Bacillus subtilis ve Bacillus cereus bakterilerinden proteaz enziminin kısmi saflaştırılması ve özelliklerinin incelenmesi
Partial purification and characterization of protease from Bacillus subtilis and Bacillus cereus bacteria
- Tez No: 143026
- Danışmanlar: DOÇ. DR. YÜKSEL AVCIBAŞI GÜVENİLİR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 110
Özet
BACILLUS SUBTILIS VE BACILLUS CEREUS BAKTERİLERİNDEN PROTEAZ ENZİMİNİN KISMİ SAFLAŞTIRILMASI VE ÖZELLİKLERİNİN İNCELENMESİ ÖZET Enzimler organizmada meydana gelen kimyasal reaksiyonların hızlarım arttıran biyolojik katalizörlerdir. Enzimler molekül ağırlıkları onbin ile bir milyon arasında değişen protein yapılı bileşiklerdir. Yüksek aktivite için kıyasladığımızda enzimler, kimyasal katalizörlere göre daha avantajlıdırlar. Ayrıca enzim prosesleri için uygun olan 25-30°C'lik sıcaklık bir çok klasik kimyasal prosesler için gerekli olan yüksek veya düşük sıcaklıkdan daha ekonomiktir. Enzimlerin gerçek özellikleri yakın zamanda bilinmesine rağmen, enzimler uzun yıllardan beri kullanılmaktadırlar ve bilimsel araştırmada, klinik tamda ve endüstride büyük önemleri vardır. Proteaz enzimi, canlılardaki hidroliz reaksiyonlarını katalizleyen en önemli proteinlerden biridir. Proteazlar polipeptid ve protein zincirlerim hidrolizleyen enzimlerdir. Proteazlar proteini polipeptid zincirlerindeki amid bağlarını hidrolizleyerek parçalarlar. Proteazlar hayvan organları, bakteri, maya, ve bitkiler gibi geniş bir canlı yelpazesinde üretilirler. Proteaz enzimi, endüstride geniş şekilde (deterjan, deri, bira sanayi, fırıncılık v.b.) kullanılmaktadır. Endüstride kullanılan proteaz erızimlerinin büyük bir kısmı bakteri kaynaklıdır. Özellikle Bacillus türlerinden üretilen proteaz enzimleri deterjan endüstrisinde yaygm olarak kuUamlmaktadır. Bu çalışmanın amacı Bacillus subtilis ve Bacillus cereus bakteri türlerinden proteaz enziminin izolasyonu, saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi olarak belirlenmiştir. Proteaz enzimi, Bacillus türü bakterilerin uygun besi yerlerinde üretilmesi, sporlandınlması daha sonra santrifüjlenerek bakterilerin uzaklaştırılması ile elde edilmiştir. Daha sonra elde edilen süpernatanta, sırasıyla amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz, DEAE-Selüloz iyon değiştirme kromatografisi işlemleri uygulanarak saflaştırma yapılmıştır. Çalışmada aynı zamanda elde edilen enzimin, optimum pH, optimum sıcaklık, pH kararlılığı, sıcaklık kararlılığı, enzim aktivitesi üzerine substrat konsantrasyonu, reaksiyon süresi, inhibitor ve aktivatör etkisi incelenmiştir. Ayrıca elde edilen enzimin molekül ağırlığı SDS-PAGE işlemi yapılarak tayin edilmiştir. Bacillus subtilis türü ile yapılan çalışmada süpernatantın spesifik aktivitesi 1 1 U/mg, doyurma sonrası çökeltinin spesifik aktivitesi 6 U/mg, diyaliz sonrası 10 U/mg ve DEAE-Selüloz iyon değiştirme kolon kromatografisi sonrası spesifik aktivitesi 84 U/mg'dır. Kolon sonrası 8 kat saflaşma sağlanmıştır. Bacillus subtilis türünden eldeedilmiş proteazın spesifik aktivitesi 84 U/mg olarak ölçülmüştür. Yapılan çalışmada saf proteazın spesifik aktivitesi ile elde edilen proteazın spesifik aktivitesi aynı bulunmuştur. Yapılan S DS-P AGE sonucunda elde edilen enzimin molekül ağırlığı yaklaşık 45 kDa olarak bulunmuştur. Bacillus cereus bakteri türü ile yapılan çalışmada süpernatantın spesifik aktivitesi 12 U/mg, doyurma sonrası çökeltinin spesifik aktivitesi 14 U/mg'dır. Doyurma sonrası 1.2 kat saflaşma sağlanmıştır. Yapılan SDS-PAGE sonucunda e İde edilen enzimin molekül ağırlığı yaklaşık 37 kDa olarak bulunmuştur. xı
Özet (Çeviri)
PARTIAL PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF PROTEASE FROM BACILLUS SUBTILIS AND BACILLUS CEREUS BACTERIA SUMMARY Enzymes are biological catalysts that increase the speed of chemical reactions taking place in the organism. Enzymes are the compounds with protein structure of which molecular weights vary between ten thousand and a million. When we compare for the high activity, enzymes are more advantageous than the chemical catalysts. Besides, 25-30°C temperature which is suitable for enzyme processes is more economic than high or low temperatures that are necessary for many chemical processes. Despite the fact