Geri Dön

BeWo insan trophoblastik hücre hattında toxoplasma gondıı'nin toll-lıke reseptörlerle tanınması ve sinyal iletim yolunun araştırılması

Toll-like receptor recognition of toxoplasma gondii in BeWo human trophoblastic cell line and investigation of signal transmission pathway

  1. Tez No: 624713
  2. Yazar: ŞERİFE DAĞLI
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ÖNDER DÜZLÜ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Parazitoloji, Parasitology
  6. Anahtar Kelimeler: Toxoplasma gondii, BeWo hücre hattı, Toll-like reseptör, Toxoplasma gondii, BeWo cell line, Toll-like receptor
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Erciyes Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 77

Özet

BEWO İNSAN TROPHOBLASTİK HÜCRE HATTINDA TOXOPLASMA GONDII'NİN TOLL-LIKE RESEPTÖRLERLE TANINMASI VE SİNYAL İLETİM YOLUNUN ARAŞTIRILMASI Şerife DAĞLI Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü Parazitoloji Anabilim Dalı Yüksek Lisans Tezi, Danışman: Doç. Dr. Önder DÜZLÜ ÖZET Bu çalışma Bewo insan trophoblastik hücre hattında Toxoplasma gondii'nin toll-like reseptörlerle tanınması ve sinyal iletim yolunun araştırılması amacıyla yapılmıştır. Bu amaçla, BeWo hücre kültürü yapılmış, takizoitler ile enfeksiyon öncesi çoğalma işlemini gerçekleştirmek üzere HeLa hücre kültürü kullanılmıştır. Belirlenen sayıda takizoitlerle BeWo hücreleri enfekte edilmiştir. Enfeksiyon sonrası hücre kültüründen alınan örneklerin RNA izolasyonu yapılarak cDNA sentezlenmiştir. BeWo hücrelerinin çözdürülüp flaska ekilmesinnden sonraki ilk günde istenilen seviyede tutunma gerçekleşmediği için deney koşullarının sağlanması ve istenilen sayıda hücre sayısına ulaşılabilmesi amacıyla yıkama ve pasaj prosedürü üç hafta boyunca devam ettirilmiştir. Üst üste birikerek çoğalan hücreler üç günde bir pasajlanmış ve hızlı kontaminasyon nedeniyle her gün yıkanmıştır. Üçüncü haftanın sonunda, 25 cm2'lik flasklarda yaklaşık %80 doluluk görüldüğünde yaklaşık 1x106 Bewo hücresi olduğu belirlenmiştir. Optimal takizoit sayısı ve canlı hücre sayısını belirlemek üzere her gün parazit yoğunluğu invert mikroskopla gözlemlenmiş ve sayılmıştır. Enfeksiyonun en iyi gerçekleştiği BeWo hücrelerinin yoğunlukları 25 cm2 flasklarda 1x106 (~%80) hücre sayısı olarak belirlenip en uygun takizoit-hücre oranının ise 1:5 olduğu bulunmuştur. Gen ekspresyon seviyelerini belirlemek üzere kullanılan RNA örneklerinin nanodrop ölçümleri sonucunda; enfekte hücrelerde 720ng/µl kaliteli RNA olduğu tespit edilmiştir. Bu RNA örnekleri kullanılarak cDNA sentezlenmiş ve qPCR analizleri yapılmıştır. QPCR sonucunda elde edilen Cq değerleri ve deney için kontrol grubunu oluşturan HPRT1 referans geni kullanılarak gen ekspresyonlarındaki orantısal değişim hesaplanmıştır. Toll like reseptör paneli ile 84 adet gen incelenmiş olup bunlardan ACTB, B2M, GAPD, PGK, GUSB, PPIA, RPL13A olmak üzere yedisi 'house keeping' genlerden oluşmaktadır. Referans olarak alınan HPRT1geninin ekspresyon seviyesi temel alınarak program aracılığıyla hesaplanan ve enfeksiyona bağlı olarak gen ekspresyon seviyesinde kontrol grubuna göre anlamlı artış gözlemlenen genler; AKT3, CXCL12, PIK3CB, PIK3CD, PIK3R5, STAT1, CD40, IKBKE, IL1β, MAPK2, MAPK3, NFKB2, TLR1, TLR7 genleridir. İstatistiksel olarak AKT3, CXCL12, PIK3CB, PIK3CD, PIK3R5, STAT1, CD40, IKBKE, IL1β, MAPK2, MAPK3, NFKB2, TLR1, TLR7 genlerinin ekspresyon seviyelerinde anlamlı artış olduğu tespit edilmiştir. Sonuç olarak bu çalışma ile; toll like reseptörlerin sinyal iletim yolunun araştırılması üzerine in vivo şartlarda qPCR kullanarak toll like reseptör yolağı incelenmiş, TLR1 ve TLR7'nin ekspresyon seviyelerinde artış olduğu ve AKT3, CXCL12, PIK3CB, PIK3CD, PIK3R5, STAT1, CD40, IKBKE, IL1β, MAPK2, MAPK3, NFKB2 genlerinin ekspresyon seviyelerinde arttığı gözlemlenmiştir.

