Geri Dön

Development of experimental vaccine by producing rotavirus VP6 protein in prokaryotic system

Rotavirus VP6 proteininin prokaryotik sistemde üretilerek deneysel aşı geliştirilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 897321
  2. Yazar: BÜŞRA KAPLAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AYKUT ÖZDARENDELİ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Flagellin, Humoral ve Hücresel Bağışıklık Yanıtları, Rekombinant Aşı, Rotavirüs Genotipleri, Rotavirüs VP6 proteini, Rotavirüs, Gastroenterit, Flagellin, Gastroenteritis, Humoral and Cellular Immune Responses, Recombinant Vaccine, Rotavirus Genotypes, Rotavirus VP6 Protein, Rotavirus
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Erciyes Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 222

Özet

ROTAVİRUS VP6 PROTEİNİNİN PROKARYOTİK SİSTEMDE ÜRETİLEREK DENEYSEL AŞI GELİŞTİRİLMESİ Büşra KAPLAN Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü Tibbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Doktora Tezi, Eylül 2024 Danışman: Prof. Dr. Aykut ÖZDARENDELİ ÖZET Rotavirüs (RV), Reoviridae ailesinin iki alt ailesinden Sedoreovirinae alt ailesinde Rotavirüs cinsine ait olup fekal-oral yolla bulaşır. Rotavirüs bütün dünyada yeni doğan ve küçük çocuklarda şiddetli akut gastroenteritin en önemli nedenidir. Tek tedavi yöntemi oral rehidratasyon tedavisidir. Şu anda koruyucu amaçlı dünya çapında kullanımda olan iki canlı oral rotavirüs aşısı (Rotarix®, RotaTeq®) mevcuttur ve 100'den fazla ülkede rutin aşılama programında yer almaktadır. Ancak aşılar yüksek gelirli ülkelerde yüksek oranda etkinlik gösterirken düşük ve orta gelirli ülkelerde etkinlik oranı çok düşük düzeydedir. Ayrıca ülkemiz de dahil birçok ülkede henüz rutin aşılama programına dahil edilmemiştir. Dolayısıyla kullanımda olan aşılar çocuklardaki ölüm oranını önemli ölçüde azaltmış olmasına rağmen günümüzde hala rotavirüs kaynaklı çocuk ölümleri küresel olarak 200,000'den fazladır. Bu tezin amacı ilk aşamada Kayseri bölgesinde Erciyes Üniversitesi Hastanelerine akut gastroenterit şikayetiyle başvuran ve rotavirüs pozitif olduğu belirlenen 0-5 yaş arası çocuklarda rotavirüsün yaygın P ve G genotiplerinin belirlenmesi, baskın genotiplerin tespiti, bu genotiplerin yaş gruplarına, en sık görüldüğü aylara ve mevsimlere göre dağılımının belirlenmesine yönelik prevalans çalışmalarının yapılmasıdır. Çocuklarda görülen rotavirus infeksiyonlarının moleküler epidemiyolojisini araştırmak amacıyla 256 dışkı örneği toplandı. Dışkı örnekleri Grup A rotavirus antijen tespiti için immünokromatografik test yöntemiyle analiz edildi. Ardından daha duyarlı olan RT-PCR (Reverse-transcription-polymerase chain reaction) ile tüm dışkı örnekleri analiz edilerek rotavirüs RNA pozitif örnekler tespit edildi. RT-PCR ve semi-nested PCR testi ile rotavirüsün G ve P genotipleri belirlendi. Toplam 256 dışkı örneğinden 210'unda rotavirüs RNA pozitif olarak bulundu. Semi-nested PCR sonucunda örneklerin 210'u G genotipinde bulunurken 212 örneğin P genotipinde olduğu bulundu. Tespit edilen G-P genotip kombinasyonları arasında en baskın rotavirus genotipi G1P[8] (%51.4) olup ikinci en yaygın genotip kombinasyonu ise G9P[8] (%31.4) olarak belirlendi. Genotiplerin aylara ve mevsimlere göre dağılımına bakıldığında en yüksek rotavirüs pozitif vakalar kış ve ilkbahar mevsiminde Ocak, Şubat, Mart, Nisan aylarında tespit edildi. Rotavirüsün dolaşımda olan baskın genotiplerinin belirlenmesini içeren bu bulgular rotavirüse karşı aşı geliştirme stratejilerine katkı sağlayacaktır. Tez çalışmasının ikinci aşamasında amaçlanan rotavirüsün neden olduğu şiddetli akut gastroenterite karşı koruyucu amaçlı replike olmayan rekombinant aşı adayı geliştirmektir. Bu aşamada aşı adayı olarak rekombinant VP6 proteini üretildi. VP6 proteini rotavirüsün en korunmuş ve immünojenik proteini olması, tüm Grup A rotavirüslere karşı koruma sağlama yeteneği ve rotavirüs enfeksiyonundan korunmada temel olarak VP6'karşı oluşan antikorların etkili olması sebebiyle hedef gen bölgesi olarak seçilmiştir. Üretilen rekombinant VP6 proteini, humoral ve hücre aracılı immün yanıt uyarımını artıran flagellinle ve flagellinsiz olarak 6-8 haftalık dişi BALB/c fareleriyle oluşturulan aşı gruplarına intraperitoneal olarak üç doz halinde verilerek oluşan immün yanıt değerlendirildi. Aşılanan hayvanlar yüksek seviyelerde VP6'ya özgü antikor (IgG ve IgA) ve T hücre (IFN- ve IL-4) yanıtıyla karakterize güçlü bir bağışıklık yanıtı sergilemiştir. Bu bulgular en önemli çocukluk çağı ölüm nedenlerinden olan rotavirüs enfeksiyonuna karşı geliştirilecek replike olmayan aşı adaylarının geliştirilmesine katkı sağlayacak veriler sunmaktadır.

