Geri Dön

Sığır lensi glukoz-6-fosfat dehidrogenazının saflaştırılması moleküler ve kinetik özelliklerinin saptanması

The purification of glucose-6-phosphate dehydrogenase from bovine lens, determination of molecular and kinetic properties

  1. Tez No: 48106
  2. Yazar: N. NURAY ULUSU
  3. Danışmanlar: DOÇ.DR. M. SEZAİ KUŞ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz, sığır lensi, saflaştırma, moleküler özellikler, kinetik, Glucose-6-phosphate dehydrogenase, bovine lens, purification, molecular DroDerties. kinetics
  7. Yıl: 1996
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 69

Özet

Sığır lens glukoz-6-fosfat dehidrogenazı (D-glukoz-6-fosfat: NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.1.1.49) 2', 5'-ADP-Sepharose 4B affinite ve DEAE Sepharose Fast Flow iyon değiştirici kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı. % 13.75 verimle, spesifik aktivitesi 2.64 Ü/mg protein olan, 19700 kez saflaştırılmış enzim örneği elde edildi. Enzimin molekül ağırlığı, Sephadex G- 200 jel elemesi yöntemiyle 60000 olarak saptandı. SDS poliakrilamid slab jel elektroforezi yöntemi kullanıldığında, 64000'e karşılık gelen bir bant elde edildi. Lens, glukoz-6-fosfat dehidrogenazı kromatofokuslama yöntemi uygulandığında pl 5.14'de tek bir pik verdi. Enzimle katalize edilen tepkimenin aktivasyon enerjisi, Arrhenius grafiğinden Ea= -5.88 Kkal/mol olarak hesaplandı. pH'ya karşı hızlar grafiklendiğinde, pH 7.7 ve pH 9.6 olmak üzere iki pik elde edildi (Bu tip eğriler, diprotik sistemlerde gözlenir). Enzimin kinetik mekanizması da araştırıldı ve enzimin“Ordered Bi Bi”mekanizmasına uyduğu gösterildi. Kitinadp+ ve Kmc-6-p sırasıyla 0.008 ve 0.035 mM; Kİnadph ve KJö-pga ise sırasıyla 0.18 ve 2.1 mM olarak saptandı. Enzim-NADP+ kompleksinin dissosiasyon sabiti Kİnadp+ 0.015 mM olarak hesaplandı.

Özet (Çeviri)

Glucose-6-phosphate dehydrogenase (EC. 1.1. 1.49) (D-glucose-6-phosphate: NADP+ oxidoreductase) was purified from bovine lens, using 2', 5'-ADP- Sepharose 4B affinity and DEAE Sepharose Fast Flow ion-exchange chromatography steps. The enzyme was obtained with 13.75% yield and had a specific activity of 2.64 U/mg protein. The overall purification was about 19700-fold. The molecular weight of the enzyme was found to be 60000 by Sephadex G-200 gel filtration chromatography. The enzyme band on SDS polyacrylamide slab gel electrophoresis corresponded to a molecular weight of 64000. Lens glucose-6-phosphate dehydrogenase gave a single peak on chromatofocusing at pi 5.14. The activation energy of the reaction catalyzed by the enzyme was calculated from the Arrhenius plot as Ea=-5.88 Kcal/mole. The pH versus velocity curve had two peaks at pH 7.7 and pH 9.6 (This type of curve is observed for the diprotic systems). The kinetic mechanism of the enzyme were also investigated and the enzyme showed“Ordered Bi Bi”kinetics. KıriNADP+ an^ Kmc-6-P were found to be 0.008 and 0.035 mM and Kİnadph and Kİğ-pga were found to be 0.18 and 2.1 mM, respectively. Dissociation constant of enzyme-NADP+ complex, Kİnadp+ was calculated as 0.015 mM.

Benzer Tezler

  1. Diyabetik sıçan lenslerinde kalmodulin glikasyonu

    Başlık çevirisi yok

    NET DAŞ EVCİMEN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1994

    BiyokimyaAnkara Üniversitesi

    PROF.DR. SERPİL NEBİOĞLU

  2. Diyabet ve yüksek yağlı diyetin sıçanlarda aldo-keto redüktaz enzim aktivitesi üzerine etkisi

    The effect of diabetes and high-fat diet on aldo-keto reductase enzyme activity.

    EVİN YILMAZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyokimyaAnkara Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NET DAŞ EVCİMEN

  3. Streptozotosin ile deneysel diabet oluşturulmuş sıçanların çeşitli doku antioksidan sistemlerine vanadyum sülfatın etkileri

    The Effects of vanadyl sulphate on various tissue antioxidant systems of streptozotocin induced diabetic rats

    SEVİM TUNALI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    Kimyaİstanbul Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. REFİYE YANARDAĞ

  4. Characterization and inhibition study of bovine lens aldose reductase

    Sığır merceği aldone redüktaz enziminin karakterizasyonu ve inhibisyon çalışması

    SULTAN BELGİN İŞGÖR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1997

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Fen Bilimleri Eğitimi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MESUDE İŞCAN

  5. Inhibitiory effects of plant originated extracts on bovine lens aldose reductase

    Bitki kökenli ekstrelerin sığır lens aldoz redüktaz enzimi üzerine inhibitör etkileri

    SELİN ZAİMOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH

    PROF. DR. MESUDE İŞCAN