Populus tremula (Titrek kavak) doku kültürlerine peroksidaz genlerinin agrobacterium tumefaciens aracılığı ile aktarılması
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 66262
- Danışmanlar: PROF. DR. NERMİN GÖZÜKIRMIZI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1997
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 78
Özet
V. ÖZET Populus tremula (Titrek Kavak) Doku Kültürlerine Peroksidaz Genlerinin Agrobacterium tumefaciens Aracılığı İle Aktarılması 8u çalışmada Populus tremula 'ma Dursun bey 2 klonuna ait doku kültürü sistemi kurularak, Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla antisens peroksidaz geni aktarıldı. Populus tremula doku kültürlerinin kurulmasında internod parçalan kullanılarak gövde rejenerasyonu için 0.05 mg/1 NAA ve 2.25 mg/1 6-BAP içeren MS, 0.5 mg/1 6-BAP ve 0.02 mg/1 NAA içeren ACM ve 1 mg/1 zeatin içeren WPM besiyerleri kullanıldı. En iyi rejenerasyon yanıtı 1 mg/1 zeatin içeren WPM besiyerinde 2 haftada sağlandı (%100). Bitkicikler kök oluşumu için 1 mg/1 IBA ve 0.1 mg/1 NAA içeren 1/4 WPM, 0.5 mg/1 IBA içeren WPM ve 2 mg/1 IBA içeren WPM besiyerlerine aktarıldı. En iyi kök oluşumu 1 haftada 0.5 mg/1 IBA içeren WPM (% 95) ve 2 mg/1 IBA içeren WPM (% 100) besiyerlerinde gözlendi. In vitro' da. köklenen bitkiler, 4:1:1 oranında yaprak çürüğü:kum:perlit içeren ve 3/4 oranında humus: 1/4 oranında kum içeren steril toprak karışımlarına aktarıldılar. 3/4 humus: 1/4 kum içeren toprak karışımında bitkiler % 90 oranında yeni ortam koşullarına adaptasyon sağladı. Transformasyon çalışmalarında lignin biyosentezinin son aşamasında iş gören ligninin polimerizasyonunu sağlayan peroksidazın, aktivitesinin azaltılması amacıyla antisens peroksidaz (Stylosonthes humilis Shpx6) dizisi kullanıldı. Shpx6 genini antisens konumda içeren pGA 643 plazmidini taşıyan Agrobacterium tumefaciens LBA 4404 susu Populus tremula gövde eksplantları ile ko-kultivasyondan sonra WPM + 1 mg/1 zeatin + 50 mg/1 Km + 500 mg/1 Cx içeren selektif besiyerine alındı. Tüm 58kültürler 25°C'de 16 saat ışık, 8 saat karanlık periyodundaki kontrollü bitki büyütme kabininde tutuldu. Selektif besiyerinde % 78 oranında gövde rejenerasyonu sağlandı. Transgenik bitkilerin DNA düzeyindeki analizi, pGA 643 plazmidinde antisens Shpx6 geni ile birlikte bulunan NPT II genine özgün primerler kullanılarak indirekt olarak PCR ile yapıldı. Transgenik bitkilerde protein düzeyinde SDS-poliakrilamid jel elektroforezi kullanılarak total soluble proteinlerin analizi yapıldı. Transgenik bitkilerde peroksidazın belirlenmesi için de nativ poliakrilamid jel elektroforezi kullanıldı. Total peroksidaz aktivitesinin ve total lignin miktanmn belirlenmesi ise spektrofotometrik yöntemler kullanılarak gösterildi. Transgenik bitkilerde peroksidaz aktivitesinin ve lignin miktanmn kontrol bitkilere göre azaldığı gözlendi. 59
Özet (Çeviri)
