Plasenta kaynaklı mezenkimal kök hücrelerden eksozomların izolasyonu, karakterizasyonu ve ilaç taşıyıcı sistem olarak etkinliğinin araştırılması
Isolation and characterization of exosomes from placenta originating mesenchymal stem cells and investigation of its effectiveness as a drug delivery system
- Tez No: 734125
- Danışmanlar: PROF. DR. ÖZGE ÇEVİK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biyoteknoloji, Onkoloji, Biochemistry, Biotechnology, Oncology
- Anahtar Kelimeler: Dosetaksel, Eksozom, Mezenkimal kök hücre, Plasenta, Servikal kanser, Docetaxel, Exosome, Mesenchymal stem cell, Placenta, Cervical cancer
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya (Tıp) Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 163
Özet
Amaç: Mezenkimal kök hücreler (MSC), kendi kendini yenileme yeteneğine sahip doku kaynaklı hücrelerdir ve çeşitli hücre soylarına farklılaşabilirler. Plasenta, fetal toleransı koruyan ve zengin bir MSC rezervuarı oluşturan geçici bir organdır. MSC'ler invaziv prosedürler olmaksızın plasentadan kolayca izole edildiğinden, kullanımları etik kaygılara yol açmaz. Büyüme faktörleri, sitokinler, kemokinler, mikroveziküller (200-1000 nm çap) ve eksozomlar (40-200 nm çap) gibi ekstrasellüler vezikül salgı proteinleri dahil olmak üzere MSC'lerin sekretomunun, MSC'lerin terapötik özelliklerinin çoğunu sergilediği gösterilmiştir. Bu çalışmanın amacı, plasenta kaynaklı mezenkimal kök hücrelerden salınan eksozomların, dosetaksel (DOC) ile fonksiyonel hale getirilerek serviks kanseri tedavisinde etkisinin araştırılmasıdır. Gereç ve Yöntem: Tip I kollajenaz ile doku inkübasyonu sonucu MSC'ler plasentadan izole edildi. İzole MSC'leri tanımlamak için CD44, CD90, CD105 ve CD34 kullanıldı. Eksozomlar, her 48 saatte bir, ultrasantrifüj yöntemi kullanılarak MSC açlık ortamından izole edildi. Santrifüjlemeden sonra, eksozom pelletleri PBS içinde yeniden süspanse edildi ve Exo-Quick eksozom saflaştırma kiti ile saflaştırıldı. Saflaştırılmış eksozomlar, partikül boyutu ve yapısının yanı sıra CD9, CD63 ve CD81 işaretçileri kullanılarak karakterize edildi. MSC'den türetilen eksozomlar, docetaxel (EXO-DOC) ile elektroporasyona tabi tutuldu ve ardından 24 ve 48 saat boyunca HeLa rahim ağzı kanseri hücreleri ile inkübe edilerek sitotoksisite testleri yapıldı. Bulgular: Taramalı elektron mikroskobu, saf ve docetaxel yüklü eksozomların partikül boyutunu ve yapısını sırasıyla 81 ve 107 nm olarak ortaya koymuştur. Dosetaksel yüklü eksozomlar daha kısa sürede ve daha düşük konsantrasyonlarda etkinlik gösterir. Western blot ve qPCR sonuçlarına göre EXODOC, rahim ağzı kanseri hücrelerinde apoptozu artırır ve epitelyal mezenkimal geçişi(EMT) azaltır. Sonuç: Plasentanın eksozomları doğumdan sonra izole edilirse ilaç taşıyıcı sistem olarak kullanılabilirler ve bu eksozomlar ilacın hücrelere girişini kolaylaştırarak ilaçların düşük dozlarda daha etkili olmasını sağlar. Bu çalışmanın bulguları, antikanser tedaviler için yeni ilaç dağıtım sistemlerinin geliştirilmesinde plasenta kaynaklı eksozomların kullanılması potansiyelini arttırmaya yardımcı olacaktır.