Özet (Çeviri)

DEVELOPMENT OF EXPERIMENTAL VACCINE BY PRODUCING ROTAVIRUS VP6 PROTEIN IN PROKARYOTIC SYSTEM Büşra KAPLAN Erciyes University, Institute of Health Sciences Department of Medical Microbiology Doctoral Thesis, September 2024 Supervisor: Prof. Dr. Aykut ÖZDARENDELİ ABSTARCT Rotavirus (RV), a member of the Rotavirus genus within the Sedoreovirinae subfamily of the Reoviridae family, is primarily transmitted through the fecal-oral route. It is the predominant cause of severe acute gastroenteritis in neonates and young children worldwide. The mainstay of treatment is oral rehydration therapy. Presently, two live oral rotavirus vaccines, Rotarix® and RotaTeq®, are widely used for prophylaxis and are included in the routine immunization schedules of over 100 countries. However, these vaccines demonstrate high efficacy in high-income countries but significantly lower efficacy in low- and middle-income countries. Additionally, many countries, including ours, have not yet incorporated these vaccines into their standard immunization programs. Although these vaccines have substantially reduced mortality rates in children, rotavirus still causes over 200,000 child deaths globally each year. The primary aim of this thesis is to conduct a detailed prevalence study in the Kayseri region, specifically targeting children aged 0-5 years presenting with acute gastroenteritis at Erciyes University Hospitals. The study focuses on identifying the prevalent P and G genotypes of rotavirus in these patients, determining the dominant genotypes, and analyzing their distribution by age group, month, and season. To achieve this, a total of 256 stool samples were collected from children diagnosed with rotavirus infection. The initial screening for Group A rotavirus antigens was conducted using immunochromatographic tests. Subsequently, all stool samples underwent analysis using the highly sensitive reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) method to detect rotavirus RNA-positive samples. The G and P genotypes of the rotavirus were then identified using RT-PCR and semi-nested PCR techniques. Results indicated that 210 out of the 256 stool samples tested positive for rotavirus RNA. Further semi-nested PCR analysis revealed that 210 samples contained the G genotype, while 212 samples contained the P genotype. Among the identified G-P genotype combinations, the most predominant was G1P[8], accounting for 51.4% of the cases, followed by G9P[8] at 31.4%. This detailed genotypic analysis provides valuable insights into the molecular epidemiology of rotavirus infections in the studied population. Analysis of the genotype distribution by season and month revealed that the highest incidence of rotavirus-positive cases occurred during the winter and spring months, specifically in January, February, March, and April. These findings are crucial for identifying the dominant circulating genotypes of rotavirus and will significantly contribute to the strategic development of rotavirus vaccines. The second phase of this thesis focuses on developing a non-replicating recombinant vaccine candidate aimed at protecting against severe acute gastroenteritis caused by rotavirus. In this phase, the recombinant VP6 protein was selected and produced as the vaccine candidate. The VP6 protein was chosen due to its status as the most conserved and immunogenic protein of rotavirus, its capability to provide protection against all Group A rotaviruses, and the effectiveness of antibodies against VP6 in preventing rotavirus infection. To evaluate the vaccine candidate, the recombinant VP6 protein was administered intraperitoneally in three doses to 6-8 week-old female BALB/c mice, both with and without flagellin, which is known to enhance humoral and cell-mediated immune responses. The immune response elicited by the vaccine was then assessed. The vaccinated mice exhibited a robust immune response characterized by elevated levels of VP6-specific antibodies (IgG and IgA) and T cell responses (IFN- and IL-4). These results provide critical data for the development of non-replicating vaccine candidates against rotavirus infection, which continues to be a major cause of childhood mortality worldwide.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    418387

