HL 60 hücre dizisinde apoptotik sinyal oluşumunda glutatyon tüketiminin rolü
The role of glutathione depletion on apoptotic signal forming in HL 60 cell lines
- Tez No: 156904
- Danışmanlar: ÖĞR.GÖR. YASEMİN AKSOY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Oksidatif stres, Apoptozis, Glutatyon, Oksidanlar, Antioksidanlar, Oxidative stress, Apoptosis, Glutathione, Oxidants and Antioxidants
- Yıl: 2004
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 49
Özet
IV ÖZET Hücrenin yaşamı ve ölümü arasındaki denge çeşitli faktörlere bağlıdır. Reaktif oksijen türleri (ROT; süperoksit anyonu, hidrojen peroksit, singlet oksijen, hidroksil radikali ve peroksil radikal) bu faktörler arasında önemli yer tutmaktadır. ROT, hücrenin doğal antioksidan sistemini etkileyerek, sonuçta nükleik asit, protein, karbohidrat ve lipidleri içeren biyolojik makromoleküllere zarar vermektedirler. Oksidatif stres prooksidan- antioksidan dengedeki bozukluk ile tanımlanır ve sonuç hücre hasarıdır, bu da yaşlanma, karsinogenez, iskemi-reperfüzyon gibi patolojik ve biyolojik prosesleri ve AIDS, Parkinson, Huntington, katarakt gibi hastalıkları içerir. Apoptosis bu hastalıklar ile bağlantılıdır. Apoptozis, çeşitli patolojik durumlar sırasında oluşur; DNA fragmentasyonu, kromatin kondensasyonu, mitokondriyel trans-membran potansiyel değişiklikleri ve apoptotik cisimciklerin oluşumu ile karakterizedir. Hücre içinde oksidanlardan biri olarak bilinen glutatyonun (GSH) tüketimine bağlı olarak reaktif oksijen türleri açığa çıkmakta ve hücre apoptoza gitmektedir Çalışmamızda HL- 60 hücrelerinde GSH tüketimi için t-butilhidroperoksit (t-BOOH), antioksidan madde olarak da N-asetil sistein (NAC) kullanılmıştır. Hücre ölümü apoptoz veya nekroz şeklinde iki yol izlemektedir. Erken apoptozu belirlemek için hücreler Annexin V ile işaretlenmiş ve akım sitometride 10000 hücre sayılarak apoptoz ve nekroz yüzdeleri değerlendirilmiştir. Hücrelerin oksidan uygulamasından 4.5 saat sonra nekroza gitmesi nedeniyle çalışma aralığı ilk 4.5 saat olarak belirlenmiştir. Deneylerimiz NAC yokluğunda ve varlığında gerçekleştirilmiş, hücreler oksidan uygulanmadan önce 2 saat süre ile 20 mM antioksidan varlığında ve yokluğunda ön inkübasyona maruz bırakılmıştır. Ön inkübasyon sonrası hücrelere 0.1 mM t-BOOH uygulanmış ve bu 0. dakika olarak kabul edilmiştir. Hücre GSH derişimindeki değişiklikler 0-3. dakika gibi kısa bir zaman aralığında gerçekleşmektedir. Kontol GSH değerleri nmol/mg protein olarak 138 ± 8, NAC yokluğunda; 2. dakikada 35 ± 4, 60. dakikada 58 ± 6 'dır. NAC varlığında ise GSH değerleri 0 dakikada 105 ± 14, 60. dakikada 125 ±11 nmol/mg protein olarak saptandı. NAC varlığında 2. dakikada kontrol değerine ulaşan GSH değeri NAC yokluğunda kontol değerinin yarısı kadardır NAC varlığında 0. dakikada kontrol değerine kıyasla % 25'lik bir kayıp gözlensede bu 1. dakikada tekrar artarak kontrol değerine ulaşmaktadır. NAC yokluğunda ise t-BOOH eklenmesiyle daha başlangiçta GSH açısından yaklaşık % 76'lık bir kayıp söz konusudur. İkinci dakikada bu değer % 50'e çıkmakta ve bu durum korunmaktadır. Kaspaz 3 aktivitesi için değerlerimiz NAC yokluğunda ve varlığında kontrol değerine yakındır. HL-60 hücresi ile yapılan diğer araştırmaları değerlendirdiğimizde Kaspaz 3 aktivitesini belirlerken sürenin daha uzun tutulması gerekmektedir. Hücrelerde Anneksin V ile saptadığımız erken apoptozis aralığında büyük olasılıkla kaspaz 8 ve/veya kaspaz 9 enzim kaskadı başlamakta en sonda kaspaz 3'ün aktivasyonu gerçekleşmektedir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT The intrinsic balance between life and death can be influenced by several factors. Reactive products of oxygen are amongst the most potent and omnipresent threats faced by any living organism. Although most oxidative insult can be overcome by the cell's natural defences, sustained perturbation of this balance may result in either apoptotic or