Clostridium difficile toksin A geninin klonlanması
The cloning of Clostridium difficile toxin A gene
- Tez No: 424818
- Danışmanlar: PROF. DR. BÜLENT BOZDOĞAN
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 62
Özet
Son 20 yılda gerek hastane, gerekse toplum kaynaklı Clostridium difficile enfeksiyon insidans ve mortalitesinde belirgin bir artış görülmektedir. Hastalığın patogenezinden toksin A (enterotoksin) ve toksin B (sitotoksin) sorumludur. Ayrıca son yıllarda hastane salgınlarına neden olan binary toksin tanımlanmıştır. Bu çalışmada C. difficile toksin A geninin klonlanması ile toksin A elde edilerek tanı testlerinde kullanılabilecek antijen elde edilmesi amaçlanmıştır. Çalışmamızda, Türkiye Halk Sağlığı Kurumu (Ankara)'ndan temin edilen tcdA pozitif C. difficile 06012 suşu kullanılmıştır. Gen bankasından NCBI Reference Sequence: NC-009089.1 nolu tcdA sekansı baz alınarak spesifik primerler dizayn edilmiş ve primerler sonlarına BamHI restriksiyon enzim yeri eklenerek modifiye edilmiştir. C. difficile suşundan DNA saflaştırılmış ve PCR yoluyla ExTaq polimeraz enzimi yardımıyla tcdA genini içeren DNA fragmanıçoğaltılmıştır. Amplikon ve pUC19 plazmidi Bam HI enzimi ile kesilmiş ve ligasyondan sonra E. coli DH10B suşuna elektroporasyon yoluylaaktarılmıştır. Rekombinant plazmidler incelenmiş ve tcdA geni içeren plazmid seçilerek ileri araştırmalar için stoklanmıştır. Bu çalışmada C. difficile tcdA geni rekombinant toksin sentezi için klonlanmıştır. Toksin A'nın rekombinant teknoloji ile sentezlenmesi ve saflaştırılması daha ileri çalışmalar için kolaylık sağlayacaktır. Toksinin saflaştırılmasıyla poliklonal ve monoklonal antikorların eldesi, serum antikor düzeylerinin saptanması, enzim aktivitesi üzerine in vitro ve in vivo çalışmalar yapılabilmesi mümkün olacaktır.
Özet (Çeviri)
In the past twenty years, there has been a significant increase in incidence and mortality of both hospital acquired and community acquired Clostridium difficile. Toxin A (enterotoxin) and toxin B (cytotoxin) are responsible for the pathogenesis of the disease. Moreover, binary toxin, the cause of hospital outbreaks, has recently been identified. The current study aimed to produce the antigen that can be used in diagnostic tests by cloning C. difficile toxin A gene. In our study, tcdA positive strain, C. difficile 06012 obtained from Turkey Public Health Association (Ankara) was used. Specific primers were designed according to the reference sequence in Genbank NC-009089.1 and modified by adding Bam HI restriction site to the end. DNA was isolated from C. difficile strain and by using Extaq polymerase enzyme, DNA fragment including tcdA gene was amplified. Amplicon and pUC19 plasmid were digested with BamHI and ligated, than it was used to transform E. coli DH10B strain by electroporation. Recombinant plasmids were studied and the plasmid that contained tcdA gene was chosen and stored for further studies. In this study, C. difficile tcdA gene was cloned for the synthesis of recombinant toxin. The synthesis and purification of toxin A by recombinant technology will be helpful for further studies. Using purified toxin production of polyclonal and monoclonal antibodies and, determining serum antibody levels, conducting studies on in vitro and in vivo enzyme activity will be possible.
Benzer Tezler
- Akdeniz Üniversitesi Hastanesinde yatan iki yaş ve üzeri hastalarda C.difficile ilişkili ishallerin toksijenik kültür, glutamat dehidrogenaz enzimi-toksin A/B elisa ve PZR ile araştırılması
Investigation of toxigenic clostridium difficile-associated diarrhea by culture, GHL enzyme, toxin A/B elisa and pcr at hospitalized patients with two years and older in Akdeniz University Medical School Hospital
ÖZLEM KOYUNCU ÖZYURT
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2016
MikrobiyolojiAkdeniz ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BETİL ÖZHAK BAYSAN
- Modifiye atmosfer paketli sığır kıyma ve kuşbaşı örneklerinde clostridium difficile ve toksin genlerinin pcr ile belirlenmesi
Detection of clostridium difficile and toxin genes in samples of modified atmosphere packaged minced and cubed meat by pcr
FATMA ATASOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
Besin Hijyeni ve TeknolojisiOndokuz Mayıs ÜniversitesiBesin Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ALİ GÜCÜKOĞLU
- Hematolojik malignansili hastalarda gelişen diyare olgularında clostridium difficile toksinlerinin araştırılması
Investigation of clostridium difficile toxins in hematologic malignant patients with diarrhea
MEHDİ MESKİNİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
MikrobiyolojiEskişehir Osmangazi ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜL DURMAZ
- Clostridium difficile klinik izolatlarının antimikrobiyal direnci, moleküler epidemiyolojisi, toksin genleri ve fajlarının araştırılması
Investigation of the antimicrobial resistance, molecular epidemiology, toxin genes and phages in clinical isolates of clostridium difficile
İNCİ DURUKAN
Doktora
Türkçe
2023
MikrobiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLÇİN BAYRAMOĞLU
- Toksin isteği ile gelen dışkılardan üretilen c.difficile kökenlerinde toksin varyantlarının araştırılması
Investigation of toxin variants in C.difficile strains isolated from stool samples submitted for toxin detection
UMUT DENİZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2009
MikrobiyolojiMarmara ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NURVER ÜLGER