Geri Dön

Miyokardiyal rejenerasyon için sıçan kemik iliği kök hücrelerinden kardiyomiyositlerin farklılaştırılması ve karakterizasyonu

Differentiaiion and characterization of cardiomyocytes from rat bone marrow mesenchymal stem cells for myocardial regeneration

PDF İndir

  1. Tez No: 244980
  2. Yazar: HANDAN SEVİM
  3. Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ALİ ONUR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Fizyoloji, Biology, Physiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2009
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 89

Özet

Bu çalışmada kemik iliği mezenşimal kök hücreleri 5-Azacytidine (5-Aza) uygulaması ile kardiyomiyosit yönünde farklılaştırılmış ve karakterize edilmiştir.Deneysel çalışmanın ilk aşamasında steril koşullar altında sıçan tibia ve femurundan kemik iliği toplanmış ve mezenşimal kök hücreler yoğunluğa bağlı çöktürme yöntemi ile izole edilmiştir. Standart kültür koşullarında inkübe edilen hücrelerin 4. pasaja kadar gelişimi takip edilmiştir. Başlangıç hücreleri (P0) ve diğer pasajlardaki (P1, P2, P3, P4) kemik iliği mezenşimal kök hücrelerinin karakterizasyonu, aminopeptidaz-N (CD13) ve integrin-?1 (CD29) yüzey proteinlerinin Teksas Red (TR) florokromuna özgü antikorlarla immunofloresan olarak boyanmasıyla yapılmıştır. 5-Aza'nın kemik iliği mezenşimal kök hücrelerinin canlılığına olan etkisi MTT yöntemi ile incelenmiştir. Karakterizasyon ve MTT analiz sonuçlarına göre seçilen pasajlardaki (P2 ve P3) kemik iliği mezenşimal kök hücreleri, kardiyomiyositlere farklılaştırmak amacıyla farklı yoğunluklardaki (1, 3, 5, 10 ve 50 µM) 5-Aza ile 24 saat muamele edilmiş ve uygulama yapılmayan grup kontrol olarak değerlendirilmiştir. Farklılaştırılan hücreler dört hafta boyunca inkübe edilmiş ve karakterizasyon için 1., 2., 3. ve 4. haftalarda desmin ve kardiyak troponin-T ile TR ve FITC florokromuna özgü antikorlarla immunofloresan yöntemle boyanarak gösterilmiş, hücrelerdeki kardiyak troponin-I miktarı ise ELISA yöntemi ile ölçülmüştür.Sonuçlar farklı pasajlardaki (P2 ve P3) kemik iliği mezenşimal kök hücrelerinin 5-Aza uygulaması ile kardiyomiyositlere farklılaştığını göstermiştir. Farklılaşan hücrelerin öncelikle hücre kümeleri oluşturduğu ve özellikle bu kümelerin desmin ve kardiyak troponin-T bulundurduğu gösterilmiştir. Karakterizasyonda immunofloresan boyamalar sonucunda en iyi görüntü ikinci pasajda ve iki haftalık inkübasyon süresinde elde edilmiştir. Kardiyak troponin-I ELISA yöntemi sonuçlarına göre en yüksek ölçümler 3 ve 5 µM 5-Aza içeren gruplarda elde edilmiştir.Bu sonuçlar, günümüz koşullarında kalp hastalıkları için kullanılan tedavi yöntemleri düşünüldüğünde farklılaştırılan mezenşimal kök hücrelerin kalp kası hasarının tedavisi amacıyla kullanılmasında hücresel boyutta tedavi için ümit vericidir. Bu nedenle bu çalışmanın hücresel kaynaklı kalp kası hasarı tedavisinde ilk adımı oluşturabileceği düşünülmektedir.

