Fosfolipaz A2 enzimiin afinite-ultrafiltrasyon ile saflaştırılması
Purification of phospholipase A2 by affinity-ultrafiltration
- Tez No: 196937
- Danışmanlar: PROF.DR. AZMİ TELEFONCU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Pankreatik Fosfolipaz A2, PLA2 saflaştırılması, afinite-ultrafiltrasyon, Pancreatic PhospholipaseA2, PLA2 purification, affinity-ultrafiltration
- Yıl: 2006
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 204
Özet
ÖZETFOSFOLİPAZ A2 ENZİMİNİNAFİNİTE-ULTRAFİLTRASYONİLE SAFLAŞTIRILMASITEKE, MustafaDoktora Tezi, Biyokimya Anabilim DalıTez Danışmanı: Prof. Dr. Azmi TELEFONCUAğustos 2006,181 SayfaFosfolipaz A2'ler (PLA2; EC 3.1.1.4) fosfogliseridlerin sn-2 yağasidi ester bağını hidrolizleyerek serbest yağ asitleri ve lizofosfolipitleriayıran çeşitli enzim ailesidir. sn-2 pozisyonundaki yağ asidi çoğunluklaaraşidonik asittir (AA). Prostaglandinler, prostasiklinler vetromboksanlar siklooksigenaz yoluyla, lökotrienler lipoksigenaz yoluylaAA'den sentezlenirler. PLA2 hidroliz ürünü olan lizofosfolipit hücresinyal iletiminde, fosfolipidin yeniden modellenmesinde ve membranınbozulmasında çok önemlidir. Bu rollere ek olarak PLA2, son zamanlardasistematik ve akut inflamator şartlardan kansere kadar değişen geniş birpatofizyolojik durumun içinde yer almakla tanınmaktadır. Gittikçe artansayıdaki bir çok farmakolojik inhibitör fizyolojik koşullarda PLA2'lerinrolünü tanımlamaya yardımcı olacaktır. Bu sebeple farklı kaynaklardanPLA2'lerin saflaştırılması ve karakterizasyonu son derece önemlidir.Memeli PLA2 enzimleri büyüklükleri, salgılanma kapasiteleri vekalsiyuma bağımlılıkları açısından sınıflandırılmak istenirse; düşükmolekül kütleli Ca2+-bağımlı salgılanan enzimler(sPLA2), yüksekmolekül kütleli Ca2+-bağımlı sitozolik enzimler (cPLA2) ve Ca2+-bağımsız enzimler(iPLA2) olarak sınıflandırılır. Memeli pankreası veyılan zehirinde PLA2'ler oldukça fazla miktarda bulunmaktadır ve bunedenle saflaştırılmış ve kapsamlı olarak çalışılmıştır. Buna karşın, diğerhücre ve doku kaynaklarında da bulunan bu enzimler eser miktardadır veiyi tanımlanmamıştır. Bu enzimler sığır bağırsağı, tavşan ve sıçaninflamator salgıları, sıçan ve insan plateletleri, sıçan dalağı, sıçankaraciğeri ve romatizmalı hastaların eklem sıvılarından saflaştırılmıştır.Bu çalışmada, üç farklı afinite reçinesi tarafımızdan sentezlendi.%Verim ve saflaştırma katı açısından en iyi sonucu kitosan-glutaraldehid-substratla oluşturulan reçine verdi. Bu reçine, bir PLA2substratı olan fosfatidiletanolaminin kitosanla ilişkilendirilerek sudaçözünür makromoleküler bir reçinenin geliştirilmesi esasındagerçekleştirilmiştir. Ultrafiltrasyon teknikleriyle birlikte makroligand,sığır pankreasından PLA2'nin saflaştırılmasında kullanılmıştır.Reçineden bağlı PLA2'nin elüsyonu için optimum koşullar incelendi.Ayrıca saf enzimin bazı karakteristik özellikleri ve kinetiği belirlendi.Reçinenin tekrar kullanılabilirliliği de incelendi.
