Domateste külleme hastalık etmeni Leveillula taurica'ya karşı crispr-cas9 tabanlı gen düzenleme protokolünün geliştirilmesi
Development of a crispr-cas9-based gene editing protocol agai̇nst powdery mildew di̇sease agent Leveillula taurica in tomato
- Tez No: 1022010
- Danışmanlar: PROF. DR. ÖZER ÇALIŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Ziraat, Agriculture
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Bitki Koruma Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Dünyada en yaygın yetiştiriciliği yapılan sebzelerden birisi domates (Solanum lycopersicum) olup Solanaceae familyasında yer almaktadır. Sevilerek tüketilen domatesin ekim alanları her yıl genişlemeye devam etmektedir. Ancak ekonomik olarak önemli bu sebzenin üretimini kısıtlayan fungal hastalıklar bulunmakta olup bu fungal hastalıkların en başında külleme hastalığına sebep olan Leveillula taurica gelmektedir. Obligat patojen fungusun kontrolü için en iyi yöntem dayanıklı domates çeşitlerini geliştirmektir. Bu çalışmanın amacı külleme hastalık etmeni L. taurica ya genetik olarak dayanıklı salkım domates geliştirmek için biyoteknolojik yöntemlerden CRISPR-CAS9 tabanlı gen düzenleme yöntemini kullanarak domateste hassaslıktan sorumlu SlMLO1 geni üzerinde mutasyon meydana getirerek transgenik olmayan dayanıklı domates çeşidi geliştirilmesini sağlamaktadır. Bunun için önce MLO1 geni ticari salkım domates içerisinde spesifik primerlerle PCR da çoğaltılmış, elde edilen 1262 bp büyüklüğündeki MLO1 geni incelenerek bu genin birinci ekzon bölgesine yönelik bir rehber RNA, hedef RNA ve palindromik sekansları içeren CRISPR-CAS9 sisteminin ögeleri oluşturulmuştur. Tasarlanan mutasyon için önce gRNA, tRNAve palindromik sekanslar klonlanarak önce Escherichia coli DH5α plazmidine aktarıldı. Sonra CRISPR-CAS9 gene düzenlemesi pHEE401E ticari binari vektörü E. coli DH5α çoğaltılarak klonlandı. Klonlanan binari vektördeki nükleik asit dizilimleri sanger sekanlama yapılarak doğrulanmıştır. pHEE401E plazmidi uygun restriksiyon enzimleri ile kesildikten sonra Agrobacterium tumefaciens EHA105 bakteri içerisine elektroporasyon ile yerleştirilerek istediğimiz SlMLO1 geni üzerinde Slmlo1 gen mutasyonuna sebep olan CRISPR-CAS9 gen düzenleme sistemi oluşturulmuştur. Gelecekte oluşturulan bu CISPR-CAS9 gen düzenleme sistemiyle ticari salkım domates çeşitlerinde küllemeye dayanıklı çeşitlerin geliştirilmesi mümkün olacaktır.
Özet (Çeviri)
One of the most widely cultivated vegetables in the world is the tomato (Solanum lycopersicum) which belongs to the Solanaceae family. The cultivation area of this widely consumed vegetable continues to expand every year. However, there are fungal diseases that limit the production of this economically important crop where one of the most significant powdery mildew diseases caused by Leveillula taurica. The best method for controlling this obligate pathogenic fungus is to develop resistant tomato varieties. The aim of this study is to develop a non-transgenic powdery mildew-resistant cluster tomato variety by using the CRISPR-CAS9-based gene editing technique, one of the biotechnological methods, to induce mutations in the SlMLO1 gene, which is responsible for susceptibility to L. taurica. For achieving this, the MLO1 gene was first amplified from a commercial cluster tomato using specific primers by PCR. After analyzing, PCR is resulting 1262 bp MLO1 gene which was the components of the CRISPR-CAS9 system, including a guide RNA, target RNA, and palindromic sequences targeting the first exon region of this gene, were designed. For the specific mutation with CRISPRCAS9 gene editing, the gRNA, tRNA, and palindromic sequences were first cloned and then transferred into the Escherichia coli DH5α plasmid. Subsequently, the CRISPRCAS9 gene editing construct was cloned into the commercial binary vector pHEE401E after amplification in E. coli DH5α. The nucleic acid sequences in the cloned binary vector were verified by Sanger sequencing. After the pHEE401E plasmid was digested with appropriate restriction enzymes, it was introduced into Agrobacterium tumefaciens EHA105 by electroporation, thereby constructing a CRISPR-CAS9 gene editing system capable of inducing the Slmlo1 mutation in the target SlMLO1 gene. In the future, this CRISPR-CAS9 gene editing system will make it possible to develop powdery mildewresistant commercial cluster tomato varieties.
Benzer Tezler
- Domateste külleme hastalık etmeni Oidium lycopersici'ye karşı crispr-cas9 tabanlı gen düzenleme protokolünün geliştirilmesi
Development of a crispr-cas9 based gene editing protocol against the powdery mildew disease agent Oidium lycopersici in tomato
EMİNE KOCAKAYA
- Domates küllemesi etmeni Oidium neolycopersici'ye karşı çeşit reaksiyonları ve kimyasal savaşım üzerinde araştırmalar
Research on cultivar reactions to- and chemical applications against powdery mildew caused by Oidium neolycopersici
GÜLCAN YIKILMAZSOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
ZiraatEge ÜniversitesiBitki Koruma Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NEDİM ÇETİNKAYA
- Antalya ilinin bazı ilçelerindeki sebze alanlarında bulunan külleme türlerinin belirlenmesi
The determination of powdery mildew species in vegetable areas in some districs of Antalya province
AYŞE TÜMAY
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
ZiraatIsparta Uygulamalı Bilimler ÜniversitesiBitki Koruma Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HÜLYA ÖZGÖNEN ÖZKAYA
- Silifke yayla köylerinde domates üretiminde hastalık yönetimi
Disease management in tomato production of Silifke?s plateau villages
NAZLI GAZOZCUZADE
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
ZiraatÇukurova ÜniversitesiBitki Koruma Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET BİÇİCİ
- Domates (Solanum lycopersicum) üretimindeki külleme hastalık etmenine (Leveillula taurica) karşı kimyasal ve biyolojik ürünlerin etkinliğinin araştırılması
Investigation to effects of biological and chemical preparats against powdery mildew pathogen (Leveillula taurica) on tomato (Solanum lycopersicum)
MUHAMMET ALİ ÇİFTCİOĞLU