the real properties of the enzymes have been known only recently, Enzymes have been used for long years and they have considerable importance in scientific research, clinic diagnosis and industry. Protease enzyme is one of the most important proteins catalysing the hydrolysis reactions in living beings. Enzymes are the things that hydrolyse the chains of Proteases polypeptide and protein. Proteases pull the protein into the parts by hydrolysing the amide bonds that are in the polypeptide chains. Proteases are produced in a very wide living beings scale such as animals, bacteria, yeast, and plants. Protease enzyme is widely used in industry (detergent, leather, beer industry, bakery etc.). A considerable part of protease enzymes used in the industry is originated from bacteria. Especially protease enzymes that are produced from Bacillus species are widely used detergent industry. The purpose of this study was determined as isolation, purification and investigation of some properties of protease enzyme from Bacillus subtilis and Bacillus cereus bacteria species. Protease enzyme is obtained by producing spore genesis of bacteria, which is from Bacillus species in suitable food places, and removing the bacteria afterwards being centrifuged. The purification was realized by applying respectively ammonium sulphate precipitation, dialyse, DEAE-Cellulose ion exchange chromatography to the supernatant that was produced later. In t he s rudy a 1 1 he s ame t ime, t he a ffect o f s ubstrate c oncentration, r eaction t ime, inhibitor and activator on the optimum pH, optimum temperature, pH stability, temperature stability, enzyme activity of the obtained enzyme. Besides, molecular weight of the obtained enzyme was determined by realization of transaction of SDS-PAGE. In the study carried out with Bacillus subtilis species, specific activity of supernatant is 1 1 U/mg, specific activity of the precipitate after precipitation is 6 U/mg, after dialysis i t i s 1 0 U /mg a nd s pecific a ctivity i s 8 4 U /mg a fter D E AE-Cellulose i on XIIexchange column chromatography. After column 8 folds purification was obtained. Specific activity of the protease obtained from Bacillus subtilis is measured as 84 U/mg. In the conducted study, pure specific activity of the protease and obtained specific activity of the protease were found to be the same. Molecular weight of the enzyme obtained as a result of conducted SDS-PAGE is found to be approximately 45kDa. In the study carried out with Bacillus cereus bacteria species, specific activity of supernatant is 12 U/mg, specific activity of the precipitate after precipitation is 14 U/mg. after precipitation 1.2 fold purification was obtained. Molecular weight of the enzyme obtained as a result of conducted SDS-PAGE is found to be approximately 37kDa.
Benzer Tezler
- Kök kanseri hastalığı [Rhizobium radiobacter (Agrobacterium tumefaciens)] ile mücadelede biyoajan bakterilerin kullanım imkânlarının araştırılması
Investigation of possibility of biological control with crown gall [Rhizobium radiobacter (Agrobacterium tumefaciens)] using bioagent bacteria
NASİBE TEKİNER
- Arkeolojik kazı toprağından izole edilen endospor oluşturan Basillerin bazı özelliklerinin incelenmesi.
Investigation some proporti̇es of basil isolated from the land of archaeologi̇cal excavati̇ons and endospore-formi̇ng
YASEMİN YEŞİLTAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
MikrobiyolojiDumlupınar ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FERDAĞ ÇOLAK
- Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis bakterilerinin ACC deaminaz (1-aminosiklopropan-1 karboksilat) aktivitelerinin araştırılması
Investigating the ACC deaminase (1-aminociclopropan-1 carboxylat) activities of Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis bacteria
GÜLSÜM COŞKUN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
ZiraatErciyes ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEMİH YILMAZ
- Topraktan izole edilen Bacillus cinsi bakterilerin bazı metabolik özelliklerinin belirlenmesi, plazmid DNA ve protein profillerinin incelenmesi
Studying of some metabolic activities, plasmid DNA and protein profiles of Bacillus bacteria isolated from the soil
MİRAÇ YILMAZ