Escherichia coli ekspresyon sistemine dayalı rekombinant viral hemorajik septisemi virusu glikoprotein G'nin üretilmesi ve immünolojik etkinliğinin araştırılması
The production of recombinant viral hemorrhagic septisemi viral glycoproteine that is based on the escherichia coli expression system and investigation of immunological effectiveness
- Tez No: 694162
- Danışmanlar: PROF. DR. SEMRA GÜMÜŞOVA
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ondokuz Mayıs Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veterinerlik Viroloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 69
Özet
Amaç: Son yıllarda, su ürünleri yetiştiriciliği sektörü dünya çapında sürekli bir büyüme içindedir. Yabani balık popülasyonlarında genelde sporadik olarak ortaya çıkan bulaşıcı hastalıklar, intansif balık yetiştiriciliğinde ise yüksek ölüm oranlarına neden olmaktadır. Bununla birlikte, balık yetiştiriciliği endüstrisinin geleceği için, antibiyotik tüketiminin azaltılması ve balık aşılarının yaygın kullanıma sunulması önemlidir. Viral hemorajik septisemi virusu (VHSV), deniz ve çiftlik balıklarında yüksek ölüm oranına (%70) neden olan Rhabdoviridae ailesininde, zarflı, tek iplikçikli bir RNA içeren virusudur. Bu tez ile, balıklarda VHSV nedeniyle oluşan mortalitenin azaltılabilmesi için Escherichia coli ekspresyon sistemine dayalı rekombinant subunit bir aşı geliştirilmesi amaçlanmıştır. Materyal ve Metot: VHSV'ye karşı rekombinant aşı geliştirmek amacıyla VHSV'nin gG geni polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yöntemiyle çoğaltılarak rekombinant protein ürünleri elde etmek için bir Escherichia coli (E. coli) ekspresyon vektörüne (pET-28a) klonlandı. Diğer yandan formol ile inaktive edilmiş tam partikül aşı hazırlanarak ekspres edilmiş gG proteinini içeren rekombinant aşının antikor cevabını ve koruyucu etkinliğini belirlemek için bir deneme tasarlandı. Bu amaçla, 17-60 gram ağırlığındaki gökkuşağı alabalıkları, adjuvantlı (montanit) saflaştırılmış rekombinant VHSV gG proteinleri ve adjuvantlı inaktif tam partikül aşı ile intraperitonal yolla aşılandı. Ardından gökkuşağı alabalığında orta derecede virülent VHSV (%30-35 mortalite oranına sahip) ile eprüvasyon yapıldı. Deneme boyunca belirli günlerde balıklardaki viral yük ve serum antikor titresi hesaplanarak aşıların etkinlikleri değerlendirildi. Bulgular: Rekombinant E. coli ekspresyon sisteminde üretilmiş gG proteini ile aşılama yapılan balıkların serum örneklerinde, kontrol grubunda yer alan balıkların serum örneklerine kıyasla önemli ölçüde (P
Özet (Çeviri)
Aim: During the last decades, there has been a continuous growth in the aquaculture industry all over the world. Infectious diseases that occur as a sporadic event in wild fish populations may cause high mortality when present in intensive fish farming. However, for the future of the fish farming industry it is also important that vaccination contributes to a sustainable biological production with negligible consumption of antibiotics. Viral heamorrhagic septicemia (VHS), a significant disease cause high mortalty (70%) especially in fry of farmed fish worldwide, is caused by infectious viral heamorrhagic septicemia virus (VHSV), a member of the family Rhabdoviridae, a family of enveloped, single-stranded RNA viruses with a non-segmented genome encoding six proteins. In this thesis, it was aimed to develop a recombinant subunit vaccine based on Escherichia coli expression system in order to reduce mortality caused by VHSV in fish. Material and Method: To develop a recombinant vaccine for VHSV, the gG gene of VHSV produced by polymerase chain reaction (PCR) method, was cloned into an Escherichia coli (E. coli) expression vector (pET-28a) to produce recombinant protein products. Besides, formol-inactivated whole particle vaccine was prepared and a trial was designed to determine the antibody responses and protective capacity of the gG expressed recombinant vaccine. Subsequently, rainbow trout weighing between 17-60 grams were inoculated by injecting purified recombinant VHSV gG proteins with adjuvant (montanide) and whole particle inactive vaccine with adjuvant, followed by challenge with moderate virulent VHSV (30-35% mortality rate) in rainbow trout. The efficacy of the vaccines was evaluated by calculating the viral load and serum antibody titer in fish on certain days during the trial. Results: It was found that recombinant E. coli derived gG protein induced significantly (P < 0.05) higher IgG antibody response in serum samples compared to control groups. At the end of the study, it was determined that the mortality rate decreased from 15% to 10% after intraperitoneal vaccination. In addition, no mortality was observed in the inactive whole particle vaccine group (0%). The viral loads significantly decreased in grafted trout were verified by rRT-PCR. Conclusion: It was found that recombinant vaccine that produce from local isolates were not more effective in rainbow trout as inactivated whole particul vaccine despite of the recombinant vaccine produced more neutralizing antibodies. In addition, at the end of Day 42, approximately 1000 times decreasing at the viral load was found in the recombinant vaccinated trout.
Benzer Tezler
- Development and structural determination of antiangiogenic recombinant antibody structures for cancer treatment
Kanser tedavisine yönelik antianjiogenik rekombinant antikor yapılarının geliştirilmesi ve yapısal tayini
MELİS DENİZCİ ÖNCÜ
Doktora
İngilizce
2022
Biyomühendislikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
DR. AYLİN ÖZDEMİR BAHADIR
- Hypoderma bovis hypodermin rekombinant antijenlerinin karakterizasyonu, ekspresyon profilleri ve serolojik teşhisteki etkinliklerinin değerlendirilmesi
Characterization and expression profiles of hypoderma bovis hypodermin recombinant antigens and assesment of their serodiagnostic efficiencies
MÜBECCEL OKUR
Doktora
Türkçe
2020
ParazitolojiErciyes ÜniversitesiParazitoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDULLAH İNCİ
- Zymomonas mobilis levansukraz geninin Lactococcus Lactis konakçısına klonlama çalışmaları
Cloning strategies of Zymomonas mobilis levansucrase gene into Lactococcus lactis expresson host
İREM YAPANMIŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BURCU KAPLAN TÜRKÖZ
- Prolil endopeptidaz (PEP) enziminin Escherichia coli ekspresyon sisteminde çözünür formda eldesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Obtaining, purification and characterization of soluble form of prolyl endopeptidaze (PEP) enzyme in Escherichia coli expression system
NEJLA BAKIR
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyomühendislikTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSA GÖKÇE
- Biyofiziksel çalışmalar için DsRed (mCherry) floresan proteinin Escherichia coli'de üretilmesi
Expression of DsRed (mCherry) fluorescence protein in Escherichia coli for biophysical studies
BAHADIR ATAMAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyokimyaGaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSA GÖKÇE