Geri Dön

Poliglisidil metakrilat mikrokürelere anti C-reaktif protein immobilizasyonu ve tanı amaçlı kullanımı

Anti c-reactive protein immobilization onto polyglysidil methacrylate microspheres and it's use for diagnosis

  1. Tez No: 197144
  2. Yazar: ERİNÇ OZAN
  3. Danışmanlar: DOÇ.DR. HAKAN AYHAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: CRP, polimerik mikroküreler, antijen immobilizasyonu, tanıkitleri, CRP, polymeric microspheres, antigen immobilization, diagnostic kits
  7. Yıl: 2005
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 68

Özet

POLİGLİSİDİL METAKRİLAT MİKROKÜRELERE ANTİ C-REAKTİF PROTEİNİMMOBİLİZASYONU VE TANI AMAÇLI KULLANIMIErinç OZANÖZSunulan bu çalışmanın amacı; ticari örneklerine alternatif olmak üzere c-reaktifproteinin tanısında kullanılacak, polimerik taşıyıcı bazlı bir diagnostik test kitiningeliştirilmesidir. Çalışmanın ilk bölümünde monodispers PGMA(poliglisidilmetakrilat) partikülleri; GMA (glisidilmetakrilat) monomerinin etanoldağıtma ortamında başlatıcı olarak AIBN (azobisizobutironitril) ve stabilizör olarakPAA (poliakrilikasit) varlığında dispersiyon polimerizasyonuyla sentezlenmiştir.Sentezlenen PGMA mikrokürelerin boy ve boy dağılımlarının saptanması içintaramalı elektron mikroskobu (SEM) kullanılmış, elde edilen fotoğraflardanmikroküreler sayılarak sayıca ortalama çap (Dn) 1,166 µm, ağırlıkça ortalama çap(Dw) 1,166 µm, ve polidispersite indeksi (PDI) 1.000 olarak hesaplanmıştır.Gravimetrik yöntemle tayin edilen %88,67 (%ağırlık) değeri ise toplam monomerdönüşüm oranının yeterince yüksek olduğunu göstermektedir. Karakterizasyonsonuçlarına göre polimerizasyon reçetesinin başarıyla kullanılabileceğiöngörülmüştür. Çalışmanın ikinci bölümünde, karakterizasyonu yapılanmikroküreler, C-reaktif protein tanısında, anti-human C-reaktif proteinimmobilizasyonunda taşıyıcı partikül olarak kullanılmıştır. İmmobilizasyonda,taşıyıcıya bağlama yönteminin adsorpsiyon ve kovalent bağlama metotlarıdenenmiştir. Kovalent bağlanma metodunda uzatma kolu (spacer-arm) olarak çiftfonksiyonel bir reaktif olan glutaraldehit kullanılmıştır. Modifiye Lowry toplamprotein tayini ile elde edilen ?immobilize antijen miktarları? ve hasta serumu ileyapılan çökelme testleri sonuçlarına göre adsorbsiyon yönteminin tamamıylakullanışsız, bunun yanında kovalent bağlama metodunun glutaraldehit varlığındadaha uygun olduğu saptanmıştır. Mikrokürelere bağlanacak antijeninimmobilizasyon çalışmaları sonucunda optimum koşullar; başlangıç glutaraldehitderişimi %2, immobilizasyon pH'ı 7.4, immobilizasyon sıcaklığı 25oC,immobilizasyon süresi 90 dak. ve başlangıç antijen derişimi 1µg/ml olarakbulunmuştur. Çalışmanın son aşamasında ise, hazırlanan anti-human C-reaktifprotein immobilize mikroküreler, hasta serumlarından alınan örneklerle in-vitroortamda etkileştirilerek çökelme deneyleri yapılmıştır. Bu çalışmalar sonundaçökelme şiddetlerine göre en yüksek skorlara sahip kitler belirlenerek seçilmiştir.Bu seçilen kitler ve ticari CRP tanı kitleri, seri olarak seyreltilerek hazırlanan hastaserumları ile etkileştirilerek kıyaslanmıştır. Bu kıyaslama sonuçlarına görehazırlanan kitlerin performansları saptanmıştır.

Özet (Çeviri)

ANTI C-REACTIVE PROTEIN IMMOBILIZATION ONTO POLYGLYSIDILMETHACRYLATE MICROSPHERES AND IT?S USE FOR DIAGNOSISErinç OZANABSTRACTThe aim of this study is to develop a test kit for diagnose of C-reactive protein(CRP) as an alternative to commercial kits. The diagnostic test kit to be developedis propsed as an polymeric carrier based test kit. In the first step of the submittedstudy, PGMA (polyglysidilmetacrylate) particles were synthesized by dispertionpolymerization method from the GMA (glysidilmethacrylate) monomer, dissolved inan ethanol medium, by using AIBN (asobisisobutyronitrile) as initiator and PAA(polyacrylicacid) as stabilizer. Size and size distribution of the synthesizedmicrospheres were determined by SEM (scanning electron microscope). Bycounting the particles from the obtained photographs the following results werecalculated: average diameter by number (Dn); 1,166µm, average diameter byweight (Dw); 1,166µm, polydispersity index (PDI); 1,000. The calculated monomertransformation value (%88,67 by weight), which was determined by gravimetricmethods, indicates that the total monomer transformation rate is satisfactory. Theobtained characterization results supported that the formulation could be usedsuccesfully. In the second step of the study, the characterized particles were usedas micro-carriers for the immobilization of the anti-human CRP aiming thediagnosis of CRP. For the immobilization process, adsorption and the covalentbinding methods of the binding onto a carrier technique has been applied.Glutaraldehyde, a bifunctional reactive, has been used as the spacer arm in thecovalent binding method. The ?immobilized antigen amount? results obtained fromThe Modified Lowry total protein analysis and the agglutination results obtainedfrom the patient serums stated that the adsorption method is totally uselesshowever with the presence of glutaraldehyde, the covalent binding method seemsto be favorable. The optimum conditions found at the end of the experiments forthe antigen to be immobilized onto the surface-modified microspheres are: initalglutaraldehyde concentration; %2, immobilization pH; 7.4, temperature ofimmobilization medium; 25oC, immobilization time 90 min. And initial antigenconcentration; 1µg/ml. For the last step of this study, agglutination tests have beendone under in-vitro conditions with the anti-human CRP immobilized microspheresand the samples from patient serums. By referring to the agglutination intensityscores, the kits resulting the most intense agglutination have been chosen. Thesechosen kits were compared with the commercial CRP diagnostic kits usedwidespreadly by reacting with patient serums preparde by serial dilution. Theperformances of the synthesized kits were determined by these comparison tests.

Benzer Tezler

  1. Transferrin saflaştırılması için manyetik immünoafinite mikrokürelerin hazırlanması

    Preparation of magnetic immunoaffinity microbeads for transferrin purification

    DİLARA SAÇLIGİL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SERAP ŞENEL

    PROF. DR. HANDAN YAVUZ ALAGÖZ

  2. Immunofunctionalization of magnetic poly(glycidyl methacrylate) microspheres and investigation of their effectiveness in animal cell purification

    Manyetik poli(glisidil metakrilat) mikrokürelerin immünofonksiyonalizasyonu ve hayvansal hücre saflaştırılmasındaki etkinliğinin araştırılması

    SONER ÇAKMAK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Kimya Bölümü

    PROF. DR. ADİL DENİZLİ

    PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU

  3. Reaktif monodispers poliglisidil metakrilat partiküllerin dispersiyon polimerizasyonu ile sentezi, karakterizasyonu ve alfa-kemotripsin immobilizasyonunda taşıyıcı olarak kullanımı

    Synthesis of reactive monodisperse polyglycidyl methacrylate particles by dispersion polymerization, characterization and usage as a carrier for the immobilization of a alpha-chymotrypsin

    GAMZE YALÇIN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    Kimya MühendisliğiHacettepe Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. S. ALİ TUNCEL

  4. Lektin afinite kromatografisi ile antikor saflaştırılması

    Lectin affinity chromatography for antibody purification

    BİRNUR AKKAYA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyokimyaCumhuriyet Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ADİL DENİZLİ

    PROF. DR. FERDA CANDAN

  5. Uzatma kolu takılı L-histidin bağlı p(GMA-MMA) afinite mikroküreler ile IgG saflaştırılması

    Immunoglobuline G purification with spacer arm attached L-histidine immobilized p(GMA-MMA) affinity microbeads

    AYŞEGÜL ÜLKÜ ŞENEL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    KimyaKırıkkale Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. GÜLAY BAYRAMOĞLU