Poliglisidil metakrilat mikrokürelere anti C-reaktif protein immobilizasyonu ve tanı amaçlı kullanımı
Anti c-reactive protein immobilization onto polyglysidil methacrylate microspheres and it's use for diagnosis
- Tez No: 197144
- Danışmanlar: DOÇ.DR. HAKAN AYHAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
- Anahtar Kelimeler: CRP, polimerik mikroküreler, antijen immobilizasyonu, tanıkitleri, CRP, polymeric microspheres, antigen immobilization, diagnostic kits
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 68
Özet
POLİGLİSİDİL METAKRİLAT MİKROKÜRELERE ANTİ C-REAKTİF PROTEİNİMMOBİLİZASYONU VE TANI AMAÇLI KULLANIMIErinç OZANÖZSunulan bu çalışmanın amacı; ticari örneklerine alternatif olmak üzere c-reaktifproteinin tanısında kullanılacak, polimerik taşıyıcı bazlı bir diagnostik test kitiningeliştirilmesidir. Çalışmanın ilk bölümünde monodispers PGMA(poliglisidilmetakrilat) partikülleri; GMA (glisidilmetakrilat) monomerinin etanoldağıtma ortamında başlatıcı olarak AIBN (azobisizobutironitril) ve stabilizör olarakPAA (poliakrilikasit) varlığında dispersiyon polimerizasyonuyla sentezlenmiştir.Sentezlenen PGMA mikrokürelerin boy ve boy dağılımlarının saptanması içintaramalı elektron mikroskobu (SEM) kullanılmış, elde edilen fotoğraflardanmikroküreler sayılarak sayıca ortalama çap (Dn) 1,166 µm, ağırlıkça ortalama çap(Dw) 1,166 µm, ve polidispersite indeksi (PDI) 1.000 olarak hesaplanmıştır.Gravimetrik yöntemle tayin edilen %88,67 (%ağırlık) değeri ise toplam monomerdönüşüm oranının yeterince yüksek olduğunu göstermektedir. Karakterizasyonsonuçlarına göre polimerizasyon reçetesinin başarıyla kullanılabileceğiöngörülmüştür. Çalışmanın ikinci bölümünde, karakterizasyonu yapılanmikroküreler, C-reaktif protein tanısında, anti-human C-reaktif proteinimmobilizasyonunda taşıyıcı partikül olarak kullanılmıştır. İmmobilizasyonda,taşıyıcıya bağlama yönteminin adsorpsiyon ve kovalent bağlama metotlarıdenenmiştir. Kovalent bağlanma metodunda uzatma kolu (spacer-arm) olarak çiftfonksiyonel bir reaktif olan glutaraldehit kullanılmıştır. Modifiye Lowry toplamprotein tayini ile elde edilen ?immobilize antijen miktarları? ve hasta serumu ileyapılan çökelme testleri sonuçlarına göre adsorbsiyon yönteminin tamamıylakullanışsız, bunun yanında kovalent bağlama metodunun glutaraldehit varlığındadaha uygun olduğu saptanmıştır. Mikrokürelere bağlanacak antijeninimmobilizasyon çalışmaları sonucunda optimum koşullar; başlangıç glutaraldehitderişimi %2, immobilizasyon pH'ı 7.4, immobilizasyon sıcaklığı 25oC,immobilizasyon süresi 90 dak. ve başlangıç antijen derişimi 1µg/ml olarakbulunmuştur. Çalışmanın son aşamasında ise, hazırlanan anti-human C-reaktifprotein immobilize mikroküreler, hasta serumlarından alınan örneklerle in-vitroortamda etkileştirilerek çökelme deneyleri yapılmıştır. Bu çalışmalar sonundaçökelme şiddetlerine göre en yüksek skorlara sahip kitler belirlenerek seçilmiştir.Bu seçilen kitler ve ticari CRP tanı kitleri, seri olarak seyreltilerek hazırlanan hastaserumları ile etkileştirilerek kıyaslanmıştır. Bu kıyaslama sonuçlarına görehazırlanan kitlerin performansları saptanmıştır.
Özet (Çeviri)
ANTI C-REACTIVE PROTEIN IMMOBILIZATION ONTO POLYGLYSIDILMETHACRYLATE MICROSPHERES AND IT?S USE FOR DIAGNOSISErinç OZANABSTRACTThe aim of this study is to develop a test kit for diagnose of C-reactive protein(CRP) as an alternative to commercial kits. The diagnostic test kit to be developedis propsed as an polymeric carrier based test kit. In the first step of the submittedstudy, PGMA (polyglysidilmetacrylate) particles were synthesized by dispertionpolymerization method from the GMA (glysidilmethacrylate) monomer, dissolved inan ethanol medium, by using AIBN (asobisisobutyronitrile) as initiator and PAA(polyacrylicacid) as stabilizer. Size and size distribution of the synthesizedmicrospheres were determined by SEM (scanning electron microscope). Bycounting the particles from the obtained photographs the following results werecalculated: average diameter by number (Dn); 1,166µm, average diameter byweight (Dw); 1,166µm, polydispersity index (PDI); 1,000. The calculated monomertransformation value (%88,67 by weight), which was determined by gravimetricmethods, indicates that the total monomer transformation rate is satisfactory. Theobtained characterization results supported that the formulation could be usedsuccesfully. In the second step of the study, the characterized particles were usedas micro-carriers for the immobilization of the anti-human CRP aiming thediagnosis of CRP. For the immobilization process, adsorption and the covalentbinding methods of the binding onto a carrier technique has been applied.Glutaraldehyde, a bifunctional reactive, has been used as the spacer arm in thecovalent binding method. The ?immobilized antigen amount? results obtained fromThe Modified Lowry total protein analysis and the agglutination results obtainedfrom the patient serums stated that the adsorption method is totally uselesshowever with the presence of glutaraldehyde, the covalent binding method seemsto be favorable. The optimum conditions found at the end of the experiments forthe antigen to be immobilized onto the surface-modified microspheres are: initalglutaraldehyde concentration; %2, immobilization pH; 7.4, temperature ofimmobilization medium; 25oC, immobilization time 90 min. And initial antigenconcentration; 1µg/ml. For the last step of this study, agglutination tests have beendone under in-vitro conditions with the anti-human CRP immobilized microspheresand the samples from patient serums. By referring to the agglutination intensityscores, the kits resulting the most intense agglutination have been chosen. Thesechosen kits were compared with the commercial CRP diagnostic kits usedwidespreadly by reacting with patient serums preparde by serial dilution. Theperformances of the synthesized kits were determined by these comparison tests.
Benzer Tezler
- Transferrin saflaştırılması için manyetik immünoafinite mikrokürelerin hazırlanması
Preparation of magnetic immunoaffinity microbeads for transferrin purification
DİLARA SAÇLIGİL
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SERAP ŞENEL
PROF. DR. HANDAN YAVUZ ALAGÖZ
- Immunofunctionalization of magnetic poly(glycidyl methacrylate) microspheres and investigation of their effectiveness in animal cell purification
Manyetik poli(glisidil metakrilat) mikrokürelerin immünofonksiyonalizasyonu ve hayvansal hücre saflaştırılmasındaki etkinliğinin araştırılması
SONER ÇAKMAK
Yüksek Lisans
İngilizce
2008
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiKimya Bölümü
PROF. DR. ADİL DENİZLİ
PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU
- Reaktif monodispers poliglisidil metakrilat partiküllerin dispersiyon polimerizasyonu ile sentezi, karakterizasyonu ve alfa-kemotripsin immobilizasyonunda taşıyıcı olarak kullanımı
Synthesis of reactive monodisperse polyglycidyl methacrylate particles by dispersion polymerization, characterization and usage as a carrier for the immobilization of a alpha-chymotrypsin
GAMZE YALÇIN
Yüksek Lisans
Türkçe
2002
Kimya MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. S. ALİ TUNCEL
- Lektin afinite kromatografisi ile antikor saflaştırılması
Lectin affinity chromatography for antibody purification
BİRNUR AKKAYA
Doktora
Türkçe
2009
BiyokimyaCumhuriyet ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ADİL DENİZLİ
PROF. DR. FERDA CANDAN
- Uzatma kolu takılı L-histidin bağlı p(GMA-MMA) afinite mikroküreler ile IgG saflaştırılması
Immunoglobuline G purification with spacer arm attached L-histidine immobilized p(GMA-MMA) affinity microbeads
AYŞEGÜL ÜLKÜ ŞENEL