SUMMARY Agrobacteriunp-mediated Transformation of Peroxidase Genes to Tissue Culture of Populus tremula In this study, tissue culture of Dursun bey 2 clone of Populus tremula were transformed with an antisense peroxidase gene via Agrobacterium tumefaciens. Stem explants were used for establishment of tissue culture of Populus tremula. For shoot regeneration, MS medium supplemented with 0.05 mg/1 NAA and 2.25 mg/1 6-BAP, ACM supplemented with 0.5 mg/1 6-BAP and 0.02 mg/1 NAA and WPM medium supplemented with 1 mg/1 zeatin were used. The best regeneration respond was obtained on WPM medium containing 1 mg/1 zeatin in two weeks (%100). The plantlets were transferred to 1/4 WPM containing 1 mg/1 IBA and 0.1 mg/1 NAA, WPM containing 0.5 mg/1 IBA and WPM containing 2 mg/1 IBA for root formation. The best root formation was obtained on WPM containing 0.5 mg/1 IBA (% 95) and WPM containing 2 mg/1 IBA (%100). In vitro regenerated plants were transferred to soil containing compost:sand:perlit in a ratio of 4: 1: 1 and soil containing humus in a ratio of 3/4 and sand in a ratio of 1/4. Adaptaion of rooted plantlets to greenhouse conditions was %90 in the soil containing 3/4 humus and 1/4 sand. In the transformation studies, a antisense peroxidase (Stylosanthes humilis Shpx6) sequence was used for reducing peroxidase activity, an enzyme which is related with the polimerization of the lignin biosynthesis. After co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens LBA 4404 strain carrying the pGA 643 plasmid with Shpx6 gene in antisense orientation, stem explants of Populus tremula were cultured on WPM+1 mg/1 zeatin+50 mg/1 Km+ 500 mg/1 Cx. All the cultures were kept under 25°C, 16 60hours light, 8 hours dark period in a controlled growth chamber. Regeneration efficiency on selective medium was %78. Analysis of transgenic plants on DNA level were examined by PCR indirectly with primers specific to NPT II gene which is in pGA 643 plasmid with antisense Shpx6 gene. On protein level analysis of total soluble proteins of transgenic plants were performed by using SDS-polyacrylamid gel electrophoresis. For observation of peroxidases of transgenic plants, native polyacrylamid gel electrophoresis was used. Total peroxidase activity and total lignin content was performed spectrophotometrically. A reduction of total peroxidase activity and total lignin content was observed in transgenic plants compared with control plants. 61
Benzer Tezler
- Titrek kavak (Populus tremula L. )ve Kafkas ıhlamuru (Tilia rubra DC.)'nun doku kültürü teknikleri ile üretilmesi
Propagation of european aspen (Populus tremula L.) and Caucasian linden (Tilia rubra DC.) using by tissue culture technigues
ALİ ÖMER ÜÇLER
Doktora
Türkçe
1994
Ormancılık ve Orman MühendisliğiKaradeniz Teknik ÜniversitesiOrman Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ZEKİ YAHYAOĞLU
- Uludağ'da (Bursa) yayılış gösteren titrek kavak (Populus tremula L. ) üzerindeki epifitik liken çeşitliliğinin belirlenmesi
Determination of epiphytic lichen diversity on Populus tremula L. (European aspen) in Uludağ mountain (Bursa).
NEVİN HOCAOĞLU
- Doğal titrek kavak (Populus tremula L.) ormanı ölü örtüsü ile sulu çözeltilerden bakır ve krom giderimi
Removal of copper and chromium from aqueous solutions by litter of natural trembling poplar (Populus tremula L.) forest
MURAT DÜNDAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2004
Çevre MühendisliğiAtatürk ÜniversitesiÇevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. YAŞAR NUHOĞLU
- Titrek kavak (populus tremula L.) ve kağıt sanayi
Suitability of trembling aspen (Populus tremula L.) for pulp and paper industry
CELİL ATİK
Yüksek Lisans
Türkçe
1995
Ormancılık ve Orman Mühendisliğiİstanbul ÜniversitesiOrman Endüstri Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF.DR. EROL GÖKSEL