Arabidopsis Thaliana bitkisinde sitokinin sinyal yollarında görev alan AHP1 proteinine karşı monoklonal antikorların üretimi, seçimi ve karakterizasyonu
Production, selection and characterization of monoclonal antibodies against AHP1 protein that has function in Arabidopsis Thaliana signaling pathway
- Tez No: 256388
- Danışmanlar: PROF. DR. S. SEYHAN TÜKEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 77
Özet
Bu çalışmada Arabidopsis thaliana bitkisinde sitokinin sinyal yollarında görev alan AHP1 proteinine karşı monoklonal antikorlarının üretimi, seçimi ve immünoanalizi yapılmıştır. Monoklonal antikorlar Ni Sepharose yüksek performanslı kromatografi kolonu kullanılarak monoklonal antikorlar saflaştırılmıştır. Saflaştırma sonucu elde edilen monoklonal antikorların karakterizasyonu ELISA ve Western Blot teknikleri kullanılarak incelenmiştir. Yapılan deneyler sonucunda üç monoklonal antikorun monospesifik, diğer iki monoklonal antikorun ise polispesifik karakterde olduğu tespit edilmiştir. İzotipleme yöntemi ile monoklonal antikorların IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgGM ve IgGA ikincil antikorları ile etkileşimi incelenerek; monoklonal antikorların ikincil antikorlardan hangisi ile daha iyi reaksiyon verdiği absorbans değerlerinin kıyaslanmasıyla belirlenmiştir. Monoklonal antikorlar kaba özütler üzerinde denenerek monospesifik karakterli antikorlardan ikisinin sadece AHP1 proteiniyle reaksiyon verdiği, diğer monospesifik karakterli monoklonal antikorun AHP1 proteininin yanı sıra AHP6 proteiniyle çapraz reaksiyon verdiği, polispesifik karakterli antikorların ise AHP1,2,3,4,5,6 proteinleriyle reaksiyon verdiği belirlenmiştir. Monoklonal antikorlara hassasiyet testi yapılarak monoklonal antikorların seyreltme oranları hesaplanmıştır. Monoklonal antikorlardan birisinin epitop haritalandırılması gerçekleştirilmiştir. AHP1 antijeninin bu monoklonal antikora KVDPHVHQLK epitopu üzerinden bağlandığı MS/MS spektrofotometrisi ile belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
In the present study; production, selection and characterization of monoclonal antibodies against AHP1 protein that has function in Arabidopsis thaliana signaling pathway are completed. Monoclonal antibodies are purified by using Ni Sepharose high performance chromatography column. Monoclonal antibodies were characterized by using ELISA and Western Blot techniques and three of them are classified as monospecific and two of them classified as polyspecific. Using by isotyping method; monoclonal antibodies are tested on IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgGM and IgGA (secondary antibodies) to find out which secondary antibody gives best reaction with antibodies. Antibodies are tested on crude extracts and as a result; two of the monospecific antibodies are only specific to AHP1 protein, other monospecific antibody is specific to AHP1 and has cross reaction with AHP6 and polyspecific antibodies are specific to AHP1,2,3,4,5,6 proteins. Sensitivity test is used for each antibodies and best dilutions are calculated. Besides these epitope mapping is completed. According to MS/MS analysis; AHP1 protein is bounded to one of the antibody on KVDPHVHQLK epitope.
Benzer Tezler
- AHP genlerinin CRISPR-CAS9 sistemi kullanılarak domates bitkisinde susturulması
Silencing AHP genes in tomato (Solanum lycopersicum) using CRISPR-CAS9
ABDULLAH AYDIN
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
ZiraatOndokuz Mayıs ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUSA KAVAS
- Bitki solunum zinciri: Farklı azot kaynaklarına cevapta hücresel redoks homeostazisi ve alternatif oksidazın redoks yanıtları
The plant respiration chain: Cellular redox homeostasis in response to different nitrogen sources and redox responses of alternative oxidase
TURGAY ÇAKMAK
- Investigation of gene delivery capability of selenium nanoparticles compared to functionalized single wall carbon nanotubes in arabidopsis thaliana
Arabidopsis thaliana bitkisinde selenyum nanoparçacıklarının fonksiyonelleştirilmiş tek duvarlı carbon nanotüplerine kıyasla gen aktarım kapasitesisin araştırılması
GÜLNUR ŞENER
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyomühendislikSabancı ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ STUART JAMES LUCAS
- Arabidopsis thaliana bitkisinde sodyum azid ve EDTA mutagenleri ile mutasyon çalışması
Mutation study on arabidopsis thaliana with sodium azide and EDTA
RODİN MAZAHERİ
- Arabidopsis thaliana'da indol-3-asetik asit (IAA), salisilik asit (SA) ve jasmonik asit (JA)' in yaprak senesensi üzerine etkisinin incelenmesi
The investigation of the effect of indole-3-acetic acid (IAA), salicylic acid (SA) and jasmonic acid (JA) on leaf senescence in Arabidopsis thaliana
NİHAL GÖREN SAĞLAM