Özet (Çeviri)

TOLL-LIKE RECEPTOR RECOGNITION OF TOXOPLASMA GONDII IN BEWO HUMAN TROPHOBLASTIC CELL LINE AND INVESTIGATION OF SIGNAL TRANSMISSION PATHWAY Serıfe DAGLI Erciyes University, Institute of Health Sciences Department of Medical Parasitology M.Sc. Thesis, Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Onder DUZLU ABSTRACT This study was carried out to investigate the recognition of Toxoplasma gondii by toll-like receptors in the Bewo human trophoblastic cell line and signal transduction pathway. For this purpose, BeWo cell culture was performed and HeLa cell culture was used to carry out pre-infection proliferation with tachyzoit. BeWo cells have been infected with a defined number of tachyzoits. After infection, RNA was isolated from the samples cell culture and cDNA was synthesized. Since the BeWo cells were thawed and the desired level of adhesion did not occur on the first day after plaque cultivation, the washing and passage procedure was continued for three weeks to assure the test conditions and to reach the desired number of cells. The overgrown cells were passaged every three days and washed daily due to rapid contamination. At the end of the third week, 25 cm2 flasks were found to have approximately 1x106 Bewo cells when approximately 80% occupied. To determine the optimal number of tachyzoites and the number of viable cells daily, the parasite density was observed and counted with an inverted microscope. The density of the best-performed BeWo cells was found to be 1x106 cells (~ 80%) in 25 cm2 flasks and the optimal ratio of tachyzoit cells was found to be 1:5. As a result of nanodrop measurements of RNA samples used to determine gene expression levels, 720ng/μl of high quality RNA was detected in the infected cells. cDNAs were synthesized using these RNA samples and qPCR analyzes were performed. The proportional change in gene expressions was calculated using the Cq values obtained as a qPCR and the HPRT1 reference gene that constituted the control group for the experiment. 84 genes were examined with toll like receptor panel and seven of them are composed of housekeeping genes including ACTB, B2M, GAPD, PGK, GUSB, PPIA, RPL13A. Genes which were calculated by means of a program on the basis of the expression level of HPRT1 gene taken as a reference and a significant increase in gene expression level according to the infection in relation to the control group; AKT3, CXCL12, PIK3CB, PIK3CD, PIK3R5, STAT1, CD40, IKBKE, IL1β, MAPK2, MAPK3, NFKB2, TLR1, TLR7 genes. Statistically, a significant increase was determined in the expression levels of AKT3, CXCL12, PIK3CB, PIK3CD, PIK3R5, STAT1, CD40, IKBKE, IL1β, MAPK2, MAPK3, NFKB2, TLR1 and TLR7 genes. In conclusion, toll-like receptors were investigated in vivo using qPCR in order to investigate the signal transduction pathway of toll-like receptors, an increase in the expression levels of TLR1 and TLR7, and AKT3, CXCL12, PIK3CB, PIK3CD, PIK3R5, STAT1, CD40, IKBKE, IL1β, MAPK2, MAPK3 , NFKB2 genes was observed.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    614920

    Toxoplasma gondii ile enfekte insan trophoblastik hücrelerinin (BEWO) toll-like reseptör yolağına nitrofurantoinin etkisi

    Influence of nitrofurantoin on toll-like receptor pathway of human trophoblastic cells (BEWO) infected with toxoplasma gondii

    EDA SİVCAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    ParazitolojiErciyes Üniversitesi

    Parazitoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ABDULLAH İNCİ

  2. Tez No

    840176

    Kriyojel ve transwell sisteminde üç boyutlu (3B) plasenta modelinin oluşturulması ve etkinliğinin araştırılması

    Construction of a three dimention (3D) placenta model on cryogel and transwell systems and investigation of its efficiency

    ÜMMÜGÜL GÖZLEK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYSUN KILIÇ SÜLOĞLU

  3. Tez No

    748658

    Bisfenol A'nın trofoblast hücrelerine verdiği hasarda endoplazmik retikulum stresinin rolü

    The role of endoplasmic reticulum stress in the damage of trophoblast cells due to bisphenol A

    FATMA BEYZA SAĞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Histoloji ve Embriyolojiİstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİNE ELİF GÜZEL MEYDANLI

  4. Tez No

    722609

    İnsan plasenta ve endotel hücre hatları ile 3b kriyojel ortak kültür sisteminin oluşturulması ve etkinliğinin araştırılması

    Construction of a 3d cryogel co-culture system using human placental and endothelial cell lines and investigating its efficiency

    MERVE DEMİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYSUN KILIÇ SÜLOĞLU

  5. Tez No

    694090

    Plasenta sferoid (mikro doku) modelinde vortioksetin etkisinin araştırılması

    Investigation of the effect of vortioxetine on placental spheroid (micro tissue) model

    SELEN SANİN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYSUN KILIÇ SÜLOĞLU

Geri Dön