Pro-apoptotik ve anti-apoptotik proteinlerin EGCG ile tetiklenen apoptoz mekanizmasındaki rollerinin HCT-116 kolon kanser hücrelerinde incelenmesi
Investigation of pro-apoptoti?c and anti-apoptotic proteins in the apoptotic mechanism triggered by egcg in HCT-116 colon cancer cells
- Tez No: 331298
- Danışmanlar: PROF. DR. A.SEMRA KOÇTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: EGCG, Kolon kanseri, İntrinsik apoptoz, Ekstrinsik apoptoz, EGCG, Colon cancer, Intrinsic apoptosis, Extrinsic apoptosis
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 97
Özet
Yeşil çay ekstraktı olan EGCG kolay elde edilebilen, ucuz ve toksik olmayan katekin türevi bir polifenol bileşiğidir. Çeşitli kanser hücrelerinde programlı hücre ölümünü tetikleyebildiğinden kemoterapötik ajan olarak kullanımı yoğun olarak araştırılmaktadır. Buna rağmen EGCG'nin etkisi hücre tipine göre değişkenlik göstermektedir ve apoptoz mekanizması tam olarak aydınlatılamamıştır. Özellikle kolon karsinoma üzerinde gerçekleştirilen çalışmalar oldukça kısıtlıdır ve henüz EGCG'nin kolon kanserinde pro- ve anti-apoptotik genlerin ekspresyon profiline etkisini gösteren bir çalışma mevcut değildir. Bu bilgiler ışığında bu çalışmada, kolon karsinoma hücrelerinde apoptozu tetikleyen dozda EGCG'nin pro- ve anti-apoptotik genlerin ekspresyonlarına etkisi, artış gösteren ve apoptotik süreçte önemli rol oynayan proteinlerin mRNA düzeyinde susturulması ile bu proteinlerin apoptotik süreç açısından öneminin incelenmesi amaçlanmıştır. Bunun yanısıra EGCG'nin prooksidan özelliği ile hücrede oluşturduğu oksidatif etkinin hücre içi reaktif oksijen düzeyinin ölçülmesi ile incelenmesi amaçlanmıştır.Bu amaç doğrultusunda çalışmada HCT-116Bax+/+ ve HCT116Bax-/- insan kolorektal tümör hücre hatları kullanıldı. EGCG'nin hücre canlılığı üzerine etkisi MTT yöntemi ile, hücre ölüm tipi ve yüzdesi akış sitometrik analiz ile belirlendi. İntrensek ve ekstrinsik apoptotik yolakta görevli kazpazların protein ekspresyon değişimleri western-blot analizi ile incelendi. EGCG'nin pro- ve anti-apoptotik gen ekspresyon düzeylerine etkisi Real-Time PZR yöntemi ile belirlendi. İntrensek ve ekstrinsik apoptoz yolaklarının başlatıcı kaspazları olan kaspaz-8 ve kaspaz-9 genleri susturulmak üzere seçildi ve EGCG'nin etkinliğinde kaspaz-8 ve -9'un önemi incelendi. EGCG'nin hücrede oluşturduğu oksidatif etki oluşan reaktif oksijen türevlerinin akış sitometrik analizi ile saptandı.Elde edilen gen ve protein ekspresyon analiz verileri değerlendirildiğinde EGCG'nin apoptotik etkisini ağırlıklı olarak kaspaz 8 enzim aracılı ekstrinsik yolak ile gösterdiği ancak kaspaz 9 enzim aracılı intrinsik yolağın dolaylı olarak apoptotik etkiyi güçlendirdiği ve etkide EGCG'nin oluşturduğu hücre içi ROT'ların da etkin olduğu öngörülmektedir.
Özet (Çeviri)
EGCG, a catechin derivative polyphenol, exist in green tea, is easy-to-handle and non-toxic. Its potential chemoteraputic usage is studied recently because it is ability to trigger programmed-cell death. However, its effect may change according to cell type and apoptotic mechanism has not been explained yet. Especially, the sudies on colon carcinoma are limited and any study about the effect of EGCG on pro-and apoptotic gene expression profile does not exist yet. According to this information, in this study, it is aimed to reveal the effects of apoptosis-triggering dose of EGCG on pro-and apoptotic gene expression and to investigate the importance of overexpressed apoptotic proteins by gene-silencing. Beside of this, oxidative influence of EGCG, produced in a cell by its prooxidant property, was intended for measurement with rective oxygen species.On this aim, HCT- 116Bax+/+ ve HCT116Bax-/- human colorectal tumor cell lines were used in the study. The effect of EGCG on cell viability is determined with MTT method, cell death type is examined by flow cytometric analyses. The changes in protein expression levels of caspases is determined by western-blotting method. The effect on pro-and apoptotic gene expression is analysed by Real-Time PCR method. The initiator caspases of intrinsic and extrinsic apoptosis pathways, caspase-8 and caspase-9 is selected for gene-silencing by siRNA. Reactive oxygen species produced by oxidative effects of EGCG was determined by flow cytometry.According to obtained gene and protein expression data, it is claimed that the apoptotic effect of EGCG occurs via caspase 8 enzyme-mediated extrinsic pathway, but caspase 9 enzyme-mediated intrinsic pathway enhances this effect indirectly and intracellular ROS production by EGCG has also roles in the mechanism.
Benzer Tezler
- BT474 ve MDA-MB-231 meme kanseri hücre hattında ruxolitinib ve MK-2206'nın östrojen sinyal yolağının PI3K/AKT ve JAK/STAT sinyal yolakları üzerindeki ilişkinin araştırılması
Investigation of the relationship between ruxolitinib and MK 2206's estrogen signaling pathway on PI3K/AKT ve JAK/STAT signaling pathways in BT474 and MDA-MB-231 breast cancer cell line
ESİN GÜVENİR ÇELİK
Doktora
Türkçe
2023
GenetikBilecik Şeyh Edebali ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ONUR EROĞLU
- Kolon kanseri hücreleri üzerine timokinon ve 5-fluorouracilin terapotik etkisinin in vitro ve in vivo araştırılması
In vitro and in vivo investigation of the therapeutic effect of thymoquinone and 5-fluorouracil on colon cancer cells
ERAY METİN GÜLER
Doktora
Türkçe
2019
BiyokimyaBezm-i Alem Vakıf ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDÜRRAHİM KOÇYİĞİT
- Nefrotik sendrom oluşturulan sıçanlarda resveratrol ve metformin tedavilerinin böbrek dokusundaki anti-apoptotik proteinlere etkileri
Effects of resveratrol and metformin treatments on anti – apoptotic proteins in kidney tissue in rats with nephrotic syndrome
BELÇİM HAZAR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıBursa Uludağ ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BİLAL YILDIZ
- Nitrik oksid ile indüklenmiş prostat kanser kök hücrelerinde za'in apoptotik etkisinin incelemesi
Investigation of apoptotic effects of za in prostate cancer stem cells induced by nitric oxide
HADI ROUHRAZI
- Epitel hücre kökenli SERPINB1'in nötrofil elastaz ilişkili anti apoptotik ve pro apoptotik yolaklar üzerine etkisi
The effect of epithelial cell-derived SERPINB1 on neutrophil elastase-associated anti-apoptotic and pro-apoptotic pathways
BÜŞRA KILIÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Allerji ve İmmünolojiHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İBRAHİM ÇAĞATAY KARAASLAN