HepAD38 hücre dizisinde anti-HBV etkinliğinin değerlendirilmesi
Detection of anti-HBV activity in HepAD38 cell line
- Tez No: 142514
- Danışmanlar: PROF. DR. MİTHAT BOZDAYI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Gastroenteroloji, Gastroenterology
- Anahtar Kelimeler: HBV, HepAD38, HepG2, anti-viral aktivite, nükleozit analoğu, HBV, HepG2, anti- viral activity, nucleoside analogs
- Yıl: 2004
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Temel Hepatoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 70
Özet
50 ÖZET HepAD38 hücre dizisinde anti-HBV etkinliğinin değerlendirilmesi Yaklaşık 20 yıldır Hepatit B Virüsü (HBV)'ne karşı etkin aşi bulunmasına rağmen, dünyada 400 milyona yakın kişi HBV ile infektedir. HBV infeksiyonu akut/kronik hepatit, karaciğer sirozu ve hepatoselüler karsinoma (HCC) gibi karaciğer hastalıklarının en başta gelen nedenidir. HBV, karaciğer yönelimli bir virüstür. Karaciğer pek çok farklı tipte hücreden oluşmakla birlikte karaciğerle ilgili aktiviteler çoğunlukla hepatositler, safra epiteli ve kupfer hücrelerinde gerçekleşir. Bunlar arasından hepatositler hepadnavirüsler için virüs replikasyonunun gerçekleştirildiğinin doğrulanabildiği tek hücre grubu olma ozelleğini taşımaktadır. HBV infeksiy onuna karşı etkili ajanların keşfinde en önemli sorun kullanışlı in- vitro sistemlerin bulunmayışıdır. Bu nedenle in-vitro sistemlerin geliştirilmesi için yapılan çalışmalarda insan hepatoblastoma hücre dizileri (HepG2) HBV infeksiyonunda birincil hedef olmalarından dolayı öncelikli kullanılmaktadır. Bu hücre sistemleri HBV infeksiyonuna karşı üretilen çok sayıda kimyasal bileşiğin inhibitor etkilerinin HBV replikasyon döngüsünün hangi aşamasında gerçekleştiğinin araştırılmasına olanak sağlamaktadır. HepAD38 hücre sisteminde HBV DNA' sının üretimi tetrasiklin promotorunun kontrolü altındadır. Bu kontrol sistemi sayesinde çok sayıda bileşik çok daha kısa zamanda test edilebilmektedir. Günümüzde en etkili antiviral ajanlar olma niteliklerini koruyan nükleozit/nükleotid analogları konak hücre RNA polimerazı tarafından pregenomik RNA'nın kalıp olarak51 kullanılıp viral DNA'nın üretilmesi aşamasında doğal nükleozitler ile yarişarak zincirin erken sonlandırılması prensibi ile çalışmaktadır. Bu çalışmanın amacı HBV'ne karşı etkili olabileceği düşüncesi ile sentezlenmiş nükleozit analoglarının tet cevaplı HepAD38 hücre dizileri üzerimdeki anti-viral etkinliklerinin saptanmasıdır. Çalışmamızda 30 adet 2'-deoksi üridin nükleozit, 3 adet 2'-deoksiarabino, 6 adet 3'- Deoksi-ribo, 6 adet ribo, 14 adet D4, 5 adet 2'-deoksi-4' tia, 4 adet dioksolan, 1 adet siklobütan sitidin, 6 adet 2',3'-siklobütil nükleozit analoğunun anti-viral etkinlikleri tetrasiklin cevaplı HepAD38 hücre dizileri kullanılarak test edilmiştir. Sonuçların değerlendirilebilmesi için EC90 değerleri hesaplanmıştır. Yukarıdaki 75 bileşikten sitidin analoğu 46, 48, 49, 58 numaralı D4Nükleozit analoglarının 0,12 uM, 0,21 uM, 0,34 uM, 4,45 uM EC90 değerleri ile bu sistemdeki EC90 değeri 0,56 uM, olarak hesaplanan sürekli kontrolümüz 3TC ile karşılaştırılmaları sonucu HBV üzerinde anti-viral etkiye sahip oldukları saptanmıştır.
Özet (Çeviri)
52 SUMMARY Detection of anti-HBV activity in HepAD38 cell line Although there has been an effective vaccine against HBV for almost 20 years, around 400 million people throughout the world are infected with HBV. HBV is the major cause of the liver diseases such as acute/chronic hepatitis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC). HBV has an increased liver tropism. In spite of being composed of various different types of cells, the main metabolic activities of the liver take place in hepatocytes, bile ducts and kuppfer cells. Mostly the hepatocytes among these are the only confirmed centers where viral replication occurs. The most important problem in discovering effective agents against HBV is lacking of useful in-vitro experimental systems. Because of this, in the studies to develop in-vitro systems, HepG2 cell lines (human hepatoblastoma cells) have gained a priority since hepatocytes are the primary targets for HBV infection. These cell lines allow to research of inhibitory effects of many compounds produced against HBV on replication cycle. In the case of HepAD38 which is a derivative of HepG2 cells, the production of HBV-related RNAs are under the control of a tetracycline promoter. This experimental study allow to study many compounds53 in a relatively shorter time than the other traditional drug-screening tests. The nucleoside analogs being one of the most effective metabolites against viral infections show their effects on the inhibition of reverse-transcribing reaction by competing with natural nucleosides to join to the newly synthesized chain. The aim of this study is to detect the anti-viral interactions of the compounds which are considered as effective against HBV on tet- inducible cell lines. In this study we tested anti-viral effects of thirty 2'-deoksiuridin nucleoside, three 2'-deoksiarabino, six 3'-deoksiribo, six ribo, fourteen D4, six 2',3'-siklobutilnucleoside analogs using tet- inducibleHepAD38 cell lines. In order to evaluate the results, EC90 values were calculated. Among these seventy five nucleoside and nucleotide analogs, the EC90 values of the D4 nucleoside analogs which were indicated as number 46,48,49,58 were found as 0.12uM, 0.21 uM, 0.34 uM, 4.45 uM respectively. It is concluded from the comparison of control EC90 value of the 3TC compound with the experimental results that these four D4 analogs can be take into account as potential anti-virals against HBV.