Anoxybacillus gonensis Z4 suşundan ekstraselüler ?-amilaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of extracellular ?-amylase from anoxybacillus gonensis Z4 strain
- Tez No: 309783
- Danışmanlar: PROF. DR. SEVGİ KOLAYLI, YRD. DOÇ. DR. BARBAROS DİNÇER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 110
Özet
Bu çalışmada, yeni bir termofilik bakteri olan Anoxybacillus gonensis Z4 suşundan ekstraselüler a-amilaz, jel filtrasyon kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Saf enzim, doğal ve SDS-poliakrilamid jel elektroforezlerinde tek bir bant halinde belirlendi. Optimum ? -amilaz aktivitesi, pH'ın ve sıcaklığın bir fonksiyonu olarak, çözünür patates nişastası substratı kullanılarak belirlendi. Enzimin optimum pH'sı, çözünür patates nişastası varlığında, 5,5-10,5 arasında bulundu. Enzimin optimum sıcaklığı ise, 70 oC olarak belirlendi. Saf enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde 10 gün sonunda, +4 °C de aktivitesinin tamamını koruduğu, 70 °C' de % 65' ini koruduğu ve 90 °C' de aktivitesinin %43' ünü koruduğu gözlendi. Patates nişastası, amilopektin ve amiloz substratları için, Anoxybacillus gonensis Z4 ? -amilaz'nın Km değerleri, Lineweaver-Burk eğrisi yardımıyla, sırasıyla, 0,9 mg/mL, 1,3 mg/mL ve 0,5 mg/mL olarak bulundu. Vmaks değerleri ise sırasıyla 833,3 U/mg protein, 1000 U/mg protein ve 769 U/mg protein olarak belirlendi. EDTA, Hg2+, B4O7-2, OH-, CN- ve üre için hesaplanan IC50 değerleri sırasıyla 16,5 mM, 15,2 mM, 8,2 mM ve 10,9 mM olarak bulundu. Bu sonuçlar, elde edilen Anoxybacillus gonensis Z4 ?? amilazı, ısıl ve pH kararlılığı ve diğer özellikleri açısından endüstriyel uygulamalarda kullanılabilecek bir potansiyele sahip olduğunu göstermektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, a-amylase, was isolated from a new termophilic bacterium Anoxybacillus gonensis Z4 using gel filtration chromotography. The purified enzyme was migrated as a single band on native and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Optimum ?-amylase activity as a function of pH and temperature was determined using soluble patato starch as substrate. The optimum pH of the enzyme was found between 5,5 to10,5 in the presence of soluble patato starch. The optimum temperature was determined at 70oC. When the thermal stability profile of the purified enzyme was investigated, at the end of ten days, it was observed that the purified enzyme was extremely stable +4 °C, the enzyme retained over 65 % of its original ?-amylase activity at 70°C, the enzyme retained over 43 % of its original ?-amylase activity at 90 °C. The Km values of Anoxybacillus gonensis Z4 ? -amylase for soluble starch, amylopectin and amylose substrates were determined 0,9 mg/mL, 1,3 mg/mL and 0,5 mg/mL by Lineweaver-Burk curve, respectively. The Vmax values of Anoxybacillus gonensis Z4 ? -amylase for the same substrates, were determined 833,3 U/mg protein, 1000 U/mg protein and 769 U/mg protein by Lineweaver-Burk curve, respectively. IC50 values of Anoxybacillus gonensis Z4 ? -amylase for EDTA, Hg2+, B4O7-2, OH-, CN- and urea inhibitors were determined as 8 mM, 5,75 mM, 16,5 mM, 15,2 mM, 8,2 mM ve 10,9 mM respectively. It is clear from the present results that the pH- and thermo- stabilities and other biochemical features of the extracellular enzyme make it potential for industrial applications.
Benzer Tezler
- Anoxybacillus gonensis Z4 suşundaki katalaz aktivitesinin incelenmesi ve tam hücre immobilizasyonu
Investigation of catalase activities from Anoxybacillus gonensis Z4 strain and whole cell immobilization
MURAT DURMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. BARBAROS DİNÇER
- Anoxybacillus gonensis G2 bakterisinin alüminyuma dirençlilik geninin belirlenmesi, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characterization of the aluminium resistance gene of Anoxybacillus gonensis G2
FATİH ŞABAN BERİŞ
Doktora
Türkçe
2006
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Anoxybacillus gonensis D-glukoz (D-ksiloz) izomeraz geninin klonlanması, izolasyonu ve karakterizasyonu
Cloning, isolation and characterization of D-glucose (D-Xylose) isomerase gene from Anoxybacillus gonensis
HAKAN KARAOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Anoxybacillus gonensis yaban tip ve W137/V184S mutantı glukoz izomerazlarının DEAE-sefaroz matriksina kovalent ve non-ko0valent immobilizasyonu
Covalently and non-covalently immobizilation on DEAS-sepharose matrix of wild type and W137/V184S mutant glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis
ZÜLEYHA AKPINAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. HAKAN KARAOĞLU
- Anoxybacillus gonensis oligo-1,4-1,6-alfa-glukosidaz (sukraz-maltaz-izomaltaz) genin klonlanması, gen ürününün saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu
Cloning, purification and biochemical characterization of oligo-1,4-1,6-alpha-glucosidase (sucrase-maltase-isomaltase) from Anoxybacillus gonensis
ZEYNEP DENGİZ BALTA
Doktora
Türkçe
2023
BiyoteknolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU