Geri Dön

Yem değerini artırıcı enzim genlerinin probiyotik etkili laktik asit bakterilerinde klonlanarak üretimi

Cloning and production of feed upgrading enzyme encoding genes in probiotic lactic acid bacteria

  1. Tez No: 178670
  2. Yazar: MELTEM AŞAN ÖZÜSAĞLAM
  3. Danışmanlar: PROF.DR. NUMAN ÖZCAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Ziraat, Agriculture
  6. Anahtar Kelimeler: Fitaz, likenaz, Bacillus coagulans, probiotik, klonlama, Phytase, lichenase, Bacillus coagulans, probiotic, cloning
  7. Yıl: 2007
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Çukurova Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Zootekni Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 158

Özet

Fitazlar, bitkilerdeki fosforun ana depo formu olan fitatdan inorganik fosfatın serbest kalmasını sağlayarak gıda ve yemlerin besleyici değerini artıran enzimlerdir. Bu çalışmada, Bacillus subtilis VTT E-68013'den fitaz geni (phyC) PCR tekniği ile çoğaltılmış ve pMK3F'yi oluşturmak için Escherichia coli-Bacillus sp. mekik vektörü pMK3'e yerleştirilmiştir. pMK3F rekombinant vektörü ilk önce sıcaklık şoku yöntemi ile E. coli'ye aktarılmıştır. E. coli'den izole edilen pMK3F plazmidi kullanılarak elektrotransformasyon yöntemi ile Bacillus coagulans'a aktarılmıştır. E. coli ve B. coagulans'dan elde edilen bu rekombinant plazmidlerin HindIII ve BamHI enzimleri ile kesilmesi sonucu agaroz jel'de, phyC'yi kodlayan 1300 bç büyüklüğündeki DNA fragmenti ile 7200 bç büyüklüğündeki pMK3 vektörü gözlenmiştir. pMK3F rekombinant vektörünün fitaz geni PCR ile çoğaltılmış ve agaroz jelde gözlenerek sonuçlar desteklenmiştir. Fitaz geni, B. coagulans'da klonlanmasına rağmen Buğday Kepeği Ekstraktı/Sodyum-fitat/LB/Agar besi yerinde ve Buğday Kepeği Ekstraktı/Na-fitat substratları içeren SDS-PAGE'de fitaz aktivitesi tespit edilememiştir. ß-(1,3-1,4)-glukanazlar (likenazlar), ß-glukanlar ve likenanlar gibi ß-1,3 ve ß-1,4 bağları içeren düz ß-glukanları hidrolize eden enzimlerdir. Streptococcus bovis kökenli likenaz geni pMK3Lik plazmidini oluşturmak için E. coli-Bacillus sp. mekik vektörü pMK3'e yerleştirilmiştir. pMK3Lik rekombinant vektörü ilk önce E. coli'ye daha sonra da B. coagulans'a aktarılmıştır. E. coli ve B. coagulans'dan elde edilen bu rekombinant plazmidlerin SmaI enzimiyle kesilmesi sonucu agaroz jel'de 1800 bç'lik likenaz genine ait bant gözlenmiştir. pMK3Lik plazmidini taşıyan E. coli hücrelerinde hem LB/Likenan/Agar besi yerinde hem de SDS-Likenan-PAGE'de likenaz aktivitesi gözlenirken rekombinant B. coagulans'da enzim aktivitesi tespit edilememiştir.

Özet (Çeviri)

Phytases can increase the nutritional value of food and feed by liberating inorganic phosphate from phytate, the major storage form of phosphorus in plants. In this study, the phytase gene (phyC) from Bacillus subtilis VTT E-68013 was amplified by PCR technique and inserted into pMK3 shuttle vector of Escherichia coli-Bacillus sp. to construct pMK3F. The recombinant vector, pMK3F, was firstly transferred into E. coli by heat-shock method. MK3F plasmid isolated from E. coli was used to introduce into Bacillus coagulans cells by electrotransformation. HindIII and BamHI digestion of the recombinant plasmids from E. coli and B. coagulans yielded 1300 bp fragment of DNA carrying the gene encoding phyC and 7200 bp fragment of pMK3 vector on agarose gel electrophoresis. Phytase gene of recombinant vector pMK3F was also amplified by PCR and visualized by agarose gel electrophoresis to support the results. Although phytase gene was cloned in B. coagulans, phytase enzyme activity was not detected on Wheat Bran Extract/Sodium-phytate/LB/Agar plates and SDS-PAGE gel contains Wheat Bran Extract/Na-phytate as substrats. ß-(1,3-1,4)-glucanases (lichenases) hydrolyse linear ß-glucans containing ß-1,3 and ß-1,4 linkages such as ß-glucans and lichenan. Lichenase gene originated from Streptococcus bovis was ligated with pMK3 shuttle vector of E. coli-Bacillus sp. to construct pMK3Lik. The recombinant vector, pMK3Lik, was firstly introduced into E. coli and then B. coagulans. Digestion of recombinant plasmids from E. coli and B. coagulans by SmaI was showed the 1800 bp lichenase gene band on agarose gel elctrophoresis. Although E. coli cells carrying pMK3Lik was showed lichenase activity, the enzyme activity was not detected from recombinant B. coagulans cells on both LB/Lichenan/Agar plates and SDS-Lichenan-PAGE.

Benzer Tezler

  1. Samanın lignolitik aktiviteli mikroorganizmalarla muamele edilerek yem değerinin arttırılma olanaklarının araştırılması

    Başlık çevirisi yok

    Ö. HAKAN MUĞLALI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1993

    Veteriner HekimliğiAnkara Üniversitesi

    Hayvan Besleme ve Beslenme Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. AHMET ERGÜN

  2. Ruminant rasyonlarında kullanılan bazı kaba yemlere yem katkı maddesi olarak Tarhun (Artemisia dracunculus) ilavesinin In Vitro gaz ve metan üretimi ile bazı rumen parametreleri üzerine etkisi

    The effect of Tarhun (Artemisia dracunculus)supplementation as a feed additive to some forage used in ruminant rations on In Vitro gas and methane production and some rumen parameters.

    CİHAT BAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    ZiraatAtatürk Üniversitesi

    Zootekni Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ADEM KAYA

  3. Orta-Güney Anadolu bölgesinde koyunculuk faaliyetinin ekonomik analizi

    Economic analysis of sheep farming in the Central Southern Anatolian region

    ERDAL DAĞISTAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    ZiraatÇukurova Üniversitesi

    Tarım Ekonomisi Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. AYKUT GÜL

  4. Sirken (chenopodium album L.) bitkisinin melas ve inokulant ile silolanmasının silaj kalitesi ve besin madde bileşimine etkisinin belirlenmesi

    Evaluation of silage quality and nutrient composition of white goosefoot (chenopodium album L.) ensiled with molasses and inoculant

    FURKAN BEDEL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Veteriner HekimliğiBurdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi

    Hayvan Besleme ve Beslenme Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. EREN KUTER