Geri Dön

Hepatosellüler karsinomada kemik morfojenik protein 9 (BMP9)'un siRNA ile baskılanarak fonksiyonel analizi

Functional analysis of siRNA-mediated knock-down of bone morphogenetic protein 9 (BMP9) in hepatocellular carcinoma

PDF İndir

  1. Tez No: 424691
  2. Yazar: TUĞÇE YAŞAR
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. ÖMER FARUK HATİPOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Genetik, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Turgut Özal Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 121

Özet

Hepatosellüler karsinoma (HSK) genelde kronik karaciğer zemininde gelişen karaciğerin primer bir tümörüdür. Kronik karaciğer hastalığı zemininde gelişen HSK on yıllar boyunca mevcut cerrahi ve cerrahi uygulanamayan vakalarda kemoembolizasyon, kemoterapi, alkol enjeksiyonu, radyofrekans ablasyonu gibi yöntemlerdeki gelişmelere rağmen sağkalım oranlarında önemli bir değişim olmamıştır. Mevcut tedavilerin yetersiz kalmasında en büyük etken, kanserin başlangıç ve sonraki büyüme mekanizmalarının bilinememesi, erken teşhisin yapılamamasıdır. Son yıllarda en heyecan verici buluş küçük engelleyici RNA (siRNA)'ların gen sessizleştirilmesinde kullanılabiliyor olmasıdır. Mekanizma olarak RNAi (RNA interferans), gen ekspresyonunun düzenlenmesinde önemli rol oynayan bir sistemdir. Kemik Morfojenik Protein (BMP), büyüme faktörlerinin geniş bir ailesi olan Transforme edici büyüme faktörü beta ailesinin (TGF-β) bir üyesidir. BMP ailesinin alt üyesi olan BMP9, hücre farklılaşmasında, çoğalmasında, büyümesinde, apoptozda önemli rol oynamaktadır. BMP9 ekspresyon analizi, BMP9 proteininin hepatositler ve intrahepatik safra yolu epitel hücreleri tarafından üretildiğini göstermektedir. Bu çalışmada; HepG2 insan hepatosellüler karsinoma hücre hattı, BMP9 genine özgü siRNA ile transfekte edilerek BMP9 geninin ne kadar sessizleştirildiği ve gen ekspresyon düzeyi total RNA kullanılarak qRT-PCR'da belirlenmiştir. Aynı şekilde BMP9 sinyal yol alt bileşenleri olan SMAD1/5/8, SMAD4 ve hedef genlerden p21, Id1 ve Id2 genlerinin ekspresyonları bu genlere özgü mRNA primerleri tasarlanarak bloke edilip edilmediği ortaya konuldu. Bununla beraber protein seviyesindeki değişiklikleri gözlemleyebilmek için de BMP9 ve alakalı diğer proteinler Western Blotting yapılarak teyit edilmesi sağlanmıştır. Bu sessizleştirmenin hücre çoğalmasını nasıl etkilediği xCELLigence Gerçek Zamanlı Hücre Analiz Sistemi ile ortaya konmuştur. Elde edilen sonuçlar incelendiğinde, HepG2 insan hepatosellüler karsinoma hücre hattında BMP9-siRNA kullanımı sonucu en etkili susturmanın 48.saatte 25nM konsantrasyonda (%64) olarak belirlendi. Aynı zamanda BMP9, HepG2 hücrelerinde hücre proliferasyonunu susturduğu (baskıladığı) da ortaya konmuştur. Sonuç olarak hepatosellüler karsinomada önemli rol olan BMP-9 geninin siRNA yöntemi kullanılarak sessizleştirilmesi ve hepatosellüler karsinoma oluşum mekanizmalarında en önemli aşamalardan biri olan bu sürecin tedavisinin mümkün kılınacağını ve kanser tedavisinde oldukça faydalı bir araç olabileceği belirlendi. Anahtar Sözcükler 1. Kanser 2. Hepatosellüler karsinoma 3. BMP9 4. RNAi 5. siRNA

Özet (Çeviri)

