Gemsitabin dirençli ve dirençsiz küçük hücreli dışı akciğer kanseri kökenli kanser kök hücrelerinden türetilen eksozomlarda mirna 221/222 kümesi profilinin incelenmesi
Investigation of mirna 221/222 cluster profile in exosomes derived from gemcitabine-resistant and gemcitabine-sensitive non-small cell lung cancer stem cells
- Tez No: 822097
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ONUR UYSAL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 145
Özet
Amaç: Bu tez çalışmasının amacı, Gemsitabin dirençli kanser kök hücreleri (d-AKKH; CD326+ CD133+ CD44+) ve eksozomlarında (d-AKKH-Exo) miRNA 221/222, MDR1, ABCG2 ve Bcl-2 genlerinin ekspresyonunu araştırmak ve dirençsiz kanser kök hücreleri (AKKH; CD326+ CD133+ CD44+) ve eksozomları (AKKH-Exo) ile karşılaştırılarak miRNA 221/222'nin Gemsitabin direncinde etkisini belirlemektir. Yöntem: A549 hücrelerinde CFU yöntemi ile Gemsitabin direnci geliştirilerek (d-A549), CD326+ CD133+ CD44+ KKH izolasyonu yapıldı ve tümörsferoid tipte çoğaltıldı. Daha sonra flow sitometri, immunofloresan, qRT-PCR, büyüme eğrisi ve MTT yöntemleri ile karakterizasyon işlemleri tamamlanmış AKKH ve d-AKKH tümörsferoidlerinden eksozom izolasyonu ve karakterizasyonu yapıldı. Son aşamada AKKH, AKKH-Exo, d-AKKH ve d-AKKH-Exo'larında miRNA 221/222, MDR1, ABCG2 ve Bcl2 genlerinin ekspresyonu qRT-PCR yöntemi ile incelendi. Bulgular: d-A549 hücrelerinde CFU analizi ile belirgin ve canlılık oranı yüksek koloni oluşturma yetenekleri gösterildi. A549 ve d-A549 hücrelerinden izole edilen CD326+ CD133+ CD44+ KKH'lerinde yüksek saflık ve canlılık belirlenerek 3D kültür ortamında çoğaltıldı. Karakterizasyon analizlerinde AKKH hücrelerine göre d-AKKH'lerde daha yüksek MDR1 ve ABCG2 aktivasyonu, OCT4 gen ekspresyonu, daha yüksek proliferasyon ve IC50 değerleri belirlendi. Tüm deney gruplarında yapılan qRT-PCR analizinde d-AKKH-Exo'larında yüksek oranda MDR1 ve Bcl-2, miR-221-3p, miR-222-3p ve miR-222-5p ekspresyonu belirlendi. Sonuç: Bu tez çalışmasında miR-221/222 ekspresyon düzeyinin akciğer kanserinde Gemsitabin direnci ile yakından ilişkili olabileceği ve miR-222-5p'nin dirençli akciğer kanserinde erken biyobelirteç olabileceği sonucuna ulaşıldı.
Özet (Çeviri)
Objective: The aim of this thesis study was to investigate the expression of miRNA 221/222, MDR1, ABCG2, and Bcl-2 genes in Gemcitabine-resistant cancer stem cells (r-CSCs; CD326+ CD133+ CD44+) and their exosomes (r-CSC-Exo), and to determine the impact of miRNA 221/222 on Gemcitabine resistance by comparing them with Gemcitabine-sensitive cancer stem cells (CSCs; CD326+ CD133+ CD44+) and their exosomes (CSC-Exo). Methods: Gemcitabine resistance was developed in A549 cells using the CFU method (r-A549), followed by isolation of CD326+ CD133+ CD44+ CSCs and their propagation in tumor spheroid form. Subsequently, exosome isolation and characterization were performed from CSC and r-CSC tumor spheroids using flow cytometry, immunofluorescence, qRT-PCR, growth curve, and MTT methods. Finally, the expression of miRNA 221/222, MDR1, ABCG2, and Bcl-2 genes was examined in CSC, CSC-Exo, r-CSC, and r-CSC-Exo using qRT-PCR. Results: Significant and high colony-forming abilities were demonstrated in d-A549 cells through CFU analysis. CD326+ CD133+ CD44+ CSCs isolated from A549 and r-A549 cells exhibited high purity and viability and were expanded in a 3B culture environment. Characterization analysis revealed higher MDR1 and ABCG2 activation, OCT4 gene expression, increased proliferation, and higher IC50 values in d-CSCs compared to CSCs. qRT-PCR analysis of all experimental groups showed significantly higher expression of MDR1 and Bcl-2, as well as miR-221-3p, miR-222-3p, and miR-222-5p in r-CSC-Exo. Conclusion: This thesis study suggests that the expression level of miR-221/222 may be closely associated with Gemcitabine resistance in lung cancer, and miR-222-5p may serve as an early biomarker in Gemcitabine-resistant lung cancer.
Benzer Tezler
- İlaç dirençli prostat kanser hücrelerinde endoplazmik retikulum stres aracılı ilaç duyarlılığının artırılması
Chemotherapeutic sensitization by endoplasmic reticulum stress in drug-resistant prostate cancer cells
RIZA SERTTAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
GenetikTrakya ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SUAT ERDOGAN
- MRP1 (Multidrug Resistance-associated Protein 1) ile transfekte edilen 293 insan embriyonik böbrek hücre dizisinde MRP1 protein ekspresyonunun varlığının western blot ve flow sitometri ile gösterilmesi
Demonsration of MRP1 (Multidrug Resistance-associated Protein 1) protein expression by western blotting and flow cytometry in 293 human embryonic kidney cell line
İLHAN AKAN
- Identification of actionable drug targets in triple-negative breast cancer
Üçlü negatif meme kanserinde hedeflenebilir adayların belirlenmesi
ÜNAL METİN TOKAT
Doktora
İngilizce
2022
Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SERKAN İSMAİL GÖKTUNA
- Pankreas adenokarsinom hücre hattında etken flavonoid bileşenlerin kemopreventif ve gemsitabin'e karşı gelişen direnç üzerindeki etkilerinin araştırılması
Study on chemopreventive and on gemcitabine-based chemoresistance effects of flavonoid containing mixture in pancreatic adenocarcinoma cell lin
ÇAĞATAY AYDOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Moleküler Tıpİstanbul ÜniversitesiMoleküler Tıp Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜLYA YILMAZ AYDOĞAN
- Epitelyal over kanserli platin'e sensitif ve resistan hastalarda tekrarlayan kemoterapi rejimlerinin sağkalım süresine etkileri
The effect of recurrent chemotherapy regimens on platin sensitive and resistant patients in epithelial ovarian cancer to survival time
ALİ BERK ÖLKE
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2017
Kadın Hastalıkları ve DoğumÇukurova ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AHMET BARIŞ GÜZEL