Kordon kanı türevli NK hücrelerinin, CRISPR-Cas9 tekniğiyle CD-47 knock-out edilmiş küçük hücre dışı akciğer kanseri hücreleri üzerindeki immünoterapötik etkisinin araştırılması
Investigation of the immunotherapeutic effect of cord blood-derived NK cells on CD-47 knock-out non-small cell lung cancer cells by CRISPR-Cas9 technique
- Tez No: 979964
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SERDAR ÖZTUZCU, DOÇ. DR. ESRA BOZGEYİK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gaziantep Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
İmmün gözetim sisteminden kaçış yollarından bir tanesi NK (Doğal Öldürücü) hücre aktivasyonunun azaltılarak kanser hücrelerinin immün sistem tarafından tanınmasını engellemektir. Spesifik olarak bu kaçışta önemli olan sinyallerden bir tanesi SIRP-α (Sinyal Regülatör protein-α/) /CD47 (Cluster of Differentiation-47) etkileşimidir. Kanser hücreleri CD47 ifadesini arttırarak immün sistem hücrelerindeki SIRPα ile sinaptik bir etkileşim gösterip bağışıklık taramasından kaçmaktadır. Buradan yola çıkarak bu çalışmada, küçük hücre dışı akciğer kanseri hücrelerindeki (A549) CD47'nin CRISPR/Cas9 tekniğiyle susturularak SIRPα/CD47 eksenine blokaj uygulanıp kanser hücrelerinin açık hedef haline getirilerek, NK hücreleri tarafından tanınırlığının arttırılması hedeflenmiştir. Bu hedefe ulaşma için bu tez çalışmasında ilk olarak kordon kanından NK hücre izolasyonu ve kültürü yapılmıştır. Sonrasında ise tümör hücreleri üzerindeki immün kaçış ligandı olan ve küçük hücre dışı akciğer kanseri hücreleri (A549) üzerinde ifade edilen CD47'nin CRISPR/Cas9 tekniği ile susturulmuştur. CD47 geni susturulan küçük hücre dışı akciğer kanseri hücrelerinin (A549) SIRPα ile etkileşiminin engellenmesi ve“beni yeme”sinyalizasyonuna blokaj uygulanması hedeflenmiştir. Elde edilen bulgulardan hareketle; artan efektör NK hücre oranların, hedef A549 hücreleri ile 24 ve 48 saat ko-kültüre edilmesi neticesinde gruplar arasında hücre canlılığı açısından anlamlı bir fark (p<0.0001) gözlenmiştir. Ayrıca CD47'in susturulmasının sonucu olarak NK hücrelerinin, küçük hücre dışı akciğer kanseri hücrelerine (A549) karşı doz-bağımlı bir etki göstererek belirgin sitotoksik etki ortaya koymuştur. Çalışma sonucunda, SIRPα/CD47 ekseninin blokajı yolu ile kordon kanı kaynaklı NK hücrelerinin, genetik olarak modifiye edilmiş (CD47-/-) küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücreleri üzerindeki sitotoksik etkisinin yüksek olduğu gözlemlenmiş ve kordon kaynaklı NK hücre hücrelerinin immünoterapötik bir araç olabileceği öngörüsü ortaya çıkmıştır.
Özet (Çeviri)
One of the escape routes from the immune surveillance system is to prevent the recognition of cancer cells by the immune system by reducing NK (Natural Killer) cell activation. Specifically, one of the signals that is important in this escape is the SIRP-α (Signal Regulator protein-α/) /CD47 (Cluster of Differentiation-47) interaction. By increasing CD47 expression, cancer cells show a synaptic interaction with SIRPα in immune system cells and evade immune surveillance. Based on this, in this study, the aim was to increase the recognition of cancer cells by NK cells by knocking out CD47 on non-small cell lung cancer cells (A549) using the CRISPR/Cas9 technique, thereby blocking the SIRPα/CD47 axis and making the cancer cells an open target. To achieve this goal, in this thesis, NK cells were first isolated and cultured from cord blood. Subsequently, CD47, which is an immune escape ligand on tumor cells and expressed on non-small cell lung cancer cells (A549), was knocked out using the CRISPR/Cas9 technique. The aim is to block the interaction of CD47 gene knock-out non-small cell lung cancer cells (A549) with SIRPα and to block the“don't eat me”signaling. Based on the findings obtained, a significant difference (p<0.0001) was observed in terms of cell viability between the groups as a result of co-culture of increased effector NK cell ratios with target A549 cells for 24 and 48 hours. In addition, as a result of CD47 silencing, NK cells exhibited a significant cytotoxic effect against non-small cell lung cancer cells (A549) in a dose-dependent manner. The study found that blocking the SIRPα/CD47 axis enhances the cytotoxic effect of cord blood-derived NK cells on genetically modified (CD47-/-) non-small cell lung cancer cells, suggesting that cord blood-derived NK cells could serve as an immunotherapeutic tool.
Benzer Tezler
- Kordon kanı immunglobulin E değerleri
Başlık çevirisi yok
HALUK ÇOKUĞRAŞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1987
Allerji ve İmmünolojiİstanbul ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NECLA AKÇAKAYA
- Kordon kanı eritrosit membran lipid değerleri
Başlık çevirisi yok
HASAN ÖZKAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1988
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıDokuz Eylül ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Y.DOÇ.DR. NUR OLGUN
- Kordon kanı seruloplazmin değerinin neonatal hiperbilirubinemi olgularının değerlendirilmesinde prediktif değeri
The predictive value of cord blood ceruloplasmin level in neonatal hyperbilirubinemia
EROL KISMET
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1996
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıGataÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF.DR. ERDAL GÖKÇAY
- Kordon kanı TSH ölçümü ile iyot nutrisyonu değerlendirmesi
Başlık çevirisi yok
SELEN GÖKTAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1998
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıSağlık BakanlığıÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Kordon kanı mononükleer hücrelerinin immünfenotipik karakterizasyonu ve NK aktivitesi
Characterization of mononuclear cells of cord blood and NK activity
NİLGÜN OKUMUŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Üniversitesiİmmünoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜNNUR DENİZ