Dişi köpeklerde kan progesteron hormonu ölçümleri amacıyla radioimmunoassay kiti üretilmesi ve kalibrasyonu
Production and calibration of radioimmunoassay kit for progesterone hormone assay in the bitch
- Tez No: 203046
- Danışmanlar: PROF.DR. EROL ALAÇAM
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Disi köpek, radioimmunoassay, progesteron kiti, Bitch, radioimmunoassay, progesterone kit
- Yıl: 2007
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 89
Özet
Disi Köpeklerde Kan Progesteron Hormonu Ölçümleri Amacıyla Radioimmunoassay Kiti Üretilmesi ve Kalibrasyonu Sunulan tez çalısmasının amacı, disi köpeklerin farklı siklik evrelerinde, gebelik ve yalancı gebeliklerinde, progesteron hormonu düzeylerini türe spesifik (KK), insanlarda kullanılan (BK) ve bu çalısma için olusturulan RIA kitleri (SGK) ile arastırarak tanı yönünden uyum, olası fark ve benzerlikleri ortaya koymaktır. Bu amaçla çesitli muayene yöntemleri kullanılarak östrus siklunun proöstrus, östrus, diöstrus ve anöstrus dönemlerinde oldukları belirlenen, ayrıca yalancı gebelik ve gebelik bulunan hayvanlardan, her grupta 7 adet olmak üzere toplam 42 adet disi köpekten kan alınmıstır. Ayrıca, çalısma süresince 6 adet erkek Yeni Zelanda tavsanı da antikor üretmek amacıyla kullanılmıstır. Antikor üretmek amacıyla; immunojen olarak ?11a-OH-Hemisuccinate:BSA?, adjuvat olarak Freund's complete ve incomplete adjuvantı kullanılmıstır. mmunizasyon süreci olarak iki hafta aralıklar ile tavsanlara deri altı immunizasyonlar yapılmıstır. Üçüncü enjeksiyondan sonra kulak venalarından kan alınmıs ve titre tayinleri yapılmaya baslanmıstır. Titre tayinleri sonucunda bir miktar antikor üretilebildigi ancak baglanma oranı %50'nin altında oldugu için, istenilen duyarlılıkta, karakterde, özgüllükte ve affinitede olmadıgı görülmüstür. Polisteren tüpleri antikor ile kaplama islemi için dısarıdan temin edilen ?7a-OH-progesteronhemisuccinate? ve ?6-OH-progesteron-hemisuccinate? iki farklı antikor ve yedi farklı yöntem kullanılmıstır. Ancak, çalısmanın bu sürecinde istenilen düzeyde baglanma saglanamamıstır. Disi köpeklerden toplanan kan serumlarından BK (mmunotech®), KK (mmunotech®) ve SGK kullanılarak progesteron düzeyleri ölçülmüstür. Progesteron ölçümlerine kullanılan BK ve KK ile ölçümler üretici firmanın belirtmis oldugu yönteme göre yapılmıstır. SGK ile ölçüm yapabilmek için öncelikle standart aralıgı genisletilmis ve standart noktalar olarak 0 ng/ml, 2.5 ng/ml, 5 ng/ml, 10 ng/ml, 20 ng/ml, 40 ng/ml, 80 ng/ml ve 100 ng/ml düzeyleri kullanılmıstır. Bu kit ile yapılan ölçümlerde takip eden süreç önceki iki kit ile aynı sekilde yapılmıstır. Beseri kit ile yapılan ölçümlerde elde edilen ortalama degerler su sekildedir. Proöstrus döneminde 0,83 ng/ml; östrusda 4,91 ng/ml; diöstrusta 29,71 ng/ml; anöstrusta 0,37 ng/ml; yalancı gebelikte 3,01 ng/ml ve gebelikte 22,71 ng/ml. Aynı dönemlerde KK ile yapılan ölçümlerde ise sırasıyla 0,65 ng/ml; 6,72 ng/ml; 30,70 ng/ml; 0,15 ng/ml; 3,96 ng/ml ve 25,20 ng/ml düzeyleri bulunmustur. SGK ile yapılan ölçümlerde aynı dönemlere ait progesteron düzeyleri ise sırasıyla 0,51 ng/ml; 7,28 ng/ml; 40,78 ng/ml; 0,31 ng/ml; 4,93 ng/ml ve 28,41 ng/ml olarak bulunmustur. Ölçümlerden elde edilen sonuçlar degerlendirildiginde; tüm gruplardan her üç kit kullanılarak elde edilen sonuçlar arasında istatistiksel yönden önemli bir farklılıgın olmadıgı (p>0,05) ortaya konmustur. Her siklus döneminin verilerinin elde edildigi test yöntemleri kendi aralarında karsılastırılmıs ve istatistiksel yönden bir fark bulunamamıstır (p>0,05). Kitlerden elde edilen sonuçların korelasyonu yapıldıgında ise r=0,994 ve 0,998 düzeyinde bir iliski bulunmustur. Sonuç olarak, disi köpeklerde progesteron ölçümü amacıyla türe spesifik kitler yerine beseri kitlerin saglıklı biçimde kullanılabilecegi kanısına varılmıstır.
Özet (Çeviri)
Production and Calibration of Radioimmunoassay Kit for Progesterone Hormone Assay in The Bitch The aim of this study was to investigate blood progesterone levels by using human progesterone RIA kit, canine progesterone RIA kit and validaded human progesterone kit in different stages of the sexual cycle, pregnancy and pseudopregnancy in the bitch. A total of 42 bitches were used in the study. Dogs were assigned in to six groups according to the reproductive status as follows proestrus (n=7), estrus (n=7), diestrus (n=7), anestrus (n=7), pregnancy (n=7) and pseudopregnancy (n=7). In adition, six male New Zelland rabbits were used in antibody production. 11a-OH-Hemisuccinate:BSA and Freund?s complete and incomplete adjuvant were used as immunogen and adjuvant for antibody production, respectively. Rabbits were immunizated by s.c. injections in two week intervals. Following the 3rd injention, blood samples were collected via auricular venapuncture and antisera were tested. Although an amount of antibody were obtaind, the binding ratio was < 50% resulting in undesirable sensitivity, spesifity and affinity. Two different antibodies ?7a-OH-progesteron-hemisuccinate? and ?6-OHprogesterone- hemisuccinate: BSA?were used in antibody coating of polysteren tubes. Nonetheless,efficient antibody binding could not been reached. Progesterone levels in blood samples of the dogs were measured by human progesterone RIA kit (immunotech®), canine progesterone RIA kit (immunotech®) and a validated human RIA kit. Measurement made instructures with minor modifications to SGK. For that; standart interval was extended standart points were set to 0, 2.5, 5, 10, 20, 40, 80 and 100 ng/ml. Mean values obtained using by human RIA kit were as follows ; proestrus 0.83 ng/ml, estrus 4.91 ng/ml, diestrus 29.71 ng/ml, anestrus 0.37 ng/ml, pseudopregnancy 3.01 ng/ml and pregnancy 22.71 ng/ml. Mean values obtained by using canine progesterone kit were 0.65 ng/ml; 6,.2 ng/ml; 30.70 ng/ml; 0.15 ng/ml; 3.96 ng/ml and 25.20 ng/ml. Mean values obtaind by using validated human RIA kit were 0.51 ng/ml; 7.28 ng/ml; 40.78 ng/ml; 0.31 ng/ml; 4.93 ng/ml and 28.41 ng/ml for the same reproductive stages, respectively . There was no statistically important difference between the mean progeterone values obtained by using different test kits (p>0.05). The results were correlated at the level of r= 0.994 and 0.998. In conclusion, human progesterone RIA kit can be use safely instead of species specific test kits for the blood mesurement in the bitch.
Benzer Tezler
- Dişi köpeklerde erken yaşta uygulanan total ovariohisterektomi operasyonunun kemik, davranış ve gelişim üzerine etkileri
The effects of early age total ovariohysterectomy on bone, behaviour and development in female dogs
BESİM HASAN SONTAŞ
Doktora
Türkçe
2005
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. HAYRİ EKİCİ
- Östrusları serum gonadotropinlerle (PMSG) uyarılmış köpeklerde ovulasyonun GnRH ve hCG ile uyarılması
Induction of ovulation with GnRH and HCG in bitches wich had induced oestrus by gonadotropine (PMSG)
ALİ ASGHAR AHMADY AGHDAM
Doktora
Türkçe
1998
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HURİYE HOROZ
- Köpeklerde proöstrusta uygulanan progesteronun plazma hormon seviyeleri (progesteron, östrogen, LH) ve kan parametreleri üzerine etkisi
Effect of progesterone administration during the prooestrus on plazma hormone levels (progesterone, oestrogen, LH) and blood parameters in the bitch
FİKRET KİL
Doktora
Türkçe
1997
Kadın Hastalıkları ve Doğumİstanbul ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. M. RAGIP KILIÇARSLAN
- Köpeklerde endometrial kistik hiperplazi pyometra kompleksin medikal tedavisinde farklı yöntemlerin etkinliğinin karşılaştırılması
Comparison of the efficacy of different methods on the medical treatment of cystic endometrial hyperplasia pyometra complex in bitches
MELİH UÇMAK
Doktora
Türkçe
2006
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. ÇAĞATAY TEK
- Aglepriston ile gebelikleri sonlandırılan köpeklerde uterus ve maternal plasentada morfolojik değişiklikler, matriks metalloproteinazı-2, -9, doku uyuşum kompleksi molekülü-I, II ve steroid hormon reseptörlerinin belirlenmesi
Morphological changes and uterine and maternal placental expression of matrix metalloproteinases-2, -9, major histocompatibility complex-I, -II and steroid receptors after interruption of canine pregnancy by aglepristone
HALİT KANCA
Doktora
Türkçe
2007
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKKI İZGÜR