necrotic cell death. Apoptosis is a special form of cell death, which can be triggered by a variety of signals and pathophysiological conditions, including oxidative stress. Activation of members of of the caspase family of cysteine proteases is a crucial event in the apoptotic death program. Caspase-3 is a key executioner of apoptosis, whose activation is mediated by the initiator caspases, caspase-8 and caspase-9. Reduced Glutathione (GSH) plays a central physiological role in maintaining the homeostasis and in protecting cells aganist oxidants, toxicants, DNA-damaging agents and carcinogens of either exogenous or endogenous source. Low concentrations of GSH undergo the cells to apoptotisis by increasing reactive oxygen species. In this study, tert-butyl hydroperoxide (t-BOOH) used to decrease GSH levels, and N-acetyl-L- cysteine (NAC) used as antioxidant. The primary objective of this study is to determine GSH levels and caspase-3 activity at apoptosis in HL-60 Human Premyelositic Cell Line with or without NAC. After preincubation of the cell with antioxidant NAC, regeneration of GSH occurs as control level. Early apoptosis estimated using Annexin V on the flow cytometry. After 4,5 hours oxidants incubation of cells, cells undergo necrosis. Therefore, work hours ranged first 4,5 hours. In our experiment, with 20 mM NAC after 2 hours preincubation, 0,1 mM t-BOOH was added to cells and this state is assumed 0 minute. Cell's GSH concentration changes occurs between 0 and 3 minutes. Control GSH value is as nmol/mg protein 138 + 8, without NAC at 0 minute; 35 + 4, at 60 minutes 58+ 6. At the present of NAC, GSH values are at 0 minute; 105+14 and at 60 minutes; 125 +11 nmol / mg protein. At the present of NAC, GSH values reach the control level in 2 minutes, but without NAC the value of GSH is half of the control level. At the present of NAC % 25 value of GSH loses at 0 minute but this value increases and reaches the control value at 1 minute. On the other hand, without NAC, GSH value loses as % 76 of its first value. At 2 minutes this value increases to % 50 and conserves this state. Caspase- 3 activity is close the control value with or without NAC. We concluded our results, the time range should be longer to determine caspase-3 activity. Cells estimated with Annexin V at the early apoptosis, there might be caspase-8 and / or caspase-9 enzyme cascade and then activation of caspase-3 occurs.
Benzer Tezler
- Enalapril maleat,HL-60 akut miyeloid lösemi hücre dizisnde STAT sinyal yolağı üzerinden sitotoksik etki göstermektedir
Enalapril maleate has cytotoxic effect in HL 60 leukemic cells by altering STAT signaling pathway
ÖZLEM PURÇLUTEPE
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
HematolojiEge Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜRAY SAYDAM
- İnsan lösemi (HL-60) hücre dizisinde piridin-2-karbaldoksim ligandı ve Pt(II) kompleksinin apoptotik etkilerinin araştırılması
A research of apoptotic effects of pyridine 2-carbaldoksim ligand and Pt(II) complex in human leukemia cell line (HL-60)
MEDİHA ALKAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
BiyolojiAnadolu ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MİRİŞ DİKMEN
- Pediatrik akut Myeloid Lösemi tedavisinde kullanılan Metilprednizolon'un DNA metilasyonu üzerine etkisi
Effects of Methylprednisolone on DNA Methylation used for pediatric acute Myeloid leukemia patients
IŞIL YÜKSELEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
Tıbbi BiyolojiAnkara ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ASUMAN SUNGUROĞLU
- Hiperisin, hl-60 akut lösemi hücre dizisinde htert üzerinden apopitotik etki göstermektedir
Başlık çevirisi yok
KEZBAN PINAR ÖZEN
- Yeni tiyazol türevlerinin sentezi ve antikanser etki çalışmaları
Synthesis and anticancer activity studies of new thiazole derivatives
EBRU ZEYTÜN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MEHLİKA DİLEK ALTINTOP