BMSM (BrothMixing Sterile Mucosal Content) ortamında gelişen Crohn hastalığı ile ilişkili adherent- invasive Escherichiacoli(AIEC) ırkının adeziv ve invaziv özelliklerinin karşılaştırılması
Comparison adhesive and invasive features of Crohn's disease-associated adherent-invasive Escherichiacoli(AIEC) strain growing in BMSM (BrothMixing sterile mucosal content) medium
- Tez No: 450286
- Danışmanlar: PROF. DR. FİKRET UYAR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: AIEC, LF82, Crohn Hastalığı, Broth Mixing Sterlie Mucosal Content (BMSM), Adezyon, İnvazyon, AIEC, LF82, Crohn's Disease (CD), Broth Mixing Sterile Mucosal Content (BMSM), Adhesion, Invasion
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dicle Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 117
Özet
Şu ana kadar Crohn hastalığının gelişiminde rol alan faktörlerden biri olan bağırsak florası içinde hastalığın birçok karakteristiğiyle uyumlu patojen özellikleriyle Crohn hastalığına genetik olarak yatkın bireylerde spesifik hasara neden olan en olası ırk Adherent- Invasive Escherichia coli ırkıdır. Bununla birlikte bu ırk sağlıklı bireylerde de bulunduğundan genellikle bir patobiyont olarak kabul edilir. Ayrıca ırka özgü moleküler hedefler henüz mevcut olmadığından bu ırkın sağlıklı mukozadaki yerleşim yerini belirlemek mümkün değildir. Şüphesiz ırkın sağlıklı intestinal mukozadaki yerleşim yerinin belirlenmesi ırkın hastalığın gelişimindeki rolüyle ilgili önemli veriler sunacaktır. Çalışmamızda farklı zamanlarda kullandığımız FVB/N ve Balb/c farelerine ait kolon (CR) ve ileum (IR) bölgelerinden elde ettiğimiz mukozal içerikleri ve hücre kültür ortamını veya Luria-Bertani (LB) ortamını belli oranlarda içeren, Broth Mixing Sterile Mucosal Content (BMSM) ortamlarını oluşturduk. Böylelikle hem bu BMSM ortamlarını içeren hücre enfeksiyon deneyleri yoluyla LF82'nin adeziv/invaziv özelliklerini karşılaştırarak hem de LF82'nin BMSM ortamlarındaki bakteriyel kültürünü yaparak AIEC ırkı, LF82'nin sağlıklı intestinal mukozadaki yerleşim yeri ile ilgili ipuçları elde etmeyi amaçladık. I-407 hücre hattının kullanıldığı invazyon ve adezyon deneylerine ait sonuçlar her iki fare ırkında da genellikle benzerdi ve birbirini doğruladı. Sonuçlar bağırsak sisteminin farklı kısımlarından hazırlanmış her bir BMSM ortamında, LF82'nin üreme ve adeziv/invaziv özellikler bakımından oldukça farklı davranışlar sergilediğini gösterdi. Üstelik bu farklılıklar genellikle IR bölgesinden hazırlanan BMSM ortamında CR bölgesinden hazırlanan BMSM ortamına göre daha güçlü ve anlamlıydı. 3 saatlik hücre enfeksiyon periyodundan sonra, IR bölgesinden hazırlanan BMSM ortamını içeren hücre kültür ortamı, LF82'nin adezyonunu inhibe etti ve gentamisin uygulamasını takiben 1 saatlik ek hücre inkübasyon periyodundan sonra bu ortam LF82'nin invazyonunu da güçlü bir şekilde inhibe etmişti. Bu BMSM ortamında hücre yüzeyine yapışan LF82 oranı kontrole göre neredeyse yarı oranlardayken, intraselüler LF82 oranı, kontroldeki intraselüler LF82 oranı %100 kabul edildiğinde %5'ten daha azdı. Bakteriyel kültür sonuçlarına göre ise her iki bölgeye ait BMSM ortamında da LB ortamına göre daha yüksek bir bakteri üremesi görüldü. Üstelik IR bölgesinden hazırlanan BMSM ortamının, LF82'nin üreme kabiliyeti bakımından en iyi ortam olduğunun gözlenmesi ilginçti. Keza bir gecelik inkübasyondan sonra LB ortamıyla karşılaştırıldığında, bakteri bu ortamda ortalama iki katı sayıda üredi. Sonuç olarak özgün bir yaklaşımla gerçekleştirdiğimiz bu çalışma, sağlıklı intestinal mukozada kolon yerine ileumun, AIEC ırkı, LF82 için daha olası bir yerleşim yeri olduğuna dair önemli ipuçları sundu.
Özet (Çeviri)
To date Adherent-Invasive Escherichia coli (AIEC) with pathogenic traits that is compatible with many characteristic of this disease is the most likely strain to case specific damage to the people who are genetically susceptible to Crohn's disease (CD) in the gut flora that is one of factors playing a role in development CD. However AIEC usually is being accepted as pathobiont because of this strain is also isolated from healthy individuals. Besides, the exact localization of these strains in healthy intestinal mucosa is not possible to be detected due to the fact that specific molecular targets belonging these strains have not been determined yet. Undoubtedly, determining exact localization of this strains in the healthy intestinal mucosa will be provide significant data related to role of AIEC in development CD. In our study, we designed Broth Mixing Sterile Mucosal Content (BMSM) mediums composed of certain rates of cell culture medium or Luria-Bertani (LB) medium and mucosal contents obtained from colonic region (CR) and ileal region (IR) belonging to FVB/N and Balb/c mice that we used different times. Thus, We aimed to obtain some clues about the exact localization of AIEC strain, LF82 in healthy intestinal mucosa via both using bacterial culture of LF82 in BMSM mediums and comparing adhesive and invasive abilities of LF82 with cell infections experiments including BMSM mediums. Results of adhesion and invasion experiments that using I-407 cell line, usually were similar and agree each other in both mice type. The results showed that LF82 exhibit rather different behaviors in terms of proliferation and adhesive/invasive features in each BMSM mediums prepared from different part of intestine. Moreover, these differences were stronger and significant in BMSM medium prepared from IR than in BMSM medium prepared from CR. After 3 hours cell infection period, cell culture medium including BMSM medium prepared from IR, inhibited adhesion of LF82 and after gentamicin treatment following additional one hour incubation period, ıt also had inhibited strongly invasion of LF82. In this BMSM medium, while rate of LF82 associated to the cell surface were almost half rates according control, rate of intracellular LF82 was more less than 5 % when rate of intracellular LF82 in control defined as 100 %. According bacterial culture results however, more bacterial proliferation was seen in both BMSM medium prepared from IR and CR than LB medium. Moreover, it was interesting to observe that BMSM medium prepared from IR was the best medium in term of the proliferation capability of LF82. Likewise after overnight incubation period, LF82 number growing in BMSM medium prepared from IR, was about twice in compared with LF82 number growing in LB medium. In conclusion, this study which we performed with an original approach offered significant clues regarding to ileum being more likely localization site for AIEC strain, LF82 rather than colon in the healthy intestinal mucosa.