Geri Dön

Laboratuvar hattı Lucilia sericata'nın lucimycin, chymotrypsin, lucifensin genlerinin moleküler karakterizasyonu ve rekombinant füzyon proteinin ekspresyon denemeleri

Molecular characterization of lucimycin, chymotrypsin, lucifensin genes of Lucilia sericata lab line and expression trials of recombinant fusion protein

PDF İndir

  1. Tez No: 651425
  2. Yazar: EMRAH ERDOĞAN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ÖNDER DÜZLÜ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Parazitoloji, Parasitology
  6. Anahtar Kelimeler: Lucilia sericata, Luciymcin, Chymotrypsin, Lucifensin, Moleküler karakterizasyon, Füzyon protein, Lucilia sericata, Luciymcin, Chymotrypsin, Lucifensin, Molecular characterization, Fusion protein
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Erciyes Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 107

Özet

Lucilia sericata, Calliphoridae ailesinin bir üyesidir. Parazitin tıbbi önemi, larvalarının Maggot Debridman Tedavisi'nde kullanılmasıdır. Maggot Debridman Tedavisi'nde etki mekanizması üç şekilde olmaktadır. Bunlardan biri larvaların salgıladığı sekresyonların çeşitli antimikrobiyal ajanlar içermesidir. Larvalar salgıladıkları bu moleküller ile kendilerini polimikrobiyal floradan korumaktadır. Aynı zamanda salgılanan bu moleküller ile yara tedavisine ilginç bir şekilde katkı sunmaktadırlar. Bu çalışma ile, L. sericata lucifensin geninin MT495795 numaralı izolatının ve chymotrypsin geninin MT495794 numaralı izolatının kaydı Genbank'a yapıldı. Türkiye Cumhuriyeti'nden ilk kez bildirilen bu veriler ile literatüre katkı sağlanacaktır. Bu çalışmada; Maggot Debridman Tedavisi'nde kullanılan L. sericata larvalarının salgıladığı önemli defensin moleküllerinden olan; lucimycin, chymotrypsin ve lucifensin genlerinin klonlanmaları, moleküler karakterizasyonları, protein ekspresyonları, antijenik yapılarının analizi amaçlanmıştır. Öncelikle moleküler çalışmalarda kullanılacak L. sericata kolonileri yetiştirilmiştir. Daha sonra larvalardan RNA izolasyonu ve cDNA sentezi gerçekleştirilmiştir. Lucimycin, chymotrypsin ve lucifensin genleri ayrı ayrı pJet1.2 plazmidine klonlama reaksiyonları ile yerleştirilmiştir. Rekombinant plazmid varlıkları tüm basamaklarda PCR tarama, DNA dizi analizi yöntemleri ile doğrulanmıştır. Bu üç gen ekspresyon vektörüne subklonlanarak elde edilen plazmitler kompetan E. coli BL21 hücrelerine transforme edilerek protein ekspresyon çalışmaları yapılmıştır. Çalışmalar sonucunda lucimycin, chymotrypsin ve lucifensin proteinlerinin ekspresyonu gerçekleştirilememiştir. Ayrıca bu genlerin restriksiyon enzimleri ile yapışkan uç protokolüne göre birleştirilmeleri ve bu şekilde füzyon proteinin ekspresyon çalışmaları da yapılmış ve başarılı olunamamıştır. Yara tedavisinde önemli larval bileşenlerden olan bu üç ayrı genin nükleotid ve aminoasit tabanlı moleküler karakterizasyonları yapılmıştır. Proteinlerin antijenik bölgeleri ve üç boyutlu yapıları elde edilmiştir. Son yıllarda karşılaşılan antibiyotiklere direnç sonrasında yara bakımı ve tedavilerinde alternatif olabilecek veya beraber uygulanabileceği bileşiklerin keşfedilmesine ve moleküler karakterizasyonlarına ihtiyaç duyulmaktadır. Bu amaçla farklı alanlardan bilim insanlarının, bu moleküllerin keşfi ve uygulanabilirliği noktasında multidisipliner çalışmalarına kaynak oluşturacak veriler elde edilmiştir.

