BCR-ABL bağımsız ilaç-dirençli kronik miyeloid lösemi hücre hattında kanser-testis antijeni XAGE-1b ekspresyonu ve gen fonksiyonunun araştırılması
Investigation of cancer-testis antigen XAGE-1b expression and gene function in a BCR-ABL-independent drug-resistant chronic myeloid leukemia cell line
- Tez No: 970862
- Danışmanlar: PROF. DR. ZEYNEP YÜCE
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Hematoloji, Tıbbi Biyoloji, Biyoloji, Hematology, Medical Biology, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Kanser, kontrolsüz- anormal çoğalan, regülatör defektlerle yönlendirilen ve spesifik moleküler savaşçılar karşısında hızla evrimleşen kompleks bir hastalıktır. Yalnızca tümörlerin hedeflendiği tedavi baskısından kaçabilen bazı kanser hücreleri, geçirdikleri mikro moleküler değişimler ve diğer çeşitli etkenler sayesinde popülasyon içerisinde seçici avantajlar kazanır ve çok geçmeden tümöre özgü terapötikler etkisiz hale gelir. Bu nedenle, kansere bağlı yüksek ölüm oranları içerisinde tedavi direnci aşılması en büyük güçlüklerden biridir. Kronik Myeloid Lösemi' de, hedefe yönelik tedavi sonrası %30 hastada sekonder tedavi direnci görülebilmektedir. Önceki araştırmalarımızda, KML hücre hattı olan K562 atasal hücrelerinden köken alan ve BCR-ABL1 bağımsız imatinib dirençli K562-Ir hücre hattı geliştirilmiştir. Bu hücrelerde fenotipik değişiklikler saptanmış ve atasal hücrelere kıyasla in vitro gen ekspresyon farklılıkları analiz edilmiştir. Bu nedenle, çalışmamızın ilk basamağında, bu farklılıkların in vivo modeldeki yansımaları araştırılmıştır. İkinci basmakta ise, K652' ye oranla K562-Ir' de ifadesi dramatik düzeyde azalan XAGE-1b geni, imatinib direncindeki katkısının araştırılması amacıyla seçilmiştir. İlk olarak, atasal K562 ve dirençli K562-Ir hücreleri, subkutan yolla, BALB/c nu/nu farelere aşılanmış ve 6 hafta boyunca hayvanlardaki tümöral gelişim takip edilmiştir. Ardından, K562-Ir hücrelerinde, düşük seviyede olan XAGE-1b gen ifadesi, stabil lentiviral transduksiyonla indüklenerek in vitro modelleme çalışmalarıyla farklılıkları incelenmiştir. Hücre canlılığı analizleri spektrofotometrik (MTT) ve mikroskobik (Tripan Mavisi) teknikler, hücre ölüm süreçleri ise akım sitometrik ölçüm (Annexin V-7AAD) ile analiz edilmiştir. Hücrelerin solid tümör oluşturma yetenekleri semi- solid ortamda tümör sfeorid çalışması ile, invaziv- metastatik kapasiteleri ise transwell migrasyon yöntemiyle karşılaştırılmıştır. Son basamakta, akım sitometrik ölçümle hücrelerin yüzey belirteçleri açısından fenotiplendirmeleri yapılmıştır. Tümör ve diğer doku kesitlerinde yapılan immunohistokimyasal incelemeler, K562-Ir hücrelerinin, yüksek infiltrasyon ve metastaz yeteneği gösterdiklerini ve köken aldıkları atasal hücrelerden biyolojik olarak uzaklaştıklarını doğrulamıştır. In vitro XAGE-1b yüksek ifadesinin ise, imatinib direncinde tümöral canlılık biyolojisini doğrudan ve negatif yönde etkileyen düzenleyici bir rolü olduğunu düşündürmektedir. Buna ek olarak, dirençli hücrelerde artan XAGE-1b ekspresyonunun fenotipik plastisitesite açısından kısmen tümör progresyonuyla ilişkili hücresel davranışları- invazyon/tümör oluşturma kapasitesi gibi- düzenleyebildiğine işaret eder.