Özet (Çeviri)

In this study, cardiomyocytes were differentiated and charecterized from bone marrow mesenchymal stem cells with 5-Azacytidine (5-Aza) treatment.At the first step of the experimental study, bone marrow were collected from tibia and femura of rats and the mesenchymal stem cells were isolated with a density gradient method under sterile conditions. Bone marrow mesenchymal stem cells were incubated at the standart culture conditions until passage 4 and their growth potential was observed under inverted microscope. For the characterization of bone marrow mesenchymal stem cells, at starting point (P0) and the other passages (P1, P2, P3 and P4), immunoflorescein staining method was performed by using Teksas Red (TR) fluorochroms for specific cell surface proteins aminopeptidase-N (CD13) and integrin ?-1 (CD 29). The effects of 5-Aza on bone marrow mesenchymal stem cell viability were examined by MTT method. Bone marrow mesenchymal stem cells at P2 and P3 were sellected for cardiomyocyte differentiation according to the results of characterization and MTT analysis. P2 and P3 cells were exposed to different concentrations (1, 3, 5, 10 and 50 µM) of 5-Aza for 24 hours, untreated cells used as the control group. Differentiated cells were incubated for 4 weeks and stained with cardiomyocyte specific markers desmin and cardiac troponin-T by using TR and FITC fluorochroms and cardiac troponin-I levels was measured with ELISA method for the cardiomyocyte characterization.The results showed that bone marrow mesenchymal stem cells at different pasages (P2 and P3) can differentiate into cardiomyocytes with 5-Aza treatment. Differentiated cells started to form cell colonies and expecially these colonies stained with desmin and cardiac troponin-T. On the strenght of immunofluorescein staining methods the best results were taken at second passage and 2 week?s incubation period. In respect of ELISA method results 3 µM and 5 µM 5-Aza dilution displayed the highest amount of cardiac troponin-I.Considering today's treatment methods that are used for heart disease differentiated mesencyhmal stem cells are considered to have significant applications in cellular approaches for regeneration of heart muscle losses. It can be said that this study seems to provide a new approach for cellular cardiac therapy.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    244981

    Miyokardiyal rejenerasyonda kullanılmak üzere kültüre edilmiş sıçan kemik iliği mezenşimal kök hücrelerinin iskemik sıçan kalbine transplantasyonu

    Transplantation of mesenchymal stem cells into the ischemic rat myocardium for myocardial regeneration

    ESİN AKBAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET ALİ ONUR

  2. Tez No

    517385

    Sıçanlarda deneysel karaciğer iskemi-reperfüzyon modelinde karaciğer ve uzak organ hasarının değerlendirilmesi ve bu hasara quercetinin etkileri

    Evaluation of hepatic and remote organ injury in experimental liver ischemia-reperfusion model in rats and the effects on quercetin to this damage

    NEZİHA SENEM ARI

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Histoloji ve EmbriyolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ESİN YULUĞ

  3. Tez No

    908848

    Cardiomyocyte loaded polymeric microsphere design for treatment of cardiac regeneration after myocardial ischemia and in vitro evaluation

    Miyokardiyal iskemi sonrası kalp kası rejenerasyonu için kardiyomiyosit yüklü polimerik mikrokürelerin hazırlanması ve in vitro değerlendirilmesi

    BERNA ATEŞ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    BiyomühendislikAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi

    Biyomedikal Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÖZGÜL GÖK ÖZATAY

    PROF. DR. ŞAHİN ŞENAY

  4. Tez No

    472988

    Molecular mechanism of cardiac regeneration

    Kalp rejenerasyonun moleküler mekanizmaları

    GALİP SERVET ASLAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    BiyoteknolojiYeditepe Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. FATİH KOCABAŞ

  5. Tez No

    721060

    Deselülerize miyokard-elastomer yamaların hazırlanması ve ın vıtro performanslarının incelenmesi

    Preparation of decellularized myocardium-elastomer patches and investigation of in vitro performance

    GÜLÇİN GÜNAL KARATAŞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HALİL MURAT AYDIN

Geri Dön