    Leishmania tropica parazitlerinden elde edilen immünojen moleküllere karşı tanıda kullanılmak üzere hibridoma teknolojisine dayalı antikor üretilmesi

    Generation of hybridoma technology based antibodies against immunogen molecules isolated from leishmania tropica parasites in order to use in diagnosis

    ASLI PINAR ZORBA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyomühendislikYıldız Teknik Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ADİL ALLAHVERDİYEV

    DR. EMRAH ŞEFİK ABAMOR

  2. Tez No

    364244

    Alzheimer amiloid beta peptidine ait farklı amino asid dizilerinin polielektrolitler ile konjugasyon reaksiyonlarının incelenmesi

    Investigating conjugation reactions between different alzheimer's amyloid beta peptide sequences with polyelectrolytes

    BAŞAK İŞCANI EROĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyomühendislikYıldız Teknik Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ZEYNEP AKDESTE

  3. Tez No

    255558

    Studies on novel immunogenic proteins of Clostridium chauvoei

    Clostridium chauvoei'nin yeni immunojenic proteinleri üzerine çalışmalar

    DİDEM CORAL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2009

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

  4. Tez No

    584765

    Gökkuşağı alabalıkları (Oncorhynchus mykiss w,1792) için inaktif bakteriyel koruyucu aşıların geliştirilmesi ve geliştirilmiş aşıların etki sürelerinin belirlenmesi

    Development of preventive inactivated bacterial vaccines and to determine the effects time of developed vaccines for rainbow trout, (Oncorhynchus mykissw,1792)

    PINAR YILDIRIM

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Su ÜrünleriIsparta Uygulamalı Bilimler Üniversitesi

    Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞEGÜL KUBİLAY

  5. Tez No

    224492

    Probiyotik (saccharomyces boulardii) desteğinin deneysel IgA nefropatisi gelişimi üzerine etkisinin araştırılması

    Saccharomyces boulardii prevents oral polio virus vaccine induced IgA nephropathy in mice

    SEMA BERKTAŞ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıDokuz Eylül Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ALPER SOYLU

Geri Dön