Geri Dön

Anoxybacillus gonensis yaban tip ve W137/V184S mutantı glukoz izomerazlarının DEAE-sefaroz matriksina kovalent ve non-ko0valent immobilizasyonu

Covalently and non-covalently immobizilation on DEAS-sepharose matrix of wild type and W137/V184S mutant glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis

  1. Tez No: 456957
  2. Yazar: ZÜLEYHA AKPINAR
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. HAKAN KARAOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Su Ürünleri Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 63

Özet

Glukoz izomeraz (GI) (D-ksiloz ketol izomeraz; EC 5.3.1.5), amilaz ve proteaz ile birlikte dünyanın en yüksek tonajlı üç enziminden birisidir. GI'nın D-glukozun D-fruktoza izomerizasyonu HFCS (yüksek fruktoz içerikli hububat şurubu) üretiminde ticari bir öneme sahiptir. Bu öneminden dolayı bugüne kadar pek çok hücreden yeni GI'lar izole edilerek karakterize edilmiştir. Endüstriyel uygulamalar için GI'ın maliyetinin azaltılması ile ilgili birçok yaklaşım araştırılmış ve uygulama alanı bulmuş olmakla birlikte, bu yaklaşımlardan en fazla tercih edilen GI'nın immobilize edilerek tekrar tekrar kullanılmasıdır. Bu çalışmada, saflaştırılan Anoxybacillus gonensis G2T glukoz izomerazının (AgoGI) ve bu enzimin W137F/V184S mutantının DEAE-Sepharoz matriksine iyonik ve kovalent immobilizasyonu gerçekleştirilmiştir. Daha sonra immobilize enzimlerin biyokimyasal ve kinetik parametreleri belirlenmiştir. Enzimlerin hem iyonik hem de kovalent immobilizasyonu sonrası optimum çalışma sıcaklıkları 85°C olarak, optimum pH değerleri ise 6,5 olarak belirlenmiştir. AgoGI'nın iyonik ve kovalent olarak DEAE-Sefaroza immobilize edilmiş hallerinin Km değerleri sırasıyla 130,57 ± 5,42 mM ve 127,28 ± 2,96 mM; Vmax değerleri ise 0,10136 ± 0,0014 µmol/dk ve 0,03985 ± 0,0003 µmol/dk olarak hesaplandı. Enzimin W137F/V184S mutantının iyonik ve kovalent olarak DEAE-sefaroza immobilize edilmiş hallerinin Km değerleri sırasıyla 37,44 ± 2,09 mM ve 39,93 ± 2,02 mM; Vmax değerleri ise 0,0641 ± 0,0008 µmol/dk ve 0,06408± 0,0007 µmol/dk olarak belirlendi.

Özet (Çeviri)

Glucose isomerase (GI) (D-xylose ketol isomerase, EC 5.3.1.5) is the one of the three highest tonnage enzymes with amylase and protease in the World enzyme market. The isomerization of D-glucose to D-fructose has commercially importance to produce high fructose corn syrup (HFCS). Therefore, various GIs have been isolated and characterized from different microorganisms and macroorganisms up to day. Besides, Many procedures have been researched and applied to reduce the cost of GI for industrial applications. The most preferred procedure among the applied procedures has been determined as reuse of GI via enzyme immobilization. In this study, we carried out ionically and covalently immobilizations of both wild type and double mutant enzymes of Anoxybacillus gonensis G2T on DEAE-sepharose matrix. Then, biochemical and kinetic parameters of immobilized enzymes were determined. The optimum temperature and pH value was determined as 85°C and 6,5 for all the enzymes, respectively. According to the results of kinetic studies, Km and Vmax values of ionically and covalently immobilized AgoG1on DEAE-Sepharose were 130,57 ± 5,42 mM and 127,28 ± 2,96 mM and 0,10136 ± 0,0014 µmol/min, 0,03985 ± 0,0003 µmol/min, respectively. Km and Vmax values of ionically and covalently immobilized AgoG1with double mutation (W137F/V184S) on DEAE-Sepharose were 37,44 ± 2,09 mM, 39,93 ± 2,02 mM and 0,0641 ± 0,0008 µmol/min, 0,06408 ± 0,0007 µmol/min respectively.

Benzer Tezler

  1. Anoxybacillus gonensis glukoz izomerazının genetik manipulasyonlarla bazı biyokimyasal özelliklerinin geliştirilmesi

    Enhancing some biochemical properties of Anoxybacillus gonensis glucose isomerase by genetic manipulation

    HAKAN KARAOĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyokimyaKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ

  2. Anoxybacillus gonensis g2t glukoz izomerasının kinetik ve bazı biyokimyasal parametrelerinin g33d, n138g, t144s, v293ı, v32ı, e373k ve v380ı bölge spesifik mutasyonları ile geliştirilmesi

    Improvoment of kinetic and some biochemical parameters of glucose isomerase from anoxybacillus gonensis g2t by site directed mutagenesis g33d, n138g, t144s, v293i, v32i, e373k and v380i

    PELİN BAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Su ÜrünleriRecep Tayyip Erdoğan Üniversitesi

    Su Ürünleri Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. HAKAN KARAOĞLU

    YRD. DOÇ. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ

    YRD. DOÇ. DR. DERYA EFE

  3. Anoxybacillus gonensis G2t glukoz izomerazının ısıl kararlılığının K111R-L313I-V101R-A353G/F/W VE T428E/S bölge spesifik mutasyonları ile geliştirilmesi

    Improvement thermal stability of glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis g2t by site directed mutagenesis K111R-L313I-V101R-A353G/F/W and T428E/S

    SEYHAN RAKICI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan Üniversitesi

    Su Ürünleri Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU

  4. Anoxybacillus gonensis PDF21 suşunun hücre duvarı litik enziminin optimum sıcaklık, pH ve ısıl kararlılığının iyileştirilmesi

    The improvement of optimum temperature, pH and thermal stability of cell wall lytic enzymes from Anoxybacillus gonensis PDF21

    ESMA CEYLAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ

  5. Termofilik sulardan izole edilen anoxybacillus gonensis'e ait glukoz izomerazın ısıl kararlılığının geliştirilmesi

    Increasing thermal stability of glucose isomerase anoxybacillus gonensis isolated hot springs

    OSMAN RAMOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan Üniversitesi

    Su Ürünleri Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU