Geri Dön

Ülkemizden izole edilen bacillus licheniformis BA17'den elde edilen alkalen proteaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Purification and characterization of alkaline protease produced by bacillus licheniformis BA17 isolated from Turkey

PDF İndir

  1. Tez No: 212129
  2. Yazar: SELÇUK ÖZTÜRK
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. MÜŞERREF ÖZEREN MORGAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Alkaline proteaz, Bacillus licheniformis, safla§tırma, karakterizasyon, Alkaline protease, Bacillus licheniformis, purification, characterization
  7. Yıl: 2007
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Marmara Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 93

Özet

Bu çahsmada Van Gölü'nden izole edilen B. licheniformis BA17 alkalenproteaz enziminin saflaştinlması ve karakterizasyonu araştinlmıştır.B. licheniformis BA17'den proteaz iiretimi için (w/v) %1 maltoz, %0.8 yeast,%0.02 MgS04.7H20, %0.1 K2HP04, %l NaN03 içeren besi yeri kullamlmıştır.Alkalen proteaz iiretimi BA17'nin 37°C'de ve 180rpm çalkalama hızında 24 saatbüyütülmesi ile gerçekleştirilmiştir. Ultrafiltrasyon ve iyon değiştirme (DEAEselüloz) kromatografisi adımları ile enzim %58 verimde ve 5.4 kat saflaştinlmıştır.Enzimin molekiiler agirhgi 19.7 kDa, Ca+2 iyonu varhginda ve yokluğunda optimumsıcakhgi 60°C olarak bulunmuştur. Saf enzimin 40°C, 50°C, 60°C ve 70°Csıcakhklarda yarılanma ömrii sırası ile 38 saat, 93 dakika, 14 dakika ve 6 dakikaolarak bulunmuştur. Enzimin optimum pH'sı 10 olarak belirlenmiş ve pH 8.0-10araliginda 30°C sabit sıcakhkta 2.5 saat inkiibe edildiğinde aktivitesini kaybetmediği,pH 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5 ve 13 değerlerinde, aym koşullarda inkiibe edildiğinde isesırasıyla %15, %15, %36.6, %50.7, %54.3 ve %90 oramnda aktivite kaybimn olduğugözlenmiştir. 30°C sıcakhkta 5mM konsantrasyonunda Cu+2, Mg+2, Mn+2 ve K+1iyonu varhginda enzim aktivitesinin sırasıyla %23, %4, %6 ve %12 oramnda arttigi,5mM Ca+2 ve NH4+1 iyonu varhginda enzim aktivitesinin etkilenmediği, 5mM Co+2,Fe+2 ve Na+1 iyonu varhginda ise enzim aktivitesinin sırasıyla %6, %27 ve %5oramnda azaldigi belirlenmiştir. 5mM (NH4)2S04'in enzim aktivitesinde %17oramnda kayba neden olduğu gözlenmiştir. %5 SDS(w/v) ve %1 Triton X-100(v/v)varhginda enzimin aktivitesini kaybettiği, %1 Tween 20(v/v) varhginda iseaktivitesinin %23.5 oramnda arttigi gözlenmiştir. 5mM PMSF varhgindaiaktivitesinin tamamen kaybolması sebebi ile enzimin serin proteaz olduğu, 5mMEDTA varhginda aktivitede göriilen %81 oranındaki kayıp sebebi ile enzimin Ca+2bağlama bölgesine sahip olduğu belirlenmiştir. lOmM NBS, lOmM TLCK ve TPCK,lOmM etilasetimidat ve iodoasetik asit varhginda aktivitede göriilen kayıp sebebi iletriptofan, histidin ve lizin rezidiilerinin aktif bölgede bulunduğu belirlenmiştir.Enzimin sentetik substratlardan kemotripsin substratı olan 7V-Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-PNA'yı hidrolizlediği belirlenmiştir. Enzimin kazein hidrolizi için, Km ve Vmdeğerleri sırasıyla 0.209mg/ml ve 5.5(imol tirosin/ml/dak olarak hesaplanmıştır.

