Apsergillus niger as an expression system for heterologous production of ROL and BTL2
ROL ve BTL2 lipazlarının heterolog üretimi için bir ekspresyon sistemi olarak aspergillus niger
- Tez No: 309399
- Danışmanlar: DOÇ. DR. OSMAN UĞUR SEZERMAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Sabancı Üniversitesi
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Bilimleri ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 71
Özet
Bacillus thermocatenulatus lipazı (BTL2) ve Rhizopus oryzae lipazı (ROL), pAL85 plazmidinde, konstitütif promoter pkiA ve sonlandırıcı trpC dizilerin kontrolü altına klonlandı. Oluşturulan plazmidler, ipliksi bir mantar olan Aspergillus niger organizmasının 872.11 suşunu transforme etmek için kullanıldı. Transforme olan koloniler PCR ile doğrulandıktan sonra Rhodamine içeren katı besi yerinde pozitif sonuç veren suşların sıvı kültürleri yapıldı. Bu kültürlerden alınan örneklere çeşitli analiazler uygulandı. BTL2 ile transforme olmuş hücrelerde SDS jel ve zimogram sonuçları, BTL2'nun üretildiğini gösterdi. Aktivite ve Bradford testleri de bu sonuçlarla paralellik gösterdi fakat sonuçlar tekrar edilebilir değildi. Yapılan hesaplamalı analizler sonucunda bu proteinin A. niger'da yüksek seviyede üretim için uygunolmadığı görüldü. ROL ile transforme edilmiş suşlardan, SDS jelinde bant görülemedi. Aktivite testi de belirgin bir sonuç vermedi. Bu düşük verimin sebebini açıklamak üzere Rhizopus oryzae ve Aspergillus niger'in kodon kullanım tabloları incelendi.
Özet (Çeviri)
Lipases are esterases that hydrolyze lipids to fatty acids and glycerides. These enzymes have a variety of functions, thus applications, making them attractive targets to be studied. In this study, Bacillus thermocatenulatus lipase 2 (BTL2) and Rhizopus oryzae lipase (ROL) were cloned in pAL85 expression vector under control of constitutive pkiA promoter and trpC terminator. Aspergillus niger 872.11 protoplasts were transformed with these constructs. Transformation was confirmed by PCR from genomic DNA, lipase production was screened on Rhodamine-containing plates and positive strains were selected for shake flask cultures. Samples taken from the shake flask cultures were subjected to further analysis. SDS-PAGE and zymogram assay of BTL2 transformants showed that two transformants were expressing BTL2. Results of activity assay against 4-MU-caprylate and Bradford assay were also consistent with this data. But the results were not reproducible. Computational analysis showed that the enzyme was not suitable for high level expression in A. niger. No bands for ROL transformants could be detected on SDS-PAGE analysis. Activity assay against 4-MU-caprylate did not show a significant activity either. Differences in codon usage preferences between Rhizopus oryzae and Aspergillus niger were investigated in order to suggest an explanation for low efficiency.
Benzer Tezler
- Cultivation of Aspergillus niger in SingleUse rocking and Stirred-tank bioreactors:A Comparative Study
Başlık çevirisi yok
ZEYNEP İPEK TURAN
- Aspergillus niger a-amilaz enziminin pichia pastoris'te rekombinant üretimi
Recombinant production of aspergillus niger a-amylase enyzme in pichia pastoris
FATMANUR MAVİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyoteknolojiAkdeniz ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYSUN ÖZÇELİK
- Prolil endopeptidaz (PEP) enziminin Escherichia coli ekspresyon sisteminde çözünür formda eldesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Obtaining, purification and characterization of soluble form of prolyl endopeptidaze (PEP) enzyme in Escherichia coli expression system
NEJLA BAKIR
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyomühendislikTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSA GÖKÇE
- Glutensiz gıda üretimi amaçlı, prolil endopeptidaz (PEP) enziminin üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Production, purification and characterization of prolyl endopeptidase (PEP) enzyme, for gluten free food production
BELMA ŞENOL
Doktora
Türkçe
2020
BiyomühendislikTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSA GÖKÇE
- Azurinin Lactococcus lactis'te rekombinant üretimi, antimikrobiyal ve sitotoksik etkisinin araştırılması
Recombinant production of azurin in Lactococcus lactis, investigation of its antimicrobial and cytotoxic effects
MELİKE YILDIZ
Doktora
Türkçe
2018
BiyoteknolojiAtatürk ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HAKAN AŞKIN
