir şekilde değiştirerek bu genin kasdaki işlevini ortaya koymak amaçlı yapılacak bir çok çalışma için yararlı olacak bir sistem oluşturulmuştur. Ayrıca, tetrasiklin ile uyarılabilir gen ifade sisteminin oluşturulması sırasında edinilen tecrübeler, ilerleyen dönemlerde bu ve buna benzer kalıcı transfeksiyon gerektiren sistemlerin başka hücre hatlarında oluşturulmasına katkı sağlayacaktır.
Özet (Çeviri)
Stable transfection is a technique used for versatile reasons such as gene silencing, inducing the expression of a gene of interest and observing the physiological effects of the overexpression of a target protein. Stable transfection occurs when the gene of interest is inserted in the nuclear genome of the cell and is transmitted to the daughter cells after mitosis. In this thesis study, in order to generate a stable cell line, we transfected the ?pcDNA6/TR? plazmid vector, which contains tetracycline repressor gene and the blasticidin drug resistance gene to the C2C12 mouse myoblast cell line.To prove that the pcDNA6/TR plazmid vector was transfected stably to the C2C12 mouse myoblast cell line, we transiently transfected the pcDNA4/TO-EGFP plazmid vector and observed the EGFP expression by fluorescence microscopy.The establishment of the stable tranfected C2C12 mouse myoblast cell line created a useful tool for the investigation of the effects of protein expression changes in a muscle like environment. The experience acquired while creating a tetracycline inducible expression system, will contribute to further research studies involving such inducible expression systems.
Benzer Tezler
- Fare miyoblast hücre hattında (C2C12 hücre hattı) klf5 geni üzerinde hedefli insersiyon gerçekleştirilmesi
Generation of targeted insertion in the klf5 gene of mouse myoblasts (C2C12 cells)
DUYGU AKÇAY
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YUSUF ÇETİN KOCAEFE
- Hidrojen peroksite maruz kalan fare miyoblast hücre hattında oluşan atrofiye, melatonin uygulanmasının kalpain-1 ifadelenmesine ve atrofik morfolojiye etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of melatonin administration on calpain-1 expression and atrophic morphology on atrophy of mouse Myoblast cell line exposed to hydrogen peroxide
NAZLI KARIMISAKHVIDI
- Kas dejenerasyonunda ve farklılaşmasında Klf5 geninin rolünün araştırılması
Investigation of the role of Klf5 gene in muscle degeneration and differentiation
YILMAZ YILDIZ
Doktora
Türkçe
2010
Tıbbi BiyolojiHacettepe ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÇETİN KOCAEFE
- Kolorektal karsinogenezde rol oynayan tümör baskılayıcı genlerin CRISPR/Cas9 sistemi ile susturulması
Silencing of tumor suppressor genes which are playing role in colorectal carcinogenesis by CRISPR/Cas9 system
ÖZGE ATCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyolojiGazi ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KANUNİ BARBAROS BALABANLI
DOÇ. DR. AYTEKİN AKYOL
- Poli(3-hidroksibutirat) (P3HB) - poli-β-alanin (PBA) fibröz doku iskelelerinin iskelet kası rejenerasyonundaki etkinliğinin incelenmesi
Investigation of poly(3-hydroxybutyrate) (P3HB) - poly-β-alanine (PBA) fibrous tissue scaffolds in the effectiveness of skeletal muscle regeneration
ELVAN KONUK TOKAK
Doktora
Türkçe
2024
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiNanoteknoloji ve Nanotıp Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU