Geri Dön

Karışım örneklerinde kan ve tükürük örneklerinin miRNA ile ayırımı

Separation of blood and saliva samples with miRNA in mixed samples

  1. Tez No: 783737
  2. Yazar: REMZİYE ATALAY
  3. Danışmanlar: PROF. DR. EMEL HÜLYA YÜKSELOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Adli Tıp, Forensic Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: miRNA, karışım örnekleri, kan, tükürük, Real Time PCR, miRNA, mix samples, blood, saliva, Real Time PCR
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa
  10. Enstitü: Adli Tıp ve Adli Bilimler Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Fen Bilimleri Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 103

Özet

Adli vakalarda, olay yerinden toplanan biyolojik örnekler olayın aydınlatılması için kanıt olma özelliği taşır. Bu nedenle olay yerinden toplanmaları, uygun koşullarda saklanmaları ve doğru yöntemlerle analiz edilip yorumlanmaları gerekir. Her bir olay yeri kendine özgü olsa da fail ve/veya mağdurun ardında bıraktığı vücut sıvıları (ter, idrar, semen, tükürük, kan vs.) sınırlıdır. Yapılan çalışmalarda, bu vücut sıvılarından güvenilir yorumlar yapabilmek için çeşitli genetik faktörler kullanılmaktadır. Son on yılda, adli amaçla, diğer yöntemlerden farklı olarak mikroRNA'lar (miRNA) kullanılmaya başlanmıştır. Kapsüllü, çevresel değişikliklere dirençli olan miRNA'ların, vücut sıvılarına özgü olmalarının yanı sıra birbirinin aynı Deoksiribo Nükleik Asit (DNA) dizilimine sahip monozigotik ikizlerde farklı biyo belirteçler göstermeleri onları çok önemli ve çalışılmaya değer kılmaktadır. Güncel olarak vücut sıvılarını belirleme, monozigot ikizleri ayırt etme, periferik kan ile menstrual kanı birbirinden ayırma, bozulmuş örneklerde faili belirleme, postmortem interval tayininde kullanılabilirliği çalışılmaktadır. Fakat adaletin sağlanması ve adli olayların aydınlatılmasına olanak sağlayan bu çalışmalar arasında günümüzde sık rastladığımız çok failli cinsel istismar, cinayet ve benzeri (vb.) vakalarda sorun oluşturan karışım örnekleri henüz çalışılmamıştır. Bu çalışma ile karışım örneklerinde, miRNA biyo belirteçleri kullanarak, karışımdaki vücut sıvılarının varlığını göstermek amaçlanmıştır. Bu çalışma için gönüllülerden kan ve tükürük örnekleri toplanmıştır. Toplanan örnekler iki donörlü karışımlar olarak dört farklı grupta hazırlanmıştır. Her bir grup için 1/1, 1/10, 1/20, 1/50, 1/100 dilüsyonlu örnekler hazırlanmıştır. 4 kadın ve 4 erkek bireyden toplanan sıvılarından toplam 36 karışım örneği oluşturulmuştur. Hazırladığımız karışım örneklerinde kan varlığını göstermek için miR-451A biyo belirteci, tükürük varlığını göstermek için miR-203A-3p biyo belirteci tercih edilmiştir. Örnekler ilk olarak santrifüj edilip ardından miRNeasy Mini Kit kullanılarak RNA izolasyonu yapılmıştır. Elde edilen RNA'ların konsantrasyonu ve saflığı spektrofotometre ile tayin edilmiştir. Sonrasında Taqman microRNA Reverse Transcription Kit ile RNA'lardan cDNA (tamamlayıcı DNA) sentezlenmiştir. Referans gen olarak U6 gen bölgesi tercih edilmiş olup analizler RT-PCR ile yapılmıştır. İstatistiksel analizler SPSS programı ile T testi kullanılarak yapılmıştır. Karşılaştırmalar 2- delta delta Ct yöntemi ile hesaplanmıştır. Bu çalışma sonucunda, tükürük varlığını göstermek için miR-203A-3p belirtecinin uygun olmadığı düşünülmektedir. Karışımdaki kan örneklerinin varlığı tüm dilüsyonlarda gösterilmiş, en iyi seviye 1x1 oranında görülmüştür. Tüm gruplar incelendiğinde erkek donörlü karışımların diğer karışımlara oranla daha yüksek oranda eksprese edildiği görülmüştür.

Özet (Çeviri)

In criminal cases, biological samples collected from the scene of crime serve as evidence for clarification of the event. For this reason, they must be collected from the scene, stored under appropriate conditions, and analyzed and interpreted with the right methods. Although each crime scene is unique, the body fluids (sweat, urine, semen, saliva, blood, etc.) left behind by the perpetrator and/or victim are limited. Various genetic factors are used in studies to make reliable interpretations of these body fluids. In the last decade, different from other methods, microRNAs (miRNA) have been used for forensic purposes. Encapsulated, miRNA's which have resistant to environmental changes, miRNAs are unique to body fluids and show different biomarkers in monozygotic twins with the same DNA sequence, which makes them very important and worthy of study. Currently, its usability is being studied in determining body fluids, distinguishing monozygotic twins, separating peripheral blood from menstrual blood, identifying the perpetrator in impaired samples, and determining the postmortem interval. However, among these studies that allow justice to be provided and to illuminate forensic events, sexual abuse with multiple perpetrators, murder, etc., which we have faced frequently today. Examples of mixtures that cause problems in cases have not been studied yet. In this study, it was aimed to show the presence of body fluids in the mixture by using miRNA biomarkers in the mixture samples. Blood and saliva samples were collected from volunteers for this study. Collected samples were prepared in four different groups as mixtures with two donors. Samples with 1/1, 1/10, 1/20, 1/50, 1/100 dilutions were prepared for each group. A total of 36 mixture samples were created from the fluids collected from 4 female and 4 male individuals. The miR-451A biomarker was preferred to show the presence of blood in the mixture samples we prepared, and the miR-203A-3p biomarker to show the presence of saliva. The samples were first centrifuged and then RNA was isolated using the miRNeasy Mini Kit. The concentration and purity of the obtained RNAs were determined by spectrophotometer. Afterwards, cDNA (complementary DNA) was synthesized from RNAs with Taqman microRNA Reverse Transcription Kit. The U6 gene region was preferred as the reference gene and the analyzes were made by RT-PCR. Statistical analyzes were performed using SPSS program and T test. Comparisons were calculated using the 2-delta delta Ct method. As a result of this study, it is thought that the miR-203A-3p marker is not suitable for showing the presence of saliva. The presence of blood samples in the mixture was demonstrated at all dilutions, with the best level being 1x1. When all groups were examined, it was observed that mixtures with male donors were expressed at a higher rate than other mixtures.

Benzer Tezler

  1. Cinsel saldırı sonrası elde edilen karışık haldeki biyolojik örneklerin FTIR ile kimliklendirilmesi

    Identification of mixed biological samples obtained after sexual attack with FTIR

    İREM HERSEKLİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Adli TıpÜsküdar Üniversitesi

    Adli Bilimler Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ TUĞBA ÜNSAL SAPAN

  2. Postpartum dönemde süt sığırlarının rasyonlarına eklenen farklı bor kaynaklarının süt verimi ve kalitesine, bazı kan ve süt mineral seviyelerine etkilerinin karşılaştırılması

    Comparison the effects of different boron sources supplementation to the diets in dairy cattle on milk yield and quality, some blood and milk mineral levels in the postpartum period

    MİRZA YİĞİTHAN ÖĞÜT

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Veteriner HekimliğiOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Hayvan Besleme ve Beslenme Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NURCAN ÇETİNKAYA

  3. İnsersiyon/delesyon (InDel) lokuslarına ait kimliklendirme panelinin geliştirilmesi ve validasyonu

    Development and validation of the identification panel for insertion/deletion (InDel) locus

    ARZU DÜVENCİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Adli Tıpİstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa

    Fen Bilimleri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÖNÜL FİLOĞLU TÜFEK

  4. Diyabetli farelerde defne ekstraktının glukoz ve glutation düzeyleri üzerine

    Investigation of laurus nobilis L. extracts effect on glucose and glutathione levels in diabetic rats

    TEVFİK DOĞRUMAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1994

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYFER BAPÇUM