Differentiation of hepatocyte like cells from immortalized mouse embryonic fibroblasts harboring large t antigen
Sv40 büyük t antijeni içeren immortalize fare embriyonik fibroblastlarının hepatosit benzeri hücrelere dönüştürülmesi
- Tez No: 377437
- Danışmanlar: PROF. DR. İHSAN GÜRSEL, PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 84
Özet
Edinilmiş ve genetik kaynaklı karaciğer hastalıkları genellikle ilerleyici ve hayati tehlike arz eden özelliktedir. Organ transplantasyonunun en iyi sonuç veren tedavi olarak kabul edilmesine rağmen, hasta sayısı nakile uygun donör sayısını aşmaktadır. Somatik hücrelerin doğrudan indüklenerek hepatosit benzeri hücre elde edilmesi yeni umut vaat eden yöntemlerden biridir ve önceden tanımlanmıştır. Ancak hepatosit benzeri hücrelerin, SV40 büyük T-antijeni ile immortalize edilmiş Fare Embriyonik Fibroblastlardan (FEF) elde edilmesi henüz çalışılmamıştır. Bu amaçla, karaciğerin embriyonik farklılaşmasında rol oynayan Hnf4α, Foxa2 ve Foxa3 transkripsiyon faktörlerinin retroviral vektörlerle ayrı ve farklı kombinasyonlarla ölümsüz FEF hücrelerine verilmesinin etkilerini inceledik. Bir transkripsiyon faktörüyle enfekte edilen FEF hücreleri epitel ve hepatosit hücre karakterlerini moleküler olarak önemli miktarda göstermediler. Ancak, Hnf4 α +Foxa2 ya da Hnf4 α +Foxa3 kombinasyonu ölümsüz FEF hücrelerinde epitelyal E-cadherin ifadesi; albumin ifadesi ve glikojen depolanması gibi hepatosit karakterlerinin ifadesini uyardığı gözlendi. Bu süreci etkileyen epigenetik mekanizmaların aydınlatılması için, histon varyantlarından koşullu olarak gen ablasyonu yapılabilen transgenik farelerin genotiplemesi yapıldı. Ayrıca, histon varyantı H3.3A geninde koşullu olarak gen ablasyonu yapılabilen ölümsüz FEF hücreleri, Cre rekombinaz genini ifade eden retroviral vektörlerle enfekte edilmiştir. Bu çalışmada Büyük T-antijeni ile immortalize edilmiş FEF hücrelerinin, primer FEF hücreleri için dizayn edilmiş protokolü kullanarak, hepatosit benzeri hücrenin doğrudan elde edilebildiği kanıtlanmıştır. Ayrıca, genetik olarak belirlenmiş hayvanlardan FEF hücreleri izolasyonu ve immortalizasyonu yaparak, histon varyantlarının hepatosit transdiferensiyasonundaki rolünü anlamak için önemli bir araç elde edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Genetic and acquired liver diseases are generally progressive and life threatening with limited curative therapy options. Although organ transplantation is the most potent treatment, number of patients waiting for organ transplant far outnumbers the potential suitable donors. Recently, new alternative methods have been developed to generate functional hepatocytes which can directly be administered to patients. Generating hepatocytes from di erent cells derived from patient has been one of the most promising alternative. Direct conversion of terminally di erentiated cells into hepatocyte like cells has been reported previously. However, hepatocyte di erentiation from SV40 Large-T antigen expressing immortalized Mouse Embryonic Fibroblasts has not been reported. To this end, rst we have evaluated the e ects of individual and combined retroviral expression of liver lineage determining transcription factors: Hnf4 , Foxa2 and Foxa3. Single factor transduced immortal MEFs gave little or no signi cant epithelial marker expression. These conditions were also insucient to induce liver speci c phenotype. However, combined expression of either Hnf4 +Foxa2 or Hnf4 +Foxa3 have resulted in an increased epithelial and liver speci c characteristics such as albumin expression and glycogen storage. To elucidate epigenetic background of this process we genotyped transgenic mouse strains with conditional knockout alleles of histone variants. Histone variant H3.3A conditional knockout immortal MEFs were also infected with Cre expressing retroviral vectors. Our studies indicated that, Large-T antigen immortalized MEFs can be transdi erentiated by using the protocol designated for primary MEFs. Additionally, by isolating and immortalizing genetically determined MEFs, we have established cell lines ready for understanding the roles of histone variants on transdi erentiation. That will be the foundation of subsequent studies delineating e ects of histone variants on hepatocyte di erentiation from MEFs.
Benzer Tezler
- Genetic and epigenetic analysis of immortal and senescence arrested liver cancer cells
İmmortal ve hücre yaşlanması programlı karaciğer kanser hücrelerinde genetik ve epigenetik analizi
G. SEVGİ BAĞIŞLAR
Doktora
İngilizce
2009
Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Sağlıklı kemik iliği donörlerinde granülosit koloni stimüle edici faktörün mezenkimal kök hücre kaynaklı immün modülatör sitokinlere etkisi
The effect of granulocyte colony-stimulating factor on immune modulatory cytokines by mesenchymal stem cell in the healthy bone marow donors
İKBAL OK BOZKAYA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2012
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıSağlık BakanlığıÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DUYGU UÇKAN ÇETİNKAYA
DOÇ. DR. FATİH MEHMET AZIK
- CCl4 ile oluşturulan deneysel akut hepatittemezenkimal kök hücre infüzyonununetkinliğinin ve hepatosite farklılaşmasınındeğerlendirilmesi
The evaluation of mesenchymal stem cellinfusion efficacy and hepatocytedifferentiation in experimentalCCl4 induced acute hepatitis
ÖZLEN BEKTAŞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2006
GastroenterolojiKaradeniz Teknik Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DOĞAN YUSUF UZUN
- Hepatocellular carcinoma: Viral etiology and cellular mechanisms
Karaciğer kanseri: Viral etiyoloji ve hücresel mekanizmalar
ESRA ERDAL YILDIZ
Doktora
İngilizce
2002
Tıbbi Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Endodermal hepatic organoid (EHEPO) culture development and characterization with single-cell sequencing
Endodermal hepatik organoid (EHEPO) kültürünün geliştirilmesi ve tek hücre bazında karakterizasyonu
ALARA TURGUT
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiGenom Bilimleri ve Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞERİFE ESRA ERDAL BAĞRIYANIK