Fitaz üreten fungusdan enzimin üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Production, purification and characterization of phytase from phytase producing fungus
- Tez No: 348561
- Danışmanlar: DOÇ. DR. KUBİLAY METİN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyoloji, Biyoteknoloji, Biochemistry, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 199
Özet
Adnan Menderes Üniversitesi Fen-Edebiyat Fakültesi Biyoloji Bölümü Moleküler Biyoloji Anabilim Dalı stok kültürlerinde kayıtlı havadan ve topraktan izole edilmiş 165 adet fungus fitaz enzimi üretme kapasitesi açısından taranmıştır. Aspergillus niger UA-D suşunun en yüksek aktiviteye sahip olduğu saptanmıştır. Aspergillus niger UA-D suşundan ekstraselüler olarak PSM ortamında üretilen fitaz enzimi amonyum sülfat çöktürmesi, DEAE Sefaroz CL-6B ve Fenil Sepharoz CL-4B işlemleri uygulanarak % 2.6 verimle 73 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAGE elektroforezinde tek bant elde edilmiş ve moleküler ağırlığı 65 kDa olarak hesaplanmıştır. Maksimum aktivitesini pH 3.0 ve 70 oC sergilediği bulunmuştur. Enzimin geniş bir sıcaklık ve pH aralığında stabil olduğu saptanmıştır. Enzimin fitik asit için Km değeri 180 µM ve Vmax değeri 54.35 U/mL olarak hesaplanmıştır. Fitaz enziminin geniş bir substrat spesifikliğine sahip olduğu belirlenmiştir. Fitaz aktivitesi, Ba2+ ve Li+ tarafından artarken, Fe2+, Al3+ ve Pb2+ tarafından inhibe olmuştur. Enzim aktivitesi NBS, PMSF, DTNB, 2,3-bütandion varlığında oldukça inhibe olurken, CMC, DTT ve ß-merkaptoetanol ile aktive olmuştur. Bu sonuçlar enzimin katalitik merkezinde triptofan, sistein, serin ve arjinin rezidülerinin önemli rol oynadığı sonucuna varılmıştır. Polihidrik alkollerden gliserol ve sorbitolün sıcaklık stabilitesini artırdığı ve organik çözücülerin ise enzim aktivitesini çok fazla etkilemediği belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
Fungal strains that were isolated from air and soil and registered in Adnan Menderes University Department of Biology culture stocks were screened for phytase activity of 165 fungal strains. Aspergillus niger UA-D. strain showed the highest phytase activity. Extracellular phytase produced by Aspergillus niger in PSM was purified 73-fold with a recovery of % 2.6 referred to the phytase activity in the crude extract using, ammonium sulphate precipitation, DEAE Sepharose CL-6B and Phenyl Sepharose CL-4B. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis of the purified enzyme gave a single stained band at a molecular mass of approximately 65 kDa. The temperature and pH for maximum activity of the enzyme were 70 oC and 3.0, respectively. Km and V max values for phytic acid of the enzyme were calculated to be, 180 µM and 54.35 U/mL, respectively. The phytase exhibited broad substrate specificity. The enzyme was stimulated by Ba2+ and Li+ and strongly inhibited by Fe2+, Al3+ and Pb2+ The enzyme activity was markedly inhibited in the presence of NBS, PMSF, DTNB, 2,3-butanedione suggesting that tryptophan, cysteine, arginine and serine residues play an important role in the catalytic process. Glyserol and sorbitol enhance thermostability of phytase. The enzyme was detemined to be highly stable against organic solvents.
Benzer Tezler
- Topraktan fitaz enzimi üreten Bacillus sp. suşlarının taranması ve besinsel faktörlerin fitaz üretimi üzerine etkisi
Screening of phytase enzyme producing Bacillus sp. strains from soil and effect of nutritional factors on the production of phyase
EREN BAYGIN
- Expression and activity analyses of industrially important extracellular enzymes produced by a bacilysin knock-out mutant of Bacillus subtilis
Basilisin biyosentezi susturulmuş Bacillus subtilis mutantı tarafından üretilen endüstriyel öneme sahip enzimlerin gen ifadesi ve aktivite analizleri
SAMET AYTEKİN
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
MikrobiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ
DOÇ. DR. SEZER OKAY
- Kök kanseri hastalığı [Rhizobium radiobacter (Agrobacterium tumefaciens)] ile mücadelede biyoajan bakterilerin kullanım imkânlarının araştırılması
Investigation of possibility of biological control with crown gall [Rhizobium radiobacter (Agrobacterium tumefaciens)] using bioagent bacteria
NASİBE TEKİNER
- İç mimari yüzey tasarımında simetri algoritmalarının kullanımına yönelikbir model önerisi
A model proposal for the usage of the algorithms of symmetry on the interior surface design
KORCAN GÜLFİDAN
Doktora
Türkçe
2022
Bilim ve TeknolojiMimar Sinan Güzel Sanatlar Üniversitesiİç Mimarlık Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İPEK FİTOZ