SARS-COV-2'ye karşı Lactiplantibacillus plantarum TLB 521 temelli mukozal aşı potansiyelinin araştırılması
Investigation of the potential of a lactiplantibacillus plantarum TLB 521 based mucosal vaccine against SARS-COV-2
- Tez No: 1020440
- Danışmanlar: PROF. DR. ZİHNİ DEMİRBAĞ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Lactobacillus türleri, sahip oldukları immünolojik özellikler nedeniyle yeni nesil canlı aşı taşıyıcıları, doğal adjuvanlar ve heterolog gen ifade vektörleri olarak genetik mühendisliği çalışmalarında önemli bir araştırma alanını oluşturmaktadır. Bu tez çalışmasında, lokal fermente ürünlerden izole edilmiş ve probiyotik özellik gösterdiği belirlenmiş 14 farklı Lactiplantibacillus plantarum suşu kullanılarak mukozal aşı platformu geliştirilmesi amaçlanmıştır. Geliştirilen sistem ile SARS-CoV-2'ye ait RBD antijenine karşı mukozal yüzeylerde salgısal IgA immün yanıtının indüklenmesi amaçlanmıştır. Bu kapsamda, antijeni kodlayan gen ile birlikte, antijenin bakteri yüzeyinde sunumunu ve immün yanıtın uyarılmasını sağlayan nükleotit dizilerin olduğu 1967 nükleotitlik bir aşı kaseti tasarlanmıştır. Tasarlanan aşı kaseti ve kontrol amacıyla kullanılan yeşil floresan protein (GFP) gen dizileri, Lactobacillus ifade vektörlerine klonlanmış ve seçilen suşlara elektroporasyon yöntemi ile aktarılmıştır. Transformasyon verimliliği ve gen ifade kapasitesine bağlı olarak L. plantarum TLB 521 suşu, canlı aşı taşıyıcı adayı olarak belirlenmiştir. Bu suşta GFP geninin, başarılı şekilde gösterilirken, aşı kaseti ifadesine ilişkin protein düzeyinde bir sinyal elde edilememiştir. Ayrıca, L. plantarum TLB 521 suşunun adjuvan potansiyelini değerlendirmek amacıyla, bakteri ısı ile inaktive edilmiş ve bakülovirüs ekspresyon sistemi ile üretilen RBD proteini formüle edilerek BALB/c farelerine deri altı yolla uygulanmıştır. Elde edilen sonuçlar, inaktive L. plantarum'un RBD antijenine karşı immünojenisite üzerinde belirgin bir artırıcı etki göstermediğini ortaya koymuştur. Bu sonuçlar, TLB 521 suşunun yüksek transformasyon verimliliği ve başarılı GFP ekspresyonu ile rekombinant protein üretimi açısından genetik olarak erişilebilir ve uygun bir L. plantarum platformu olduğunu göstermiştir. Bununla birlikte, aşı kaseti ekspresyonunun ve adjuvan etkisinin sınırlı kalması, sistemin daha ileri düzey optimizasyon gerektirdiğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Lactobacillus species constitute an important research area in genetic engineering studies due to their immunological properties, which make them promising candidates as next-generation live vaccine delivery vehicles, natural adjuvants, and heterologous gene expression vectors. In this thesis, the development of a mucosal vaccine platform was aimed using 14 different Lactiplantibacillus plantarum strains isolated from locally fermented products and characterized by probiotic properties. The developed system was designed to induce a secretory IgA immune response at mucosal surfaces against the RBD antigen of SARS-CoV-2. Within this scope, a 1967-nucleotide vaccine cassette was designed, containing the gene encoding the antigen together with nucleotide sequences enabling surface display of the antigen in bacteria and stimulation of the immune response. The designed vaccine cassette and GFP gene were cloned into Lactobacillus-compatible expression vectors and transferred into selected strains. Based on transformation efficiency and gene expression capacity, the L. plantarum TLB 521 strain was selected as a live vaccine delivery candidate. In this strain, successful expression of the GFP gene was demonstrated; however, no detectable protein-level expression signal was obtained for the vaccine cassette. In addition, to evaluate the adjuvant potential of TLB 521, the bacteria were heat-inactivated and formulated with the RBD protein produced using the baculovirus expression system, followed by subcutaneous administration to BALB/c mice. The results indicated that inactivated L. plantarum didn't exhibit a significant enhancing effect on immunogenicity against the RBD antigen. These findings demonstrated that the TLB 521 strain represents a genetically accessible and suitable L. plantarum platform for recombinant protein production, supported by successful GFP expression. However, the limited expression of the vaccine cassette and the lack of adjuvant effect indicate that further optimization of the system is required.
Benzer Tezler
- SARS-CoV-2 proteaza ve H-ACE2'ye karşı yeni aday moleküllerin kenetlenme çalışmaları yoluyla belirlenmesi
Determination of new candidate molecules against SARS-CoV-2 proteaza and H-ACE2 through connection studies
PUNAR ALİYEVA
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyolojiÜsküdar ÜniversitesiMoleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. VİLDAN ENİSOĞLU ATALAY
- Chlorella variabilis YTU.ANTARCTIC.001 mikroalginin SARS-CoV-2'ye karşı antiviral etkinliğinin araştırılması
Investigation of antiviral effects of Chlorella variabilis YTU.ANTARCTIC.001 against SARS-COV-2
İLAYDA DİLARA ÜNLÜ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DİDEM ÖZÇİMEN
- Silybum marianum bitki ekstraktının antioksidan ve SARS-CoV-2'ye karşı antiviral aktivitelerinin in vitro modeller ile belirlenmesi
Determination of antioxidant and antiviral activities of Silybum marianum plant extract against SARS-CoV-2 using in vitro models
JENYA DURSUN
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyolojiMarmara ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NÜZHET CENK SESAL
DR. YÜKSEL ÇETİN
- Antarktika'dan izole edilen Auxenochlorella pyrenoidosa Ozcimen.001 mikroalginin SARS-CoV-2-2'ye karşı antiviral etkinliği
Antiviral efficacy of Auxenochlorella pyrenoidosa Ozcimen.001 microalgae isolated from antarctica against SARS-CoV-2
SENA GÜLSOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DİDEM ÖZÇİMEN
- Aquilaria agallocha, Glycyrrhiza glabra L., Isatis tinctoria L. bitki ekstraktlarının SARS-CoV-2'ye karşı antiviral aktivitelerinin araştırılması
Investigation on antiviral activities of herbal extracts of aquilaria agallocha, glycyrrhiza glabra L., isatis tinctoria L. against SARS-CoV-2
MELTEM KOCAMANOĞLU