Agrobacterium aracılığıyla nohut bitkisi (Cicer arietinum L.)'ne gen aktarımı
Agrobacterium mediated transformation in chickpea (Cicer arietinum l.)
- Tez No: 196434
- Danışmanlar: Y.DOÇ.DR. MİKAİL AKBULUT
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biology, Bioengineering, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Nohut, Agrobacterium, Transformasyon, Enjeksiyon, Infiltrasyon
- Yıl: 2006
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 90
Özet
iiiAGROBACTERIUM ARACILIĞIYLA NOHUT BİTKİSİ (CICER ARIETINUML.)'NE GEN AKTARIMIRıdvan TEMİZGÜLErciyes Üniversitesi, Fen Bilimleri EnstitüsüYüksek Lisans Tezi, Temmuz 2006Tez Yöneticisi: Yrd. Doç. Dr. Mikail AKBULUTÖZETBu çalışmanın temel amacı, lokal nohut kültüvarları için güvenilir ve tekrarlanabilir birrejenerasyon ve transformasyon sistemi geliştirmektir. Doku kültürü çalışmalarındafarklı eksplantlar (kotiledon nodları ve embriyo uçları), farklı büyüme düzenleyicileri(BAP ve TDZ) ve bu düzenleyicilerin farklı konsantrasyonları gibi çeşitli parametrelerinrejenerasyon ve transformasyona etkileri araştırılmıştır. En iyi rejenerasyon yanıtı 3mg/L BAP, 1 mg/L Kinetin ve 0.5 mg/L GA3 ile desteklenmiş Modifiye Murashige veSkoog ortamında kültüre alınan kotiledon nodlarından elde edilmiştir. Kotiledonnodlarının Agro-vakum infiltrasyonu, çimlendirilmiş nohut tohumlarınınAgroinokülasyonu, tohumların Agroenjeksiyonu ve yüzey sterilizasyonu yapılmış vekuru nohut tohumlarının imbibisyonu (şişirme, emdirme) olmak üzere dört farklıtransformasyon stratejisi denenmiştir. Agro-vakum infiltrasyonu çalışmaları kotiledonnodları ve embriyo uçlarına uygulanmıştır. 30 dakika süreyle 450 mmHg evaküasyonbasıncında Agrobacterium hücrelerinin vakum infiltrasyonu geçici GUS ekspresyonuiçin optimum olarak bulunmuştur. Agroenjeksiyon, üç gün çimlendirilmiş tohumlarınkotiledon nodları içine steril bir enjektör ile uygulanmıştır. Transformasyon etkinliğineAgrobacterium suşları, enfeksiyon süresi, eksplantın gelişme evresi, yaralama,infiltrasyon ve kültüvarlar gibi çeşitli parametrelerin etkisi araştırılmıştır.Transformasyon etkinliği geçici GUS aktivitesine bakarak veya selektif ortamdayaşayan eksplantlara dayanarak belirlenmiştir. KYRT1/pTJK 136 suşu geçici GUSaktivitesi bakımından C58C1/pTJK 136 suşundan daha etkili olarak bulunmuştur.pDNEM 33 plazmidi uida geni taşımadığı için EHA 101 suşu için geçici GUS aktivitesibelirlenememiştir. Transgenlerin varlığı, ayda bir alt kültüre alınan selektif ortamda 3-4ay seleksiyona tabi tutulmuş bitkilerde PCR analizleri ile belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
ivAGROBACTERIUM MEDIATED TRANSFORMATION IN CHICKPEA(CICER ARIETINUM L.)Rıdvan TEMİZGÜLErciyes University, Graduate School of Natural and Applied SciencesM. Sc. Thesis, July 2006Thesis Supervisor: Asist. Prof. Dr. Mikail AKBULUTABSTRACTMain purpose of this study was to develop a reproducible and reliable regeneration andtransformation system for local chickpea cultivars. In tissue culture studies; the effect ofvarious parameters such as different explants (cotyledonary nodes and embryo axes),different growth regulators (Benzylaminopurine and thidiazuron) and their variousconcentrations have been investigated. Best regeneration response was obtained fromcotyledonary nodes cultured on modified Murashige and Skoog medium amended with3 mg/L Benzylaminopurine, 1 mg/L Kinetin and 0.5 mg/L GA3 (2.77 shoot per explant).Four different transformation strategies namely; Agro-vacuum infiltration ofcotyledonary nodes, Agroinoculation of germinating chickpea seedlings, Agro-injectionof seedlings and imbibitions of surface sterilized dry chickpea seeds were investigated.Agro-vacuum infiltration experiments were carried out on cotyledonary nodes, andembryo axes. Vacuum infiltration of Agrobacterium cells at 450 mmHg for 30 minutewas found to be optimum for transient GUS expression. Agroinjection was applied witha sterile injector into cotyledonary node of three days old seedlings. The effect ofvarious parameters; Agrobacterium strains, infection durations, explant developmentalstage, injury, infiltration and cultivars, on transformation efficiency were investigated.Transformation efficiency was determined based on transient GUS activity or survivalon selective media. KYRT1/pTJK 136 strains were more efficient compared toC58C1/pTJK 136 strain based on transient GUS activity. Since pDNEM 33 plasmid wasnot carrying uida gene, transient GUS activity was not determined for EHA 101 strain.The presence of transgene was determined by PCR analysis on green plants subculturemonthly on selective media for 3-4 times.Key Words. Chickpea, Regeneration, Agrobacterium, Transformation, Infiltration
Benzer Tezler
- Kuraklıkla ilişkili MİR408 geninin nohut (Cicer arietinum L.) bitkisine Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla aktarılması
Transformation of chickpea (Cicer arietinum L.)with drought gene related MİR408 gene using Agrobacterium tumefaciens as vector
MORTAZA HAJYZADEH
Doktora
Türkçe
2014
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KHALID MAHMOOD KHAWAR BHATTI
DOÇ. DR. TURGAY ÜNVER
- Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla nohut geveni (Astragalus cicer L.)'ne gen aktarımı
Genetic transformation of cicer milkvetch (Astragalus cicer L.) via Agrobacterium tumefaciens
DERYA GÜRLEK
Yüksek Lisans
Türkçe
2006
ZiraatAnkara ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF.DR. SEBAHATTİN ÖZCAN
- Agrobacterium-mediated genetic transformation and microtuberization of potato (solanum tuberosum L.)
Patateste (solanum tuberosum L.) agrobacterium aracılığıyla genetik transformasyon ve mikroyumru üretimi
İREM KARAMOLLAOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2000
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM
PROF. DR. ŞEBNEM ELLİALTIOĞLU
- Şeker pancarı (Beta vulgaris L.) bitkisinde agrobacterium aracılığıyla herbisitlere karşı dirençlilik gen aktarım çalışmaları
Agrobacterium mediated geneti̇c transformation of sugar beet (Beta vulgaris L.) against herbicide resistance genes
PARİSA POURALI KAHRIZ
Doktora
Türkçe
2016
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KHALID M.KHAWAR BHATTI
- Herbisite direnç geni CP4-EPSPS'nin Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla patatese aktarılması
Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation of potato with CP4-EPSPS herbicidal gene
SAFA SÜMER
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
ZiraatNiğde Ömer Halisdemir ÜniversitesiTarımsal Genetik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ALLAH BAKHSH