Geri Dön

Karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması için moleküler baskılanmış kriyojellerin hazırlanması ve karakterizasyonu

Preparation and characterization of molecularly imprinted cryogels for carbonic anhydrase purification

  1. Tez No: 322513
  2. Yazar: MURAT UYGUN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ARİFE ALEV KARAGÖZLER, PROF. DR. ADİL DENİZLİ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2012
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Adnan Menderes Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 192

Özet

Bu çalışmada, sığır kanından karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması için moleküler baskılanmış poli(HEMA-MAH) kriyojeller sentezlenmiştir. Sentezlenen kriyojellerin karakterizasyonu şişme, makrogözeneklilik ve akış hızı denemeleri ve FTIR, SEM, yüzey alanı ve elementel analiz ölçümleri yapılarak gerçekleştirilmiştir. Kriyojellerin şişme oranının 8.01 g H2O/g olduğu makrogözenekliliğin ise % 70 civarında olduğu bulunmuştur. kriyojel makrogözenekliliğinin artışı ile akış hızı da artmıştır. Kriyojel yapısına MAH monomerinin katıldığı elementel analiz ve FTIR analizleri ile gösterilmiş ve sentezlenen kriyojelin yüzey özellikleri SEM ile incelenmiştir. Kriyojelin oldukça gözenekli olduğu ve sünger benzeri bir morfolojiye sahip olduğu bulunmuştur. Karbonik anhidraz baskılanmış kriyojellerin yüzey alanı BET ölçümleri ile 29.3 m2/g olarak bulunmuştur. Maksimum karbonik anhidraz adsorpsiyonu pH 6.0 MES tamponu ile elde edilirken (3.16 mg/g kriyojel), sıcaklığın adsorpsiyon üzerine etkili olmadığı bulunmuştur. Artan tuz derişimi ile adsorpsiyon kapasitesi azalırken kromatografik akış hızı 4 mL/dak'ya çıkarıldığında adsorpsiyon kapasitesi şiddetli bir şekilde azalmıştır. Adsorplanan karbonik anhidrazın floresans spektrumu alınarak üç boyutlu yapısında bir değişiklik olmadığı gözlenmiştir. Kriyojellerin tekrar kullanılabilirliği 10 döngü boyunca incelenmiş ve adsorpsiyon kapasitesinde % 10'luk bir azalma meydana gelmiştir. Sentezlenen kriyojelin seçiciliği albumin, hemoglobin, IgG, ?-globulin ve lizozime karşı incelenmiş ve sırasıyla 15.26, 60.05, 21.88, 17.61 ve 17.42 kat yüksek seçicilik bulunmuştur. Sentezlenen karbonik anhidraz baskılanmış kriyojeller kullanılarak sığır kanından karbonik anhidraz enzimi yaklaşık % 80 verimle ve 84 kat saflaştırılmıştır ve saflık SDS-PAGE ve zimogram ile gösterilmiştir.

Özet (Çeviri)

In this study, molecularly imprinted poly(HEMA-MAH) cryogels were synthesized and used for purification of carbonic anhydrase from bovine blood. Cryogels were characterized by its swelling degree, macroporosity, flow rate and FTIR, SEM, surface area and elemental analysis. Swelling degree of the cryogel was found to be 8.01 g H2O/g while their macroporosity was about 70 %. Flow rate increased with increasing macroporosity. Incorporation of MAH monomer into cryogel structure was shown with elemental analysis and FTIR. With SEM photographs it was shown that cryogels were highly porous and had sponge like morphology. Their surface area was found to be 29.3 m2/g with BET studies. Maximum carbonic anhydrase adsorption was found to be 3.16 mg/g with MES buffer (pH 6.0) while temperature had no significant effect over the adsorption. Adsorption capacity was decreased with increased chromatographic flow rate to 4 mL/min. Tree-dimensional structure of the enzyme was studied with fluorometric analysis. Cryogels were re-used for 10 cycle and their adsorption capacity decreased only 10 %. Cryogel selectivity were investigated with albumin, hemoglobin, IgG, ?-globulin and lysozyme and found to be 15.26, 60.05, 21.88, 17.61 and 17.42, respectively. These cryogel used for purification of carbonic anhydrase from bovine blood and it?s purified with 84 fold and 80 % recovery. Purity of the enzyme was shown with SDS-PAGE and zymogram.

Benzer Tezler

  1. Farklı koyun ırklarından karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması ve bazı pestisitlerin enzim üzerine etkilerinin araştırılması

    Purification of carbonic anhydrase enzyme from different sheep breeds and investigation of the effects of some pesticides on the enzyme

    YILDIZ YALÇIN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyokimyaBalıkesir Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEMRA IŞIK

  2. Biyonanokonjugatların yapay kan amaçlı kullanımlarının araştırılması

    Investigation of the uses of bionanoconjugates for artificial blood purposes

    UMUT ÇELİKOĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyokimyaEskişehir Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ARZU ERSÖZ

  3. Karbonik anhidraz enziminin koyun kalp dokusundan saflaştırılması, karakterizasyonu ve yeni sentezlenen sülfonamid kalkonların etkilerinin araştırılması

    Purification and characterization of carbonic anhydrase enzyme from sheep heart tissue andinvestigation of the effects of new synthesized sulfonamide chalcones

    MUSTAFA ORHAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyokimyaAğrı İbrahim Çeçen Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MURAT ŞENTÜRK

  4. Sığır eritrositlerinden karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması ve bazı antibiyotiklerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

    Purification of carbonic anhydrase enzyme from bovine erytrocytes and investigation effects of some antibiotics on enzyme activity

    MEHMET YAZICIOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    ZiraatOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. DENİZ EKİNCİ

    PROF. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR

  5. Gökkuşağı alabalık ( oncorhynchus mykiss) dokularından karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

    Purification and characterization of carbonic anhydrase from rainbow trout (oncorhynchus mykiss) tissues and inhibition effects of some antibiotics on enzyme activity

    HAKAN SÖYÜT

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    KimyaAtatürk Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR

    DOÇ. DR. OLCAY HİSAR