Özet (Çeviri)

Purification and Characterization of Alkaline ProteaseProduced By Bacillus licheniformis BA17 Isolated from TurkeyIn this work, purification and characterization of alkaline protease produced byB. licheniformis BA17 isolated from Van Lake in Turkey was investigated.Medium containing (w/v) 1% maltose, 0.8% yeast extract, 0.02%MgSO4.7H2O, 0.1% K2HPO4, and 1% NaNO3 was used for alkaline proteaseproduction. B. licheniformis BA17 was grown overnight at 37°C and 180rpm.Purification fold and yield obtained by using the ultrafiltration and ion exchangechromatography in series were 5.4 and 58 %, respectively. The molecular weight ofenzyme was found to be 19.7 kDa by using SDS-PAGE electrophoresis, and theoptimum temperature was 60°C in the presence and absence of Ca+2 ion. The halflifeof the pure enzyme was 38 hours, 93 minutes, 14 minutes and 6 minutes at 40°C,50°C, 60°C and 70°C, respectively. The optimum pH of enzyme was determined as10, and activity was not affected when the enzyme was incubated for 2.5 hours at30°C and at pH between 8.0 and 10. Under the same incubation conditions, 15%,15%, 36.6%, 50.7,% 54.3% and 90% of the activity was lost at pH 10.5, 11, 11.5,12, 12.5 and 13, respectively. The catalytic activity of enzyme increased 23%, 4%,6% and 12% in the presence of 5mM Cu+2, Mg+2, Mn+2 and K+1 ions at 30°C,respectively but activity did not change in the presence of 5mM Ca+2 and NH41+ ions.However activity decreased 6%, 27% and 5% in the presence of 5mM Co+2, Fe+2 andNa+1 ions, respectively. 17% of the enzyme activity was lost in the presence of 5mM(NH4)2SO4. In the presence of 5% SDS (w/v) and 1% Triton X-100(v/v), the enzymeretained its original activity, but in the presence of 1% Tween 20 (v/v) enzymeactivity increased by 23.5 %. Enzyme activity was inhibited by PMSF, suggestingthat the enzyme is a serine protease. The enzyme has a Ca+2 binding site since 81%of the activity was retained in the presence of 5 mM EDTA. The inhibition ofenzyme activity in the presence of 10mM NBS, 10mM TLCK and TPCK, 10mMethylacetimidate and iodoacetic acid, suggested the presence of tryptophan, histidineand lysine residues at the active site It was also found that enzyme hydrolyzedsynthetic kemotrypsin substrate "N-Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA?. Km and Vm valuesof the enzyme for casein hydrolysis were found approximately 0.209 mg/ml and 5.5umol tyrosine/ml/min respectively.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    617010

    Kiraz bahçelerinden Bacillus thuringiensis izolasyonu, Cry gen profillerinin belirlenmesi ve parasporinler üzerine çalışmalar

    Isolation of native Bacillus thuringiensis strains from cherry orchards, determination of Cry gene profiles and studies on parasporins

    MÜJGAN KESİK OKTAY

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyolojiMuğla Sıtkı Koçman Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HATİCE GÜNEŞ

  2. Tez No

    412896

    Ülkemizde çeşitli habitatlarda izole edilen Bacillus türlerinin bazı zararlı böceklerin biokontrolünde kullanılma olanakları üzerine bir araştırma

    Başlık çevirisi yok

    MEHLİKA HANDAN BURSALIOĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1985

    BiyolojiEge Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET ÖNER

  3. Tez No

    233772

    Fabrika atıklarından izole edilen Bacillus sp.’den aktif ve kararlı lipaz üretim koşullarının ve üretilen enzimin deterjan endüstrisinde kullanımının araştırılması

    The investigation of active and stable lipase production conditions from Bacillus sp. isolated from factory wastewaters and of their utilization in detergent industry

    BAŞAK MARUL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    BiyoteknolojiAnkara Üniversitesi

    Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. SERPİL TAKAÇ

  4. Tez No

    619637

    Kök kanseri hastalığı [Rhizobium radiobacter (Agrobacterium tumefaciens)] ile mücadelede biyoajan bakterilerin kullanım imkânlarının araştırılması

    Investigation of possibility of biological control with crown gall [Rhizobium radiobacter (Agrobacterium tumefaciens)] using bioagent bacteria

    NASİBE TEKİNER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    ZiraatAtatürk Üniversitesi

    Bitki Koruma Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. RECEP KOTAN

  5. Tez No

    897304

    Tarhana örneklerinden izole edilen laktik asit bakterileri postbiyotiklerinin karakterizasyonu

    Characterization of lactic acid bacteria postbiotics isolated from tarhana samples

    ECEM AYDIN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Mühendislik BilimleriAydın Adnan Menderes Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. OLCAY BOYACIOĞLU

    DOÇ. DR. ÇİSEM BULUT ALBAYRAK

Geri Dön