Özet (Çeviri)
ABSTRACTPURIFICATION OF PHOSPHOLIPASE A2 BYAFFINITY-ULTRAFILTRATIONTEKE, MustafaPhD in BiochemistrySupervisor: Prof. Dr. Azmi TELEFONCUAugust 2006, 181 pagesPhospholipases A2 (PLA2; EC 3.1.1.4) are a diverse family ofenzymes that hydrolyze the sn-2 fatty acid ester bond ofphosphoglycerides, liberating free fatty acids and lysophospholipids. Thefatty acid at the sn-2 position is mainly arachidonic acid(AA). From AAprostaglandins, prostacyclins and thromboxanes are formed by thecyclooxygenase-dependent pathway and leukotrienes are synthesized bythe lipoxygenase-dependent pathway. The other product of PLA2 action,lysophospholipid, is very important in cell signaling, phospholipidremodeling, and membrane perturbation. In addition to its roles,phospholipase A2 has recently been recognized to be involved in a widenumber of pathophysiological situations, ranging from systematic andacute inflammatory conditions to cancer. A growing number ofpharmacologic inhibitors will help define the role of particularphospholipase A2s in physiological conditions. Because of these factsthe purification and characterization of phospholipase A2 from differentsources has a great importance. The mammalian PLA2 enzymes, ifsubdivided on the basis of size, secretory capabilities and calciumrequirements, fall broadly into three groups: low molecular weight Ca2+-dependent secreted enzymes(sPLA2), high molecular weight Ca2+-dependent cytosolic enzymes(cPLA2) and the Ca2+-independentenzymes(iPLA2). PLA2 from mammalian pancreas and snake venomsare abundant and consequently have purified and extensively studied.PLA2 from other cell and tissue sources, in contrast, are trace enzymesand not well defined. Related enzymes have been purified from bovineintestine, rabbit and rat inflammatory exudate, rat and human platelets,rat spleen, rat liver, and from the joint fluid of patients with rheumatoidsarthritis.In this study, we have synthesized three different affinity resins.Chitosan-glutaraldehyde-substrate resin given the best result in terms ofyield% and purification fold for PLA2 purification. The resin, thedevelopment of a macromolecular water soluable resin based on chitosanbearing phosphatidylethanolamine, a PLA2 substrate, was attempted.Together with ultrafiltration techniques, the macroligand was employedto purify PLA2 from bovine pancreas. The optimum conditions forelution of bound PLA2 from the resin were investigated. Furthermore,some characteristic properties of the purified enzyme and the kineticswere determined. Reusability of the resin was also investigated.
Benzer Tezler
- Şizofrenide serum fosfolipaz A2 enzim düzeylerinin klinik değişkenler ve tedavi ile ilişkisinin araştırılması
Investigate blood phospholipase A2 activity to determine clinic variables and treatment in schizophrenia
UFUK ÇALIŞKAN
- Sigara dumanı maruziyetine bağlı damar hasarının moleküler temeli ve yeni tedavi yaklaşımı: Alfa-linolenik asit
The molecular basis of vessel damage i?nduced by cigarette smoke exposure and new treatment approach: Alpha-linolenic acid
HALİL MAHİR KAPLAN
- Association of SNP in phospholipase A2 gene with prostate cancer
Fosfolipaz A2 geni içerisinde bulunan SNP ile prostat kanseriarasındaki ilişki
KAAN ÖZTÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
GenetikYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DİLEK TELCİ
DOÇ. DR. NİHAN ÇELEBİ ÖLÇÜM
- Hiperkolesterolemik dislipidemik çocuklarda kardiovasküler risk belirteci olarak Lipoprotein ilişkili Fosfolipaz A2 düzeyi
Lipoprotein associated Phospholipase A2 level as a risk marker of cardiovasculer disease in hypercholesterolemic dyslipidemic children
BELKIZ ÖNGEN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
BiyokimyaEge ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FERHAN GİRGİN SAĞIN
- Yeni benzimidazol türevlerinin sentezi ve mikrozomal prostaglandin E2 Sentaz-1 (mPGES-1) inhibitörü etkilerinin incelenmesi
Synthesis of new benzimidazole derivatives and investigation of their inhibitory effects on microsomal prostaglandin E2 Synthase-1 (mPGES-1)
AZİZE GİZEM ERGÜL
Doktora
Türkçe
2022
Eczacılık ve FarmakolojiGazi ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BURCU ÇALIŞKAN