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary tumor of the liver that generally develops as a result of chronic liver disease. Available treatments include surgery, or in cases in which surgery is not a viable option, treatment methods such as chemoembolization, chemotherapy, alcohol injection and radiofrequency ablation are used. Despite decades of developments in these treatments for HCC, there has been no significant change in the survival rate for patients with this disease. The major factors that contribute to the insufficiency of treatment is the fact that early diagnosis is not possible, there is insufficient understanding of how this cancer develops, and little knowledge of subsequent growth mechanisms. In recent years, the most exciting finding has been the possible use of smallinterfering RNA (siRNA) for gene silencing. The mechanism involved, RNA interference, plays an important role in regulation of gene expression. Bone morphogenetic proteins (BMP) makes up a large family of growth factors and is a member of the TGF beta (TGF-β) family. One of the members of the BMP family, BMP9, plays an important role in cell differentiation, proliferation, growth and apoptosis. Expression analysis has shown that BMP9 is produced by hepatocytes and intrahepatic and biliary tract epithelial cells. In this study, using transfection of BMP9-specific siRNA to a human hepatocellular carcinoma cell line (HepG2), we show gene knock-down using qRTPCR. We analyze the expression of genes in the BMP9 pathway including SMAD 1/5/8, SMAD4 and target genes p21, Id1 and Id2. In addition, we also analyzed changes in protein expression of these genes using Western Blot. To determine the effect of BMP9 siRNA-mediated knock-down on cell proliferation, we used the xCELLigence real-time cell analysis system. The most significant level of BMP9 knock-down (64%) was seen with a dose of 25 nM at 48 hours after transfection of HepG2 cells. It is also shown that BMP9 reduces proliferation in HepG2 cells. In conclusion, using siRNA silencing of BMP9, which is known to play an important role in HCC, we show that this gene plays an important role in development of HCC and that suppression of this gene could be used in cancer treatment. Keywords 1. Cancer 2. Hepatocelluler carcinoma 3. BMP9 4. RNAi 5. SiRNA

Benzer Tezler

  1. Tez No

    579604

    The role of C-met activation on the organ specific extravasation in hepatocellular carcinoma cells

    Hepatoselüler karsinoma hücrelerinde organ spesifik ekstravazasyonda C-met yolağinin rolünün incelenmesi

    GÜLSÜN BAĞCI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    GenetikDokuz Eylül Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ HANİ ALOTAİBİ

    PROF. DR. SAFİYE NEŞE ATABEY

  2. Tez No

    885146

    Sumak, kimyon ve kekik ekstrelerinin hepatoselüler karsinoma hücre hattında apoptoz ve paraptoza etkisi

    Effect of sumac, cumin and thyme extracts on apoptosis and paraptosis on hepatocelular carcinoma cell line

    YAĞMUR YAŞAR FIRAT

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Beslenme ve DiyetetikErciyes Üniversitesi

    Beslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BETÜL ÇİÇEK

    DR. AYÇA LEKESİZCAN

  3. Tez No

    295584

    Kekik yağı ve bileşeni olan karvakrolün antikanser etkisinin HepG2 hepatoselüler karsinoma hücrelerinde in vitro araştırılması

    In vitro investigated of anticancer effects of essential oil of origanum onites and its constituent carvacrol in hepatocellular carcinoma HepG2 cells

    ÖZLEM TOMSUK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiAnadolu Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HÜLYA SİVAS

  4. Tez No

    797538

    Hepatosellüler karsinomada plexin C1'in etkileşim partnerlerinin belirlenmesi

    Identification of plexin C1 interaction partners in hepatocellular carcinoma

    MELİKE BİNNUR BAHÇEKAPILI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyolojiGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TAMER YAĞCI

  5. Tez No

    468735

    Hepatosellüler karsinomada üsnik asit ve sorafenib'in kombin tedavi olarak anti-tümöral etkilerinin araştırılması

    Investigation of the anti-tumoral effects of usnic acid and sorafenib as combination therapy on hepatocelluler carcinoma

    BESTE YURDACAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Moleküler TıpUludağ Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ÜNAL EGELİ

Geri Dön