Özet (Çeviri)
Cancer is a complex disease characterized by uncontrolled and abnormal proliferation, driven by regulatory defects, and capable of rapid evolution in the face of specific molecular therapies. Among tumor cells, some acquire selective advantages within the population by escaping therapy-induced selective pressure— through micromolecular alterations and various other mechanisms—rendering tumor-specific therapeutics ineffective over time. Therefore, overcoming treatment resistance remains one of the greatest challenges contributing to high cancer-related mortality. In Chronic Myeloid Leukemia (CML), secondary resistance to targeted therapy can develop in approximately 30% of patients following initial treatment. In our previous studies, we developed an imatinib-resistant K562-Ir cell line from the parental K562 CML cell line, independent of BCR-ABL1 activity. These resistant cells exhibited phenotypic alterations, and gene expression differences were analyzed in vitro compared to their ancestral counterparts. Accordingly, in the first phase of our study, we investigated the in vivo implications of these differences. In the second phase, we focused on the XAGE-1b gene, which is dramatically downregulated in K562-Ir cells compared to K562 cells, to explore its potential role in imatinib resistance. Initially, parental K562 and resistant K562-Ir cells were subcutaneously injected into BALB/c nu/nu mice, and tumor development was monitored over a six week period. Subsequently, the low expression of XAGE-1b in K562-Ir cells was xii induced via stable lentiviral transduction to examine its impact through in vitro modeling. Cell viability was assessed using both spectrophotometric (MTT) and microscopic (Trypan Blue) methods, while cell death processes were analyzed by flow cytometry (Annexin V-7AAD). The ability of the cells to form solid tumors was evaluated through tumor spheroid assays in semi-solid media, and their invasive metastatic capacity was compared using the Transwell migration assay. Finally, flow cytometry was used to phenotype the cells based on surface marker expression. Immunohistochemical analyzes of tumor and other tissue sections confirmed that K562-Ir cells exhibited high infiltration and metastatic potential and had diverged biologically from their parental origin. Moreover, elevated in vitro expression of XAGE-1b appeared to play a regulatory role in negatively modulating tumor cell viability in the context of imatinib resistance. Additionally, the increased expression of XAGE-1b in resistant cells may influence tumor progression by partially modulating cellular behaviors associated with phenotypic plasticity, such as invasion and tumor-forming capacity.
Benzer Tezler
- Kronik myeloid lösemi hücre hattında tirozin kinaz inhibitörlerine karşı direnç mekanizmalarının araştırılması
Investigation of resistance mechanisms against tyrosine kinase inhibitors in chronic myeloid leukemia cell line
SEDA BAYKAL KÖSE
Doktora
Türkçe
2018
HematolojiDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ZEYNEP YÜCE
- K-562 hücre serilerinde imatinib'e karşı gelişen dirençte rol oynayan gen ifade değişimlerinin saptanması
Determining changes in the expression of genes playing role in imatinib resistance of K562 cell lines
YALDA HEKMATSHOAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
Tıbbi BiyolojiAnkara ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ASUMAN SUNGUROĞLU
- Asciminib (ABL001) ve tivantinib (ARQ197)'in lösemik ve hematopoetik kök hücreler üzerindeki terapötik etkisinin araştırılması
Investigation of therapeutic effect of asciminib (ABL001) and tivantinib (ARQ197) on leukemic and hematopoietic stem cells
İLKNUR KARATEKİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Tıbbi BiyolojiEge ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BURÇİN KAYMAZ
- BCR-ABL negatif klasik kronik myeloproliferatif neoplazilerden polisitemia vera ve esansiyel trombositemi ile karotis intima media kalınlığı arasındaki ilişki
Relationship between polycythemia vera and essential thrombocythemia and carotid intima media thickness from BCR-ABL negative classical chronic myeloproliferati̇ve neoplasms
MURAT BAYRAK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2017
HematolojiSağlık Bilimleri Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ELİF SUYANI
- Tirozin kinaz inhibitörü tedavisi alan kronik myeloid lösemi hastalarında tedavi etkinliğinin ve prognozun değerlendirilmesi
evaluation of efficacy and prognosis of tyrosine kinase inhibitor therapy in patients with chronic myeloid leukemia
ALİ VEYSEL KARA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
HematolojiHacettepe Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SALİH AKSU