Geri Dön

Fibrinojenin in vitro oksidasyonuna bağlı olarak yapısal değişimlerinin incelenmesi

Examination of the structural alterations due to in vitro fibrinogen oxidation

PDF İndir

  1. Tez No: 193538
  2. Yazar: KURTULUŞ KAYA
  3. Danışmanlar: Y.DOÇ.DR. ŞERMİN SAVAŞ TETİK
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: fibrinogen, oxidized fibrinogen, metal ion oxidation, mass spectrum.2
  7. Yıl: 2006
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Marmara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 76

Özet

1. ÖZETProteinlerin oksidasyonunun bir bölümü, proteinin reaktif oksijen türleri iledirekt olarak veya oksidatif stresin ikincil ürünleri ile indirekt indüklenmesi ile meydanagelen bir kovalent modifikasyondur.Bu çalışmada Fe+3/askorbat oksidatif sistemi kullanılarak in vitro fibrinojenoksidasyonu gerçekleştirildi. Fibrinojen modifikasyonu, oksidatif sistemin üç farklıkonsantrasyonlarında (100µM/25mM, 200µM/50mM, 300µM/75mM) ve 6 farklı zamanaralıklarında (2, 6, 12, 18, 24, 48 saat, 37oC' de) fibrinojen solüsyonunun inkübasyonuile gerçekleştirildi.Spektrofotometrik analizle, Fe+3/askorbat oksidatif sistemi ile modifiye edilenfibrinojen, doğal fibrinojen ile karşılaştırıldı. Yüksek konsatrasyonda (300µM/75mM)Fe+3/askorbat ile 2, 6 ve 12 saat inkübe edilen örneklerde hızlı bir fibrinojenmodifikasyonu ve buna bağlı olarak giderek artan dalga boyu ve optik dansite gözlendi.18 saat ve üzeri inkübasyonlarda konsantrasyon farkının modifikasyon üzerindekietkilerinin benzer olduğu spektrofotometrik değerlendirmelerle belirlendi. In vitroçalışmada fibrinojendeki trozin kaybı ile meydana gelen o-o-ditrozin yapısının, 48saatlik inkübasyonun yarattığı modifikasyona bağlı olarak maksimum λcm 308nm' dekarakteristik emisyonuyla oksidasyonun etkileri tespit edildi. nkübasyon süresi ilemodifikasyon şiddeti doğru orantılı olarak bulundu.HPLC analizinde doğal fibrinojen λcm 280 nm' de rt 5. dakikada elue edilirken,modifiye fibrinojen örneklerinin rt 7. ve 10. dakikalarda ana pikten ayrılma gösterdiğisaptandı.SDS-PAGE analizinde doğal fibrinojene göre modifiye fibrinojende yapısaldeğişikliğe bağlı önemli bir degredasyon gözlenmedi.Tripsin ile metabolize edilen doğal ve modifiye fibrinojen massspektrofotometre ile analiz edildi. Doğal fibrinojende gözlenen 527.4162 m/z dominantiyon-kütle spektrumu, oksidatif formlarda 402.4464 m/z olarak bulundu. Düşükmolekül ağırlıklı ve yüksek molekül ağırlıklı mass spektrum range' leri incelendiğinde,doğal fibrinojene göre Fe+3/askorbat oksidatif sistemine maruz bırakılan örneklerde çoksayıda yüksek yoğunluklu iyon-kütle intensity tespit edildi.1

Özet (Çeviri)

2. SUMMARYEXAMINAT ON DF THE THE STRUCTURAL ALTERATIONS DUE TOin vitro FIBRINOGEN OXIDATIONProtein oxidation is defined as the covalent modification of a protein inducedeither directly by reactive oxygen species or indirectly by reactions with secondary byproducts of oxidative stress. In this study, we analysed in vitro exposure of fibrinogen toFe+3/ascorbate oxidative system resulted in structural modifications. Treatment offibrinogen in three different concentrations (100µM/25mM, 200µM/50mM,300µM/75mM) and in 6 different incubation times (2, 6, 12, 18, 24, 48 hours), at 37oCby oxidative system was evaluated.In spectrophotometric analysis differencies between native fibrinogen andmodified fibrinogen upon exposure to the Fe+3/ascorbate oxidative system weredetected. Fibrinogen which was exposed to 2, 6 and 12h incubation times and highFe+3/ascorbate concentration (300µM/75Mm) was rapidly modified. We foundincreased exitation and optical density of modified fibrinogen when compared withnative fibrinogen. No difference was found in fibrinogen modification exposed to 18 hand over incubation times with oxidative system. In vitro the presence of o-o-ditryosinein a protein molecule which is formed from fibrinogen by the loss of tyrosine wasindicated potein modification of the characteristic emission at maximum λcm 308nm.We observed that the incubation times and modification intensities were lineer.In the HPLC analysis, the elution of native fibrinogen was detected in one peakwithin rt:5th min. After modification of fibrinogen, two peaks were eluted at rt:7th and10th minutes, completely resolved from the native fibrinogen.SDS-PAGE studies showed that the fibrinogen bands were not changesignificantly upon oxidation.The native and modified fibrinogen were analyzed on mass spectrum upondigestion with tyripsin. The dominant ion-mass spectum of the native fibrinogen wasfound 527.4162 m/z but this spectrum was detected at 402.4464 m/z in oxidized forms.1Low moleculer weight and high moleculer weight mass spectra ranges were compared.Oxidized fibrinogen had more ion-mass intensities at high rather than native fibrinogen.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    236747

    Deuterium'u azaltılmış suyun in vitro fibrinojen oksidasyonuna antioksidan ve mononükleer hücrelere apoptotik etkisinin incelenmesi

    Antioxidant effect of deuterium depletion on in vitro fibrinogen oxidation and its effect on apoptosis of mononuclear cells

    BURCU ERSOY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyokimyaMarmara Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. K. TURAY YARDIMCI

  2. Tez No

    107655

    Psöriasisli hastalarda düşük dansiteli lipoprotein (LDL)'in oksidasyona yatkınlığı ve bunun oksidan-antioksidan denge ile ilişkisi

    The Susceptibility of low density lipoprotein (LDL) to oxidation and its relation with oxidant-antioxidant balance in psotiatic patients

    BİRGÜL KURAL (VANİZOR)

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    BiyokimyaKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ASIM ÖREM

  3. Tez No

    143156

    In vitro bone tissue engineering on patterned biodegradable polyester blends

    Desenli, biyobozunur polyester blendler üzerinde in vitro kemik doku mühendisliği

    HALİMA KENAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2003

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. MEHMET TONER

    PROF.DR. VASIF HASIRCI

  4. Tez No

    40886

    Tam plazmada fibrinojen yoğunluğundaki artışın granülositlerin mikrobisidal aktiviteleri üzerine etkisi

    Başlık çevirisi yok

    FADIL ÖZTÜRK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1994

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıOndokuz Mayıs Üniversitesi

  5. Tez No

    616770

    İnsan yağ dokusu kaynaklı mezenkimal kök hücreleri ile yüklenmiş hyaluronik asit/jelatin plazma jellerin yumuşak doku mühendisliği uygulamalarında kullanımı

    Soft tissue engineering applications of human lipoaspirate-derived stem cells on hyaluronic acid/gelatin plasma gels

    ESRA KORURER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    BiyomühendislikKocaeli Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ERDAL KARAÖZ

Geri Dön