Sığır lensi glukoz-6-fosfat dehidrogenazının saflaştırılması moleküler ve kinetik özelliklerinin saptanması
The purification of glucose-6-phosphate dehydrogenase from bovine lens, determination of molecular and kinetic properties
- Tez No: 48106
- Danışmanlar: DOÇ.DR. M. SEZAİ KUŞ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz, sığır lensi, saflaştırma, moleküler özellikler, kinetik, Glucose-6-phosphate dehydrogenase, bovine lens, purification, molecular DroDerties. kinetics
- Yıl: 1996
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 69
Özet
Sığır lens glukoz-6-fosfat dehidrogenazı (D-glukoz-6-fosfat: NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.1.1.49) 2', 5'-ADP-Sepharose 4B affinite ve DEAE Sepharose Fast Flow iyon değiştirici kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı. % 13.75 verimle, spesifik aktivitesi 2.64 Ü/mg protein olan, 19700 kez saflaştırılmış enzim örneği elde edildi. Enzimin molekül ağırlığı, Sephadex G- 200 jel elemesi yöntemiyle 60000 olarak saptandı. SDS poliakrilamid slab jel elektroforezi yöntemi kullanıldığında, 64000'e karşılık gelen bir bant elde edildi. Lens, glukoz-6-fosfat dehidrogenazı kromatofokuslama yöntemi uygulandığında pl 5.14'de tek bir pik verdi. Enzimle katalize edilen tepkimenin aktivasyon enerjisi, Arrhenius grafiğinden Ea= -5.88 Kkal/mol olarak hesaplandı. pH'ya karşı hızlar grafiklendiğinde, pH 7.7 ve pH 9.6 olmak üzere iki pik elde edildi (Bu tip eğriler, diprotik sistemlerde gözlenir). Enzimin kinetik mekanizması da araştırıldı ve enzimin“Ordered Bi Bi”mekanizmasına uyduğu gösterildi. Kitinadp+ ve Kmc-6-p sırasıyla 0.008 ve 0.035 mM; Kİnadph ve KJö-pga ise sırasıyla 0.18 ve 2.1 mM olarak saptandı. Enzim-NADP+ kompleksinin dissosiasyon sabiti Kİnadp+ 0.015 mM olarak hesaplandı.
Özet (Çeviri)
Glucose-6-phosphate dehydrogenase (EC. 1.1. 1.49) (D-glucose-6-phosphate: NADP+ oxidoreductase) was purified from bovine lens, using 2', 5'-ADP- Sepharose 4B affinity and DEAE Sepharose Fast Flow ion-exchange chromatography steps. The enzyme was obtained with 13.75% yield and had a specific activity of 2.64 U/mg protein. The overall purification was about 19700-fold. The molecular weight of the enzyme was found to be 60000 by Sephadex G-200 gel filtration chromatography. The enzyme band on SDS polyacrylamide slab gel electrophoresis corresponded to a molecular weight of 64000. Lens glucose-6-phosphate dehydrogenase gave a single peak on chromatofocusing at pi 5.14. The activation energy of the reaction catalyzed by the enzyme was calculated from the Arrhenius plot as Ea=-5.88 Kcal/mole. The pH versus velocity curve had two peaks at pH 7.7 and pH 9.6 (This type of curve is observed for the diprotic systems). The kinetic mechanism of the enzyme were also investigated and the enzyme showed“Ordered Bi Bi”kinetics. KıriNADP+ an^ Kmc-6-P were found to be 0.008 and 0.035 mM and Kİnadph and Kİğ-pga were found to be 0.18 and 2.1 mM, respectively. Dissociation constant of enzyme-NADP+ complex, Kİnadp+ was calculated as 0.015 mM.
Benzer Tezler
- Diyabet ve yüksek yağlı diyetin sıçanlarda aldo-keto redüktaz enzim aktivitesi üzerine etkisi
The effect of diabetes and high-fat diet on aldo-keto reductase enzyme activity.
EVİN YILMAZ
- Streptozotosin ile deneysel diabet oluşturulmuş sıçanların çeşitli doku antioksidan sistemlerine vanadyum sülfatın etkileri
The Effects of vanadyl sulphate on various tissue antioxidant systems of streptozotocin induced diabetic rats
SEVİM TUNALI
- Characterization and inhibition study of bovine lens aldose reductase
Sığır merceği aldone redüktaz enziminin karakterizasyonu ve inhibisyon çalışması
SULTAN BELGİN İŞGÖR
Yüksek Lisans
İngilizce
1997
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiFen Bilimleri Eğitimi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MESUDE İŞCAN
- Inhibitiory effects of plant originated extracts on bovine lens aldose reductase
Bitki kökenli ekstrelerin sığır lens aldoz redüktaz enzimi üzerine inhibitör etkileri
SELİN ZAİMOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2004
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NURSEN ÇORUH
PROF. DR. MESUDE İŞCAN