Özet (Çeviri)

Lucilia sericata is a member of the Calliphoridae family. The medical importance of the parasite is that its larvae are used in Maggot Debridman Treatment. The mechanism of action in Maggot Debridement Treatment is in three ways. One of them is that the secretions secreted by the larvae contain various antimicrobial agents. The larvae protect themselves from polymicrobial flora with these molecules they secrete. In this study, the registration of the isolate numbered MT495795 of the L. sericata lucifensin gene and the isolate numbered MT495794 of the chymotrypsin gene was made to Genbank. The Republic of Turkey for the first time reported data will contribute to the literature with this. In this study, one of the important defensin molecules secreted by L. sericata larvae used in Maggot Debridman Treatment, cloning of lucimycin, chymotrypsin and lucifensin genes, molecular characterizations, protein expressions, analysis of their antigenic structures are aimed. Firstly, L. sericata colonies were grown to be used in molecular studies. Then, RNA isolation and cDNA synthesis were performed from the larvae. Lucimycin, chymotrypsin and lucifensin genes were individually inserted into the pJet1.2 plasmid by cloning reactions. Recombinant plasmid assets were verified by PCR scanning and DNA sequence analysis methods in all steps. Plasmids obtained by subcloning these three gene expression vectors were transformed into competent E. coli BL21 cells and protein expression studies were performed. As a result of the studies, expression of lucimycin, chymotrypsin and lucifensin proteins could not be achieved. In addition, these genes were combined with restriction enzymes according to the adhesive tip protocol, and expression studies of the fusion protein were also performed and were not successful. Nucleotide and amino acid based molecular characterizations of these three separate genes, which are important larval components in wound treatment, have been performed. Antigenic regions and three-dimensional structures of proteins were obtained. After resistance to antibiotics encountered in recent years, there is a need for the discovery and molecular characterization of the compounds that may be alternative or can be applied together in wound care and treatments. For this purpose, data that will be used as a source for multidisciplinary studies of scientists from different fields on the discovery and applicability of these molecules have been obtained.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    75050

    A Study on oxygen transfer organic matter removal and nitrification in sewer lines

    Kanalizasyon sistemlerinde oksijen transferi, organik madde giderimi ve nitrifikasyon

    AHMET BABAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    İnşaat Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Çevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İLHAN TALINLI

  2. Tez No

    360719

    Laboratuvar tipi filament iplik makinesinin tasarımı, imalatı ve özgün ürün geliştirme çalışmaları

    Design and manufacture of laboratory type filament yarn machine and development of original product

    SELCEN ÖZKAN HACIOĞULLARI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Polimer Bilim ve TeknolojisiÇukurova Üniversitesi

    Tekstil Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OSMAN BABAARSLAN

  3. Tez No

    460901

    Gömülü iletim hattı yapılarında darbe etkilerinin geosentetikler vasıtası ile azaltımı

    A study on the reduction of impact effects on buried lifeline system components by geosynthetics

    GÜNEŞ BABAGİRAY

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    İnşaat MühendisliğiGazi Üniversitesi

    İnşaat Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SAMİ OĞUZHAN AKBAŞ

  4. Tez No

    623511

    Şap virüsü izolasyonu ve teşhisi için fetal sığır dilinden hücre hattı oluşturulması ve karakterizasyonu

    Establishment and characterization of fetal bovine tongue cell line for detection and isolation of foot and mouth disease virus

    ŞÜKRAN YILMAZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyoteknolojiEskişehir Osmangazi Üniversitesi

    Biyoteknoloji ve Biyogüvenlik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DİDEM TURGUT COŞAN

  5. Tez No

    790242

    Laboratuvar ölçekli bir biyobenzerin biyofarmasötik sürecinin geliştirilmesi

    Development of the biopharmaceutical process of a lab-scale biosimilar

    TUĞÇE ANAKÖK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiEge Üniversitesi

    Farmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ERCÜMENT KARASULU

Geri Dön