Geri Dön

İnsan endotel hücre kültüründe büyüme faktörlerinin hücre proliferasyonuna etkisi

The effect of growth factors on cell proliferation in human endothelial cell culture

  1. Tez No: 165742
  2. Yazar: MÜGE SERHATLI
  3. Danışmanlar: DOÇ.DR. YEŞİM ÜNLÜÇERÇİ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Endothelium, Endothelial cells, Angiogenesis, HUVEC, VEGF, eNOS, COX2. 105
  7. Yıl: 2005
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 115

Özet

6. ÖZET Bu tez çalışmasında değişik konsantrasyonlardaki VEGF'in endotel hücre proliferasyonu ile nitrik oksit sentezinde bu hücrelerde önemli bir enzim olan eNOS, PGI2 oluşumunda anahtar enzim olan COX2 proteinlerinin ekspresyonu üzerine etkisi incelendi. Bunun için amacımız, in vitro çalışmalarda kullanılabilecek primer endotel hücrelerinin insan göbek kordonundan elde edilmesine ve bu hücrelerin immünhistokimyasal karakterizasyonuna ait tekniklerin yerleştirilebilmesi ve tekrarlanabilirliğinin sağlanmasıydı. Buna yönelik olarak insan göbek kordonundan kollajenaz enzimi kullanarak endotel hücresi izolasyonu yapıldı, elde edilen hücreler kültür ortamında çoğaltıldı, endotel hücreleri von Willebrand faktör ekspresyon yöntemi ile karakterize edildi ve endotel hücre popülasyonunun kültür ortamında iki kat çoğaldığı süre (population doubling time=PDT) tespit edildi. Bu tezde bunlardan sonra yapılan çalışmalar, HUVEC'lerde VEGF'e bağlı sinyal iletim yolaklarında yer alan eNOS ve COX-2 proteinlerinin ekspresyonları üzerine VEGF'in etkisinin Western blot yöntemi ile gösterilmesiydi. 1 ng/ml VEGF ile 48 saat inkübasyonun kontrolle karşılaştırıldığı deneyde, VEGF'in eNOS ekspresyonunu 1.7 kat arttırdığı, bir diğer deneyde, eNOS protein ekspresyonunun 5 ng/ml VEGF ile 24 saat inkübasyonda kontrole göre 1.86 kat arttığı, 1 ve 10 ng/ml VEGF konsantrasyonlarında ise artışların daha az olduğu, üçüncü deneyde ise 10 ng/ml VEGF ile 24 saat inkübasyonda kontrole göre 1.8 kat arttığı belirlenmiştir. Deneylerimizde VEGF'e bağlı eNOS protein ekspresyonundaki artışın beklenenden az olmasının, deneylerin hücrelerin büyüme alanlarını tamamen doldurmuş ve yoğun olduğu şartlarda yapılmış olmasına bağlı olduğu düşünülmektedir. eNOS gen ve protein ekspresyonunun hücrelerin büyüme ortamındaki yoğunluklarına bağlı olarak değiştiği rapor edilmiştir. Deneylerimizde elde ettiğimiz VEGF'e bağlı eNOS ekspresyonu yanıtında bu etkinin rolünü ortaya koymak amacıyla ortamdaki yoğunluğu düşük (180 000 hücre/100 mm'lik hücre büyütme kabı), ve yüksek (720 000 hücre/100 mm'lik hücre büyütme kabı) olan hücrelere VEGF eklenerek yapılan deneylerde, düşük yoğunluktaki hücrelerde eNOS ekspresyonunun kontrole göre 1.6 kat arttığı, yüksek yoğunluktaki hücrelerde ise değişmediği görülmüştür. 102C0X2 ekspresyonunun çalışıldığı deneylerde, 1 ng/ml VEGF ile 4 ve 24 saat inkübe edilen HUVEC'lerde COX2 ekspresyonunun kontrollere göre sırası ile 1.4 ve 1.9 kat arttığı, 10 ng/ml VEGF ile 1 saat inkübasyon ile yapılan bir diğer deneyde, COX2 ekspresyonunun kontrole göre yaklaşık 5 kat arttığı belirlenmiştir. Bu tezde yapılan ön çalışmalarda, VEGF'in HUVEC hücrelerinde eNOS ve COX2 proteinlerinin ekspresyonları üzerindeki arttırıcı etkisinin literatür ile uyumlu olduğu gözlemlenmiş olup bundan sonraki çalışmalarda bu sinyal ileti yolaklarının ayrıntılı analizi yapılacaktır. Anahtar Kelimeler; Endotelyum, Endotel hücreleri, Anjiyogenez, HUVEC, VEGF, eNOS, COX2 103

Özet (Çeviri)

