The substrate specificity of rat lung semicarbazide-sensitive amine oxidase (SSAO) and its interaction with some inhibitors
Sıçan akciger kaynaklı semikarbazide duyarlı amin oksidaz (SSAO) enziminin substrat özgüllüğü ve bazı inhibitörlerle etkileşimi
- Tez No: 194436
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜLBERK UÇAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Semikarbazide duyarlı amin oksidaz, sıçan akciğeri, saflaştırma, substrat, inhibisyon, pirazolinler, Semicarbazide-sensitive amine oxidase, rat lung, purification, substrate, inhibition, pyrazolines
- Yıl: 2005
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 105
Özet
ÖZETYabanoğlu, S., Sıçan Akciğer Kaynaklı Semikarbazide Duyarlı Amin Oksidaz(SSAO) Enziminin Substrat Özgüllüğü ve Bazı nhibitörlerle Etkileşimi.Hacettepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı BilimUzmanlığı Tezi, Ankara 2005.Semikarbazid duyarlı amin oksidaz [EC 1.4.3.6: amin:oksijen oksidoredüktaz(deamine edici), SSAO] sıçan akciğerinin mikrozomal fraksiyonlarından CibacronBlue 3GA-agaroz ve Concanavalin A-Sepharose 4B affinite kromotografilerikullanılarak 5.554 nmol/min/mg protein spesifik aktivite ile saflaştırıldı. 46 kezsaflaşma ve %15 verim sağlandı. Saflık, poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) iledoğrulandı. Saflaştırılan SSAO, PAGE'de 184 kDa molekül ağırlığına sahip tek birbant halinde gözlenirken indirgeyici koşullarda sodyum dodesil sülfat poliakrilamidjel elektroforezinde (SDS-PAGE) enzimin disülfit bağları ile bağlı 93 kDa'lukaltunitelerden oluşmuş homodimer olduğu fikrini veren 93 kDa molekül ağırlığınasahip bir band saptandı. Saflaştırılan enzim için optimum sıcaklık ve pH sırasıyla450C ve 7.5 bulundu. 600C'deki inkübasyon SSAO aktivitesinin tamamen kaybı ilesonuçlandı. Saflaştırılmış SSAO -800C'de en az bir ay stabil idi. Benzilamin vemetilamin için Km ve Vmax değerleri sırasıyla 3.65 µM ve 5.6 nmol/min/mg; 141.5µM ve 4.18 nmol/min/mg olarak bulundu. Benzilaminin kullanıldığı koşullardareaksiyonun hızı, artan substrat konsantrasyonları ile azaldı ve bu bulgu sözkonususubstratın sadece düşük konsantrasyonlarda Michaelis-Menten enzim davranışınauyduğunu gösterdi. Yarışmalı substrat çalışmaları metilamin, dopamin,feniletilamin, kinuramin ve serotoninin SSAO'nun benzilamin oksidasyonunu inhibeettiğini gösterdi. Semikarbazid ve 2-Bromoetilaminin SSAO'nun benzilaminoksidasyonu üzerinde intihar tipi bir inhibisyon gösterdiği; büyük olasılıklainhibitörlerin öncelikle enzimle etkileşime girerek geridönüşümlü bir kompleksoluşturduğu ve ardından bu kompleksin kovalan bağlanma ile oluşan bir enzim-inhibitör eklenti ürününe dönüşerek inhibisyona yol açabileceği varsayıldı.Yeni sentezlenen ve fenil halkasında p-konumunda metoksi grubu taşıyan pirazolintürevleri SSAO enzimini geridönüşümsüz ve yarışmasız olarak inhibe etti. Buinhibisyonların zamana bağlı olduğu bulundu.
Özet (Çeviri)
ABSTRACTYabanoğlu, S., The Substrate Specificity of Rat Lung Semicarbazide-sensitiveAmine Oxidase (SSAO) and its Interaction with Some Inhibitors. HacettepeUniversity Institute of Health Sciences, Master of Science Thesis inBiochemistry, Ankara 2005.Semicarbazide-sensitive amine oxidase [EC 1.4.3.6: amine:oxygen oxidoreductase(deaminating), SSAO] was purified from the crude microsomal fractions of rat lungby Cibacron Blue 3GA-agarose and Concanavalin A-Sepharose 4B affinitychromatographies with a specific activity of 5.554 nmol/min/mg of protein. A 46-fold purification and a recovery of about 15% were obtained. Purity was approved bypolyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). The purified SSAO appeared as a singleband with a molecular mass of 184 kDa in PAGE whereas sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) under reducing conditions yieldeda band of 93 kDa suggesting that the enzyme is a homodimer composed of 93 kDasubunits possibly attached by disulfide bridges. Optimum temperature and pH for thepurified enzyme were found as 450C and 7.5, respectively. Incubation at 600Cresulted in a complete loss of SSAO activity. Purified SSAO was stable for at leastone month at -800C.Km and Vmax values for benzylamine and methylamine were determined to be 3.65µM and 5.6 nmol/min/mg; and 141.5 µM and 4.18 nmol/min/mg, respectively. Thevelocity of the reaction decreased with increasing substrate concentration in the caseof benzylamine indicating that Michaelis-Menten enzyme behaviour was obeyed atonly low concentrations for this substrate. Substrate competition studies showed thatmethylamine, dopamine, phenylethylamine, kynuramine and serotonin inhibited thebenzylamine oxidation by SSAO. Semicarbazide and 2-Bromoethylamine (2-BEA)exhibited a suicide type of inhibition on the oxidation of benzylamine by SSAO bypossibly interacting first with the enzyme to form a reversible complex with asubsequent reaction and leading this complex to the covalently bound enzyme-inhibitor adduct.Newly synthesized pyrazoline derivatives carrying p-methoxy group on their phenylring inhibited SSAO non-competitively and irreversibly. Their inhibition was foundto be time dependent.
Benzer Tezler
- Characterization of plasma hydrolases and their contribution to hydrolase activities in the plasma of different species
Başlık çevirisi yok
FATMA GÖKŞİN BAHAR
- Isolation, purification and immobilization of UDC-glucuronyl transferace.
Başlık çevirisi yok
FİGEN ZİHNİOĞLU
- Polyamine dependent protein kinase from rat brain and human laryngeal carcinoma
Başlık çevirisi yok
A.CANDAN AKAR
- Profiling of mTORC1 signaling in rat liver using mass spectrometry
Başlık çevirisi yok
GÖKHAN DEMİRKAN
- Increasing the substrate specificity of geobacillus stearothermophilus LDH by using iterative saturation mutagenesis
Tekrarlamalı doygunluk mutagenez yöntemi ile geobacıllus stearothermophılus LDH'ın substrat özgüllüğünün artırılması
AŞKIN SEVİNÇ ASLAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Biyokimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NEVİN GÜL-KARAGÜLER