Geri Dön

Hepatit C virusunun 'core' proteinin prokaryotik hücrede ifade ettirilip saflaştırılması

The expression and purification of hepatitis C virus core protein in prokaryotic cells

PDF İndir

  1. Tez No: 195514
  2. Yazar: ERTAN ÇAKMAK
  3. Danışmanlar: PROF.DR. Y. HAKAN ABACIOĞLU, Y.DOÇ.DR. İ. MEHMET ALİ ÖKTEM
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2007
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 100

Özet

Hepatit C virusu (HCV) zarflı, tek iplikli bir RNA virusudur. Dünya Saglık Örgütünün tahminlerine göre dünyada 170 milyon kisinin HCV ile infekte oldugu tahmin edilmektedir. HCV ciddi morbidite ve mortalitesi yanı sıra, tedavi maliyetlerinin yüksekligi ile de önemli bir saglık sorunudur. HCV poliproteininden kodlanan ilk protein özyapı (core) proteinidir. Bu protein virusun yapısına katılması dısında, hücresel islevleri de virus lehine düzenleyebildigi gözlenmistir. Bu nedenle bu proteinin virusun patogenezinde rol aldıgı düsünülmektedir. Çalısmada, özyapı proteinin ilk 178 aminoasidini kodlayan DNA dizisi PZT ile çogaltıldı. PZT ürünü önce pGEM-T Easy TA vektörüne klonlandı. Ardından bu vektörden BamHI ve HindIII ile kesilip pQE-30'a klonlandı. Ekspresyon, E. coli M15 (prep4) susunda OD600=0.7'de 1mM IPTG ile uyarılarak 3 saat süre ile yapıldı ve bakteriler santrifüj ile pellet haline getirip 8M ürede çözündü. Protein saflastırılması afinite kromotografisi (Ni-NTA matriks) ile yapıldı. Ekspresyon ve saflastırılmıs protein, ?Western Blot? ile ECL substrat kullanılarak saptandı. Ekspresyon ve saflastırma sonrasında beklenen 21kDa'luk bant büyüklügü elde edildi. Çalısmada, özyapı proteinin ilk 178 aminoasidi E. coli'de eksprese edilmistir. Bu saflastırılmıs protein patogenez çalısmalarında, serolojik test hazırlanmasında kullanılabilecektir. Ayrıca klonlanan vektörler PZT'de pozitif kontrol olarak kullanılabilir. Bu çalısmada ile elde edilen bilgiler, gelecekte yapılacak prokayotik ekpresyon çalısmaları için zemin olusturacaktır.

Özet (Çeviri)

Hepatitis C virus (HCV) is an enveloped, positive stranded RNA virus. The World Health Organization estimates that there are more than 170 million HCV infected individuals worldwide. Aside from the high morbidity and mortality of the HCV infection, the treatment costs can be a burden on health economics. Core protein is the structural unit of the viral capsid. It also seems to be important for the viral pathogenesis by interfering with various cellular processes. In this study, the first 178 amino acids coding sequence of the core protein was amplified using polymerase chain reaction (PCR) and cloned into the pGEM-T Easy TA cloning vector. Following digestion with BamHI and HindIII, the insert was subcloned into the pQE-30 vector. The protein expression was carried out in the E. coli M15 (prep4) using IPTG as inducer. The bacterium was pelleted with centrifugation and resuspended in 8M urea. The purification of the recombinant protein was made with affinity chromatography (Ni- NTA). The detection of the expressed and purified protein was made with western blotting using chemiluminescent substrate. The expected 21kDA protein band was detected after the expression and purification. In this study, the core protein was expressed in E. coli. The purified protein can be used in pathogenesis studies and in serologic tests as antigen. The cloned vector can be used as a positive control in PCR experiments.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    79310

    Expression and purification of the hepatitis c virus core protein in e.coli and testing of human sera with this core antigen

    Hepatit C virüsü core proteininin e.colide expresyonu ve saflaştırması ve insan serumunun bu antigan ile test edilmesi

    ÇAĞLA EROĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ERGÜN PINARBAŞI

  2. Tez No

    83737

    Molecular cloning and characterization of the common 1b subtype of HCV from Turkey

    Türkiye'de baskın olarak görünen hepatit C virüsü 1b alt tipinin moleküler klonlanması ve karakterizasyonu

    ASLI ÖZTAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1999

    Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK

  3. Tez No

    192846

    Kronik hepatit b tanılı hastalarda kemik metabolizma parametrelerinin bazılarının sağlıklı bireylerle karşılaştırılması

    Comparing some of bone metabolism parameters between chronic hepatitis b patients and healty control

    OĞUZ DİKBAŞ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıSelçuk Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUSTAFA SAİT GÖNEN

  4. Tez No

    282350

    Etodolak üzerinden heterosiklik bileşiklerin sentezi, hepatit-C NS5B polimeraz inhibitörü ve antikanser aktivitelerinin araştırılması

    Etodolak üzerinden heterosiklik bileşiklerin sentezi, hepatit-C NS5B polimeraz inhibitörü ve antikanser aktivitelerinin araştirilmasi

    PELİN ÇIKLA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Eczacılık ve FarmakolojiMarmara Üniversitesi

    Farmasötik Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. Ş. GÜNİZ KÜÇÜKGÜZEL

  5. Tez No

    138121

    Akut ve kronik hepatit B infeksiyonlu hastalarda hepatit B virüsü X genindeki mutasyonların incelenmesi ve klinik ilişkisinin araştırılması

    Analysis of hepatitis B virus (HBV) X region mutations from acute and chronic HBV infected patients and investigation of clinical relations

    PINAR UYSAL ONGANER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2003

    Tıbbi BiyolojiMarmara Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞE ÖZER

Geri Dön