THE EFFECT OF GROWTH FACTORS ON CELL PROLIFERATION IN HUMAN ENDOTHELIAL CELL CULTURE 7. SUMMARY In this thesis, we investigated the effects of varying concentrations of vascular endothelial growth factor (VEGF) on the proliferation of endothelial cells, expression of eNOS, an important enzyme in nitric oxide synthesis, and expression of COX2, the key enzyme in the formation of PGL. Our goal was to establish the techniques necessary to obtain the primary endothelial cells to be used in in vitro studies from the human umbilical cord, and to immunohistochemically characterize these cells, as well as to ensure the reproducibility of these techniques. To this end, endothelial cells were isolated from human umbilical cords by collagenase digestion, the cells obtained this way were allowed to proliferate in culture, their von Willebrand factor expression characterized and endothelial cell population doubling time (PDT) was determined. Subsequent to these experiments, the effects of VEGF on the expression of eNOS and COX2 proteins, which play an important role in HUVEC VEGF dependent signal transduction pathways, were shown by Western blot analysis. VEGF increases the eNOS expression by a factor of 1.7 with respect to the control value when extracts of HUVEC that are incubated in 1 ng/ml VEGF for 48 hrs is compared to extracts of untreated cells (control). In another experiment, 24 hours incubation in 5 ng/ml VEGF increases eNOS expression by a factor of 1.86 with respect to the control value; and in the third experiment 24 hours incubation in 10 ng/ml VEGF increases eNOS by a factor of 1.8. The fact that the increase in VEGF dependent eNOS protein expression was less than expected could be due to the fact that the experiments were performed under the conditions in which the cells were overconfluent. It has been previously reported that eNOS gene and protein expression changes according to the cell density. To see if this was the case, experiments were carried out where underconfluent (180 000 cells/1 00mm petri dish) and confluent (720 000 cells/1 00mm petri dish) cells were incubated with VEGF and analyzed as before. eNOS expression in the underconfluent cells increased by a factor of 1.6 with respect to the control value whereas no change in expression was observed in the case of confluent cells. 104In C0X2 expression experiments, when HUVECs were incubated in 1 ng/ml VEGF for 4 or 24 hours, C0X2 expression was found to increase by a factor of 1.4 and 1.9 respectively with respect to the control value. In another experiment where cell were incubated in 10ng/ml VEGF for 1 hour, COX2 was found to increase 5 fold with respect to the control value. Preliminary results that show an increasing effect of VEGF on HUVEC eNOS and COX2 protein expression are consistent with those reported in the literature. Detailed analysis of these signal transduction pathways is planned for our future studies.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    798272

    Kontrollü bor salan biyobozunur yara örtülerinin geliştirilmesi ve dermal/mukozal rejenerasyonda kullanımlarının araştırılması

    Development of controlled boron releasing biodegradable wound dressings and investigation of their usages in dermal/mucosal regeneration

    ÖZGE EKİN AKDERE

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU

  2. Tez No

    388613

    Sirna kaplı ipliklerin neointimal hiperplaziye etkilerinin araştırılması

    Investigation the effect of of sirna coating suture on neointimal hyperplasia

    TUBA ÇANAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyoteknolojiMarmara Üniversitesi

    Farmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FATMA JULİDE AKBUĞA

  3. Tez No

    157334

    İnsan umbilikal venlerinden elde edilen endotel hücre (HUVEC) kültüründe, vasküler endoteliyal büyüme faktörünün (VEGF) vasküler hücre adezyon molekülü-1(VCAM-1) ve intersellular adezyon molekülü-1 (ICAM-1)ekspresyonu üzerine etkilerinin incelenmesi

    Investigation of the effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) on the expression of vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and intercelluler adhesion molecule-1 (ICAM-1) in human umbilical vein endothelial cell culture

    YUSUFHAN YAZIR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    MorfolojiKocaeli Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. HAKKI DALÇIK

  4. Tez No

    724201

    Development and structural determination of antiangiogenic recombinant antibody structures for cancer treatment

    Kanser tedavisine yönelik antianjiogenik rekombinant antikor yapılarının geliştirilmesi ve yapısal tayini

    MELİS DENİZCİ ÖNCÜ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Biyomühendislikİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

    DR. AYLİN ÖZDEMİR BAHADIR

  5. Tez No

    449724

    Oküler yüzey rekonstrüksiyonunda kullanılmak üzere insan kaynaklı fibrin kaplama varlığında limbal eksplant kültür

    Limbal explant culture with human derived fibrin coating for ocular surface reconstruction

    GAMZE DERELİ CAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Göz HastalıklarıSağlık Bakanlığı

    Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NURULLAH ÇAĞIL

Geri Dön