Hematopoetik hücrelerin üretilmesi, çoğaltılması ve farklılaşmasında görevli epo ve tpo'nun medikal biyoteknolojik ürün olarak üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Production, propagation and differentiation of hematopoetic cells producing, purification and characterization of epo and tpo as medical biotechnological product
- Tez No: 558728
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ SEÇİL ERDEN TAYHAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Bioengineering, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 68
Özet
Hematopoetik büyüme faktörleri kan hücrelerinin çoğalmasını ve farklılaşmasını uyaran sitokinlerdir. Eritropoetin (EPO) ve trombopoetin (TPO) başlıca hematopoetik büyüme faktörlerindendir. Eritropoetinin kırmızı kan hücrelerinin oluşumu üzerindeki etkisi iyi bilinmektedir. Trombopoetin megakaryopoezi ve trombosit oluşumunu uyarmaktadır. Hematopoez sırasında, EPO ve TPO sinerjik ve antagonistik bir şekilde etkileşime girebilmektedirler. EPO ve TPO, reseptör bağlama alanlarında önemli bir homoloji sergilemektedirler (% 20 özdeşlik ve % 25 benzerlik). Bu tez çalışmasında, insan EPO proteininin rekombinant DNA teknolojisi kullanılarak bakteriyel ekspresyon sisteminde üretimi gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmanın üç amacı, biyoinformatik çalışmalar yapılarak E.coli pET30a ekspresyon sistemine klonlanmış halde dizinin temin edilmesi; E.coli BL21 pLysE hücrelerine transformasyonu sonucunda rekombinant olarak ekspresyonu ve saflaştırılması; endotel hücreler için biyolojik karakterizasyonunun belirlenmesidir. Transforme hücrelerin seçimi uygun antibiyotikli besiyerinde gerçekleştirilmiştir. EPO His-etiketi ile eksprese edildi ve Nikel temelli afinite kromotografisi teknikleri saflaştırma amacı ile kullanılmıştır. SDS-PAGE yöntemi ile kalitatif olarak analiz edilmiştir. Bu çalışmada üretilen rekombinant EPO'nun biyolojik olarak aktifliği insan umbilikal ven endotel hücreleri (HUVEC) kullanılarak yapılan poliferasyon analizi ile belirlenmiştir. Bununla birlikte; insan TPO proteininin rekombinant DNA teknolojisi kullanılarak maya ekspresyon sisteminde üretimi için çalışmalar gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmada, biyoinformatik çalışmalar sonunda elde edilen pPIC3.5K-TPO vektörü yapay olarak temin edilmiştir. pPIC3.5K-TPO kontsrüktü lineer hale getirilmiştir. Fakat Pichia pastoris GS115 kompetent hücrelerine tranformasyonu ve Pichia pastoris genomuna entegrasyonu sağlanamamıştır.
Özet (Çeviri)
Hematopoietic growth factors are cytokines that stimulate the proliferation and differentiation of blood cells. Erythropoietin (EPO) and thrombopoietin (TPO) are the main hematopoietic growth factors. The effect of erythropoietin on the formation of red blood cells is well known. Thrombopoietin stimulates megakaryopoiesis and platelet formation. During hematopoiesis, EPO and TPO may interact in a synergistic and antagonistic manner. EPO and TPO exhibit significant homology in the receptor binding domains (20% identity and 25% similarity). In this thesis, human EPO protein was produced in bacterial expression system using recombinant DNA technology. The three objectives of this study were to provide the sequence cloned into the E. coli pET30a expression system by bioinformatics studies; Recombinant expression and purification by transformation into E.coli BL21 pLysE cells; Biological characterization for endothelial cells. The selection of transformed cells was carried out on the appropriate antibiotic medium. EPO was expressed with His-tag and Nickel-based affinity chromatography techniques were used for purification. It was analyzed qualitatively by SDS-PAGE method. The biological activity of the recombinant EPO produced in this study was determined by the polylation analysis using human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). However; Studies have been carried out for the production of human TPO protein in yeast expression system using recombinant DNA technology. In this study, pPIC3.5K-TPO vector obtained as a result of bioinformatics studies is artificially provided. The pPIC3.5K-TPO construct was linearized. However, the transformation of Pichia pastoris GS115 into competent cells and its integration into the Pichia pastoris genome could not be achieved.
Benzer Tezler
- İnsan GCSF proteininin koekspresyon ile çözünür formda üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Production, purification and characterization of human GCSF protein in soluble form with co-expression
MUSTAFA SONGUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
BiyomühendislikTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSA GÖKÇE
- Theoretical and experimental study of platelet generation from megakaryocyte in a microfluidic platform
Mikroakışkan platformda megakaryositten trombosit oluşumunun teorik ve deneysel çalışması
GÜNAY ATAK
Doktora
İngilizce
2022
Kimya MühendisliğiYıldız Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HASAN SADIKOĞLU
DR. ÖĞR. ÜYESİ MUHAMMED ENES ORUÇ
- Kan kanseri tedavisinde sıklıkla kullanılan insan hematopoetik büyüme faktörlerinden G-CSF ve GM-CSF'ün rekombinant olarak üretilmesi saflaştırılması ve karakterizasyonu
Production, purification and characterization of recombinant human hematopoietic growth factors such as G-CSF and GM-CSF which are frequently used in leukemia treatment
YASEMİN BOZKURT
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyomühendislikGaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SEÇİL ERDEN TAYHAN
- Cloning, production, purification, and characterization of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF)
Granülosit-koloni uyarıcı faktörü (G-CSF) klonlanması, üretimi, saflaştırma ve karakterizasyonu
CANSIN KIRMAÇOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Akut myeloblastik lösemili hastalarda in vitro kemik iliği myeloid stem hücre kolonilerinin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
HAMZA OKUR
Doktora
Türkçe
1990
OnkolojiHacettepe ÜniversitesiTümör Biyolojisi ve İmmünolojisi Bilim Dalı
PROF. DR. EMİN KANSU