Özet (Çeviri)
Aim: Mesenchymal stem cells (MSC) are tissue-derived cells with the self-renewing ability and can differentiate into various cell lineages. The placenta is a transient organ that maintains fetal tolerance and constitutes a rich reservoir of MSC. Since MSCs are readily isolated from the placenta without invasive procedures, their use does not elicit ethical concerns. The secretome of MSCs, including growth factors, cytokines, chemokines, microvesicles and exosomes has been shown to exhibit many of the therapeutic properties of MSCs. The purpose of this study is to look into the effect of exosomes released from placenta-derived mesenchymal stem cells in the treatment of cervical cancer by making them functional with docetaxel (DOC). Material and Method: Following the incubation with type I collagenase, MSCs were isolated from the placenta. CD44, CD90, CD105 and CD34 were used to identify isolated MSCs. Exosomes were isolated from the MSC starvation medium using and ultracentrifugation method every 48 hours. After centrifugation, exosome pellets were resuspended in PBS and purified by Exo-Quick exosome purification kit. Purified exosomes were characterized using particle size and structure, as well as CD9, CD63 and CD81 markers. MSC-derived exosomes were electroporated with docetaxel (EXO-DOC) and then incubated with HeLa cervical cancer cells for 24 and 48 hours. Cytotoxicity tests, western blotting and qPCR analysis were performed. Results: Scanning electron microscopy has revealed the particles size and structure of pure and docetaxel-loaded exosomes as 81 and 107 nm respectively. Docetaxel-loaded exosomes show efficacy in a shorter time and at lower concentrations. According to western blotting and qPCR results EXODOC increases apoptosis and decreases epithelial-mesenchymal transition (EMT) in HeLa cells. Conclusion: If the exosomes of placenta excreted after birth are isolated, they can be used as a drug delivery system and these exosomes facilitate drug entry into the cells, making drugs more effective at low doses. The findings of this study will help to increase the potential for using the placenta-derived exosomes in the development of new drug delivery systems for anticancer therapies.
Benzer Tezler
- 11-14 gebelik haftaları arası transabdominal uterin arter doppler ultrasonografinin yüksek riskli gebelerde kötü gebelik sonuçlarını tahmini
Transabdominal uterine artery doppler between 11 and 14 weeks of gestation for the prediction of outcome in high-risk pregnancies
ALİ EMRE TAHAOĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
Kadın Hastalıkları ve DoğumSağlık BakanlığıKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
UZMAN SİMTEN GENÇ
- Klon ve normal sığır embriyo plasentalarında insülin benzeri büyüme faktör-ı (IGF-I), vasküler endotelyal büyüme faktör (VEGF) ve nöronal hücre adhezyon molekül (NCAM) ekspresyonun immunositokimyasal ve moleküler tekniklerle incelenmesi
Evaluation of expression of insulin-like growth factor-i (IGF-I), vascular endothelial growth factor (VEGF) and neuronal cell adhesion molecule (NCAM) by immunocytochemical and molecular techniques in cloned and normal bovine placentas
FATİH KARAKAYA
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyoteknolojiKocaeli ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKKI DALÇIK
PROF. DR. SEZEN ARAT
- Günaşımı olan hastalarda doğum indüksiyonu için kullanılan kontrollü salınımlı dinoproston (prostaglandin E2) vajinal ovülün feto-plasental kan akımı üzerine etkisi ve eşlik eden oligohidramniosu olan vakalarda kullanılmasının fetal ve uterin arter dopplerleri ile değerlendirilmesi
The effect of sustained-release formulation of dinoprostone (prostaglandin E2) for vaginal insertion used for labor induction in postterm pregnancies on fetplasental blood flow and the evaluation of its use by fetal and uterin arterial doppler ultrasonography in postterm pregnancies with oligohydramnios
DERYA AKDAĞ CIRIK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2008
Kadın Hastalıkları ve DoğumSağlık BakanlığıKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. DENİZ KARÇAALTINCABA
DOÇ. DR. NECİP ÖMER KANDEMİR
- Deneysel hipertiroidi oluşturulmuş gebe sıçanların uterus ve plasenta dokularında osteonektin (SPARC) ve TGFβ-1 dağılımının immünohistokimyasal olarak incelenmesi
The immunohistochemical analysis of osteonectin (SPARC) ve TGFβ-1 distribution in the placenta and uterin tissues of pregnant rats with experimentally induced hyperthyroid
RUKİYE KARABACAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
Histoloji ve EmbriyolojiTrakya ÜniversitesiMorfoloji (Histoloji ve Embriyoloji) Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TURAN KARACA
- Plasenta previa
Başlık çevirisi yok
BİROL GEZGİN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1972
Kadın Hastalıkları ve DoğumAtatürk ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı