Sıçan (Rattus norvegicus) beyninden asetilkolinesteraz geninin klonlanması ve ekspresyonu
Cloning and expression of acetylcholinesterase gene from rat (Rattus norvegicus) brain
- Tez No: 415277
- Danışmanlar: PROF. DR. ORHAN ERDOĞAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Genetik, Biochemistry, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 68
Özet
Bu çalışmada sıçan (Rattus norvegicus) beyin asetilkolinesteraz enzimini kodlayan gen bölgesi dizayn edilen ileri ve geri primerler ile PCR'da çoğaltıldıktan sonra uygun şartlarda pET SUMO vektörüne ligasyonu yapıldı. Bu rekombinant vektör kompetent E.coli hücrelerine transfer edilerek bu hücreler kanamisin içeren LB sıvı besiyerinde büyütüldü. Büyüyen kolonilerden koloni PCR yapıldı ve ürünler agaroz jel elektroforezi ile kontrol edildi. Pozitif koloniler plazmit izolasyonu için sıvı besiyerinde büyütüldü. Plazmit izolasyonundan sonra rekombinant bu vektörlerle çapraz PCR yapılarak genin doğru bir şekilde insört olup olmadığı kontrol edildi. Plazmitlerin doğruluğu tespit edildikten sonra rekombinant vektörler protein üretiminin gerçekleştirildiği E.coli BL21(DE3) hücrelerine transfer edildi. Hücreler 7 saat IPTG içeren sıvı besiyerinde büyütüldü ve 2 saatte bir örnek alındı. Farklı örneklerden hazırlanan homojenatlardan enzim aktivite ve SDS-PAGE analizleri yapıldı.
Özet (Çeviri)
In this study, the gene region of rat (Rattus norvegicus) brain acetylcholinesterase enzyme was amplified in PCR with designed forward and reverse primers and it was ligated into a pET SUMO vector under suitable conditions. This recombinant vector was transformed to competent E.coli cells and it was grown in liquid LB medium including kanamycin. Colony PCR was performed from growing colony and PCR products were checked with agarose gel electrophoresis. The correct colonies were grown in a liquid medium for plasmid isolation. After plasmid isolation, these recombinant constructs were used for whether the gene inserts properly with cross-PCR. After determining the accuracy of the plasmid, recombinant vectors were transferred into the E.coli BL21(DE3) cells to perform protein production. Cells were grown in IPTG induced larger media for 0th, 2nd, 4th, 6th and 7th hours. Enzyme activity and SDS-PAGE analysis were performed from homogenate for each treatment samples
Benzer Tezler
- Alüminyum, bakır ve titanyum nanopartiküllerinin sıçan (Rattus norvegicus var. Albinos) antioksidan, ozmoregülasyon ve sinir sistemleri üzerine etkilerinin incelenmesi
Investigation on effects of aluminium, copper and titanium nanoparticles on the antioxidant, osmoregulation and nerve systems of rats (Rattus norvegicus var. Albinos)
ESİN GÜLNAZ CANLI
- Reconstruction and transcriptome based analysis of rat brain-specific genome-scale metabolic network model for parkinson's disease
Parkinson hastalığı için sıçan beynine özgü genom ölçekli metabolik modelin oluşturulması ve transkriptoma dayalı analizi
ORHAN BELLUR
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
BiyoistatistikGebze Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. TUNAHAN ÇAKIR
- Sıçan (Rattus norvegicus)'larda akut iskemi reperfüzyon modeli ile oluşturulan böbrek yetmezliğinde prostaglandin E (1)'in rolü
The role of prostaglandin E (1) on the model of acute ischemia reperfusion-induced renal failure in rats (Rattus norvegicus)
NURCAN ORHAN
- Sıçan (Rattus norvegicus)'larda D-galaktozamin ile oluşturulan karaciğer hasarında askorbik asit, beta-karoten, alfa-tokoferol ve selenyumun rolü
The role of ascorbic acid, beta-caroten, alpha-tocopherol, and selenium on D-galactosamine-induced liver injury of rats (Rattus norvegicus)
TUNÇ ÇATAL
- Sıçan (Rattus norvegicus) karaciğer dokusundaki bazı enzim aktiviteleri üzerine dinitrocresol ve dichlorvos'un etkisinin araştırılması
Investigation of dinitrocresol and dichlorvos effects on some enzyme activities in rat (Rattus norvegicus) liver tissue
HAKAN TOSUNOĞLU
