Geri Dön

Plasenta kaynaklı mezenkimal kök hücrelerden eksozomların izolasyonu, karakterizasyonu ve ilaç taşıyıcı sistem olarak etkinliğinin araştırılması

Isolation and characterization of exosomes from placenta originating mesenchymal stem cells and investigation of its effectiveness as a drug delivery system

PDF İndir

  1. Tez No: 734125
  2. Yazar: BURÇİN İREM ABAS
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ÖZGE ÇEVİK
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biyoteknoloji, Onkoloji, Biochemistry, Biotechnology, Oncology
  6. Anahtar Kelimeler: Dosetaksel, Eksozom, Mezenkimal kök hücre, Plasenta, Servikal kanser, Docetaxel, Exosome, Mesenchymal stem cell, Placenta, Cervical cancer
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya (Tıp) Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 163

Özet

Amaç: Mezenkimal kök hücreler (MSC), kendi kendini yenileme yeteneğine sahip doku kaynaklı hücrelerdir ve çeşitli hücre soylarına farklılaşabilirler. Plasenta, fetal toleransı koruyan ve zengin bir MSC rezervuarı oluşturan geçici bir organdır. MSC'ler invaziv prosedürler olmaksızın plasentadan kolayca izole edildiğinden, kullanımları etik kaygılara yol açmaz. Büyüme faktörleri, sitokinler, kemokinler, mikroveziküller (200-1000 nm çap) ve eksozomlar (40-200 nm çap) gibi ekstrasellüler vezikül salgı proteinleri dahil olmak üzere MSC'lerin sekretomunun, MSC'lerin terapötik özelliklerinin çoğunu sergilediği gösterilmiştir. Bu çalışmanın amacı, plasenta kaynaklı mezenkimal kök hücrelerden salınan eksozomların, dosetaksel (DOC) ile fonksiyonel hale getirilerek serviks kanseri tedavisinde etkisinin araştırılmasıdır. Gereç ve Yöntem: Tip I kollajenaz ile doku inkübasyonu sonucu MSC'ler plasentadan izole edildi. İzole MSC'leri tanımlamak için CD44, CD90, CD105 ve CD34 kullanıldı. Eksozomlar, her 48 saatte bir, ultrasantrifüj yöntemi kullanılarak MSC açlık ortamından izole edildi. Santrifüjlemeden sonra, eksozom pelletleri PBS içinde yeniden süspanse edildi ve Exo-Quick eksozom saflaştırma kiti ile saflaştırıldı. Saflaştırılmış eksozomlar, partikül boyutu ve yapısının yanı sıra CD9, CD63 ve CD81 işaretçileri kullanılarak karakterize edildi. MSC'den türetilen eksozomlar, docetaxel (EXO-DOC) ile elektroporasyona tabi tutuldu ve ardından 24 ve 48 saat boyunca HeLa rahim ağzı kanseri hücreleri ile inkübe edilerek sitotoksisite testleri yapıldı. Bulgular: Taramalı elektron mikroskobu, saf ve docetaxel yüklü eksozomların partikül boyutunu ve yapısını sırasıyla 81 ve 107 nm olarak ortaya koymuştur. Dosetaksel yüklü eksozomlar daha kısa sürede ve daha düşük konsantrasyonlarda etkinlik gösterir. Western blot ve qPCR sonuçlarına göre EXODOC, rahim ağzı kanseri hücrelerinde apoptozu artırır ve epitelyal mezenkimal geçişi(EMT) azaltır. Sonuç: Plasentanın eksozomları doğumdan sonra izole edilirse ilaç taşıyıcı sistem olarak kullanılabilirler ve bu eksozomlar ilacın hücrelere girişini kolaylaştırarak ilaçların düşük dozlarda daha etkili olmasını sağlar. Bu çalışmanın bulguları, antikanser tedaviler için yeni ilaç dağıtım sistemlerinin geliştirilmesinde plasenta kaynaklı eksozomların kullanılması potansiyelini arttırmaya yardımcı olacaktır.

Özet (Çeviri)

Aim: Mesenchymal stem cells (MSC) are tissue-derived cells with the self-renewing ability and can differentiate into various cell lineages. The placenta is a transient organ that maintains fetal tolerance and constitutes a rich reservoir of MSC. Since MSCs are readily isolated from the placenta without invasive procedures, their use does not elicit ethical concerns. The secretome of MSCs, including growth factors, cytokines, chemokines, microvesicles and exosomes has been shown to exhibit many of the therapeutic properties of MSCs. The purpose of this study is to look into the effect of exosomes released from placenta-derived mesenchymal stem cells in the treatment of cervical cancer by making them functional with docetaxel (DOC). Material and Method: Following the incubation with type I collagenase, MSCs were isolated from the placenta. CD44, CD90, CD105 and CD34 were used to identify isolated MSCs. Exosomes were isolated from the MSC starvation medium using and ultracentrifugation method every 48 hours. After centrifugation, exosome pellets were resuspended in PBS and purified by Exo-Quick exosome purification kit. Purified exosomes were characterized using particle size and structure, as well as CD9, CD63 and CD81 markers. MSC-derived exosomes were electroporated with docetaxel (EXO-DOC) and then incubated with HeLa cervical cancer cells for 24 and 48 hours. Cytotoxicity tests, western blotting and qPCR analysis were performed. Results: Scanning electron microscopy has revealed the particles size and structure of pure and docetaxel-loaded exosomes as 81 and 107 nm respectively. Docetaxel-loaded exosomes show efficacy in a shorter time and at lower concentrations. According to western blotting and qPCR results EXODOC increases apoptosis and decreases epithelial-mesenchymal transition (EMT) in HeLa cells. Conclusion: If the exosomes of placenta excreted after birth are isolated, they can be used as a drug delivery system and these exosomes facilitate drug entry into the cells, making drugs more effective at low doses. The findings of this study will help to increase the potential for using the placenta-derived exosomes in the development of new drug delivery systems for anticancer therapies.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    424653

    Plasental kaynaklı mezenkimal kök hücrelerinin kronik böbrek yetmezliğinde proliferasyon ve apoptoz mekanizmalarına etkisi

    Effects of placental-derived mesenchymal stem cells on proliferation and apoptosis mechanisms in chronic kidney disease

    BÜŞRA ÇETİNKAYA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Histoloji ve EmbriyolojiAkdeniz Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİN TÜRKAY KORGUN

  2. Tez No

    445330

    İn-vitro ortamda farklı kaynaklardan elde edilen mezenkimal kök hücrelerde adrenerjik reseptörlerin gösterilmesi ve reseptör blokajının farklılaşmaya etkisi

    Investigation of adrenergic receptors in mesenchymal stem cells obtained from different sources in vitro and influence of receptor block on differentiation

    ERKAN MAYTALMAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Eczacılık ve FarmakolojiÇukurova Üniversitesi

    Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FAZİLET AKSU

  3. Tez No

    867050

    Assessment of the effects of melatonin on the funtional deficits induced by cellular stress in obese donor derived mesenchymal STEM cells

    Melatonin'in obez donor mezenkimal kök hücrelerinde hücresel strese bağlı olarak oluşan fonksiyon bozuklukları üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesi

    ECE GİZEM POLAT

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATİMA SUSANNA FAUSTINA AERTS KAYA

  4. Tez No

    780541

    Plasenta-kaynaklı mezenkimal kök/stromal hücrelerin izolasyonu, çoğaltılması ve biyokompozitler üzerindeki davranışlarının incelenmesi

    Isolation and expansion of placenta-derived mesenchymal stem/stromal cells and evaluation of their properties on biocomposites

    MELİSA BAŞTUĞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyoteknolojiAnkara Üniversitesi

    Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞE ESER ELÇİN

  5. Tez No

    520457

    Sıçanlarda kronik böbrek yetmezliğinin progresyonunda adiponektin etki mekanizması ve bu mekanizma üzerine plasenta kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin etkisi

    The effect of adiponectin on the protection of chronic renal failure in rats and the effect of placental mesenchymal stem cells on this mechanism

    EZGİ AKAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyokimyaAkdeniz Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. DİJLE KİPMEN KORGUN

Geri Dön