Generation of nanobody based chimeric antigen receptor constructs against CD19 positive B cell lymphomas
CD19 pozitif B hücreli lenfomaya karşi nanokor temelli kimerik antijen reseptör modellerinin geliştirilmesi
- Tez No: 898758
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET SELİM ÇETİNER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Tıbbi Biyoloji, Biology, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Sabancı Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 194
Özet
CAR-T hücre terapisi, refrakter ve nükseden B hücreli malignitelerin tedavisinde kullanılmak üzere CD19'u hedefleyen dört farklı ürünün FDA tarafından onaylanmasıyla birlikte en umut verici immünoterapi tekniklerinden biri haline gelmiştir. Bu terapilerin tümünde ligand bağlanma bölgesi olarak scFv kullanılmıştır. Ancak scFv'li CAR yapısının büyük boyutu, yüksek düzeyde immünojenitesi, membran üzerinde çökelerek ligand bağımsız reseptör aktivasyonuna sebep olması dolayısıyla terapötik etkinliği azalttığı gösterilmiştir. Nanokorlar, benzer bağlanma potansiyelleri, daha yüksek stabilite ve solubilite sağlamaları ve daha az immunojenisiteye sebep olmaları sayesinde scFv'lere alternatiftir. Bu çalışmada, B hücreli malignitelerin tedavisinde kullanılmak üzere nanokor temelli CAR tasarımlarının geliştirilmesi hedeflenmiştir. İlk adımda hem sentetik maya ve hem de immün faj nanokor kütüphanesi kullanılarak CD19 hedefli nanokor seçimi yapılmıştır. İmmün faj kütüphanesiyle CD19'u hedefleyen 40'tan fazla farklı nanokor elde edilmiştir. İkinci adımda, ikinci nesil CAR tasarımları baz alınarak nanokor temelli yeni bir CAR yapısı tasarlanmıştır. Bu tasarım, scFv temelli tasarım ile benzer yüzey ifadesini veren versiyonun seçilmesi yoluyla elde edilmiştir. Üçüncü adımda, seçilen anti-CD19 nanokorları, yeni tasarlanan CAR yapısı içerisinde Jurkat-Raji ko-kültür deneyleri ile bağlanma ve aktivasyon potansiyelleri açısından değerlendirilmiştir. Tüm bu çalışmalar sonucunda, JurkatT hücresi yüzeyinde başarılı bir şekilde ifade edilen ve insan CD19 transmembran proteinine bağlandığında T hücrelerinin aktive olması sağlayan çok sayıda CD19 spesifik nanokor temelli CAR yapısı elde edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Thanks to its therapeutic potential, CAR-T cell therapy became one of the most promising immunotherapy techniques with the approval of four different CD19 targeting CAR-T cell products by the FDA for the treatment of refractory and relapsed B-cell malignancies. However, all these therapies were developed using scFv as a ligand binding domain, shown to decrease therapeutic efficacy due to its large size, high level of immunogenicity and propensity for self-aggregation on the membrane leading to ligand independent activation. Nanobodies are promising alternatives to scFv, based on their comparable binding potential, higher stability and solubility, and lower immunogenicity. In this study, we aimed to develop novel nanobody-based anti-CD19 CAR constructs to be used in the treatment of B-cell malignancies. In the first step, we performed nanobody selection using two different libraries: synthetic yeast display and immune phage display libraries, the latter yielded more than 40 different nanobodies targeting CD19. In the second step, we generated a nanobody-based CAR construct using the second-generation CAR design, achieving comparable surface expression to scFv-based CAR. In the third step, we evaluated the selected anti-CD19 nanobodies in terms of binding and activation potentials within the newly designed CAR construct in Jurkat-Raji co-culture experiments. In summary, we obtained numerous CD19 specific CAR constructs that were successfully expressed on the Jurkat T cell surface and resulted in activation upon specific CD19 binding.
Benzer Tezler
- Computational investigation of allostery in nanobody – antigen complexes
Nanokor – antijen komplekslerindeki alosterinin hesaplamalı incelenmesi
NURŞAH HALİSDEMİR
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ARZU UYAR
DR. ÖĞR. ÜYESİ HÜMEYRA TAŞKENT SEZGİN
- Güncel arazi örtüsü/kullanım haritalarının doğrudan ve dolaylı yaklaşımlar ile üretilmesi
Generation of current land cover/use maps using direct and indirect approaches
GÜLŞAH ALP
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
Astronomi ve Uzay Bilimleriİstanbul Teknik Üniversitesiİletişim Sistemleri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ELİF SERTEL
- Generation of an early warning system for landslide and slope instability by optical fiber technology
Heyelan ve şev duraysızlığı erken uyarı sisteminin oluşturulmasında fiber optik teknolojisinin kullanımı
ARZU ARSLAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
Bilim ve TeknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiJeoloji Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALUK AKGÜN
- Leishmania tropica parazitlerinden elde edilen immünojen moleküllere karşı tanıda kullanılmak üzere hibridoma teknolojisine dayalı antikor üretilmesi
Generation of hybridoma technology based antibodies against immunogen molecules isolated from leishmania tropica parasites in order to use in diagnosis
ASLI PINAR ZORBA
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ADİL ALLAHVERDİYEV
DR. EMRAH ŞEFİK ABAMOR
- Generation of a CRISPR/Cas based genome editing system for MEFV gene in familial mediterranean fever-specific induced pluripotent stem cells
Ailesel Akdeniz ateşine özgü uyarılmış pluripotent kök hücrelerdeki MEFV geni için CRISPR/Cas temelli genom yazılım sisteminin oluşturulması
GÜLNİHAL KAVAKLIOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
GenetikKoç ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. TEVFİK TAMER ÖNDER