Geri Dön

Sıçan ince bağırsak glutatyon S-transferaz enziminin saflaştırılması ve izozimlerinin hiperisin bileşiği ile bağlanma özelliklerinin incelenmesi.

Purification of glutathione S-transferase from rat small intestine and examining the binding properties of defined isozymes with the hypericin.

  1. Tez No: 225648
  2. Yazar: GAMZE TUNA
  3. Danışmanlar: PROF. DR. İZZET HAMDİ ÖĞÜŞ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2008
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 73

Özet

Bu çalışmada, Glutatyon S-transferaz (GST, E.C. 2.5.1.18) sıçan ince bağırsağından, Sephadex G-25 jel filtrasyonu, S-Hekzilglutatyon Sefaroz 6B affinite kolunu kullanılarak %76 verim ve 16.13 U/mg-protein'lik özgül aktivite ile saflaştırıldı. Enzim daha sonra PBE-118 kromatofokuslama kolonuna yüklenerek izozimler Pharmalyte/HCl (pH:8) ile ayrıldı. PBE-118 kolonundan ? izozimi pH 9,58'de, pi izozimi pH: 8,97'de elde edildi. Alt birimlerin molekül ağırlığı 25 kDa (? izozimi) 24 kDa (pi izozimi) olarak hesaplandı. GST-? CDNB ve GSH ile negatif kooperatif özellik gösterdi. İzozimin düşük ve yüksek [CDNB]'de farklı Km ve Vm değerlerine sahip olduğu gözlendi. Km ve Vm düşük derişimlerde sırasıyla 0.366 mM, 4.237 U/mg protein, yüksek derişimlerde ise 0.590 mM, 5.675 U/mg protein olarak bulundu. Aynı şekilde [GSH] değişken substrat olduğunda da farklı kinetik parametreler hesaplandı. Düşük derişimlerde Km: 0.043 mM, Vm: 2.079 U/mg protein ve yüksek derişimlerde Km: 0.426 mM, Vm: 6.262 U/mg protein olarak saptandı. GST pi, değişen CDNB ve GSH derişimlerine karşı negatif kooperatif özellik gösterdi. Km ve Vm değerleri düşük CDNB derişimleri için sırasıyla 0.118 mM, 0.672 U/mg protein ve yüksek CDNB derişimleri için 2.967 mM, 8.306 U/mg protein olarak hesaplandı. Düşük GSH derişimlerinde Km ve Vm 0.038 mM, 1.4 U/mg protein iken yüksek GSH derişimlerinde bu değerler 0.167 mM, 2.431 U/mg protein olarak hesaplandı.Hiperisin, sabit [GSH] değişken [CDNB]'de GST-?'yı non-kompetitif olarak inhibe etti. Ki : 0.1, 0.4, 2.0 ?M sabit [hiperisin]'de sırasıyla 0.239, 0.350, 1.038 ?M olarak bulundu. [GSH] değişken subsrat olduğunda ise hiperisinin unkompetitif inhibisyon yaptığı saptandı. (0.1, 0.4, 2.0 ?M sabit [hiperisin]'de sırasıyla Ki : 0.131, 0.119, 0.231 ?M). Hiperisinin GST-Pi izoziminin inhibitörü olduğu saptandı. [CDNB] sabit, [GSH] değişken substrat olduğunda non-kompetitif inhibisyon özellikleri gözlenirken (0.1, 0.4, 2 ?M sabit hiperisin derişiminde Ki sırasıyla; 0.366, 0.872, 2.863 ?M); değişken [CDNB] olduğunda aynı şekilde GST-Pi izozimi üzerinde non-kompetitif inhibisyon gösterdi (0.1, 0.4, 2 ?M sabit hiperisin derişiminde sırasıyla Ki : 0.715, 0.865, 2.297 ?M).

Özet (Çeviri)

In this study, Glutathione S-transferase (GST, E.C. 2.5.1.18) was purified from small intestine of the rat using Sephadex G-25 gel filtration, S-Hexylglutathione Sepharose 6B affinity column chromatography with 76% yield and a specific activity of 16.13 units per milligram proteine. The enzyme was then loaded to PBE-118 chromatofocusing column and isozymes were separated with Pharmalyte/HCl (pH: 8). The ? isozyme was separated by PBE-118 column chromatography at the pH 9.58 with a molecular weight of 25 kDa. The ? isozyme was separated by PBE-118 column chromatography at the pH 8.97 with a molecular weight of 24 kDa.GST-? showed a negative cooperativity pattern both with CDNB and GSH. The enzyme had different Km and Vm values for low (0.366 mM, 4.237 U/mg protein) and high [CDNB] (0.590 mM, 5.675 U/mg protein), respectively. Different kinetic parameters were also calculated for low (Km: 0.043 mM, Vm: 2.079 U/mg protein) and high (Km: 0.426 mM, Vm: 6.262 U/mg protein) [GSH]. GST- ? showed a negative cooperativity for its substrates, CDNB and GSH. The Km and Vm values were calculated as 0.118 mM, 0.672 U/mg protein in low concentrations, and 2.967 mM, 8.306 U/mg protein in high concentration of CDNB, respectively. In the low GSH concentrations Km and Vm values were found to be 0.038 mM, 1.4 U/mg protein, whereas in the high GSH concentrations these values were calculated as 0.167 mM, 2.431 U/mg protein.Hypericin showed a non-competitive inhibition pattern on GST-?, using [GSH] fix and [CDNB] as a varied substrate (Ki: 0.239, 0.350, 1.038 ?M at 0.1, 0.4, 2.0 ?M hypericin concentrations, respectively), whereas uncompetitive inhibition was found when [GSH] was a varied substrate (Ki: 0.131, 0.119, 0.231 ?M at 0.1, 0.4, 2.0 ?M hypericin concentrations, respectively). Hypericin was found to be an inhibitor for GST-Pi. Non-competitive inhibition pattern was found at fix [CDNB] and varied [GSH]. Ki values obtained were; 0.366, 0.872, 2.863 ?M for 0.1, 0.4, 2 ?M of constant [hypericin], respectively. While using CDNB as a varied substrate, non-competitive inhibition was also found with a Ki; 0.715, 0.865, 2.297 ?M, for 0.1, 0.4, 2 ?M of [hypericin], respectively).

Benzer Tezler

  1. Dinitrocresol'ün (Rat rattus norvegicus) sıçan glutatyon S-transferaz enzim aktivitesine etkisi

    The effect of dinitrocresol on rat (Rat rattus norvegicus) glutathion S-transferase enzyme activity

    OLCAY BAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    BiyolojiUludağ Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. EGEMEN DERE

  2. Organofosforlu pestisitlerin neden olduğu ince bağırsak toksisitesine karşı lupeolün koruyucu etkileri

    Protective effects of lupeol against organophosphorus pesticides induced small intestine toxicity

    HÜSEYİN US

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NİHAL ÖMÜR BULAN

  3. Sülfit oksidaz yetersizliğinin ilaç metabolize eden enzimlerle ilişkisi

    Effect of sulfite oxidase deficiency in xenobiotics metabolism

    BEGÜM TÜTÜNCÜ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    BiyolojiPamukkale Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. ALAATTİN ŞEN

  4. Alüminyum ile oluşturulan sıçan ince bağırsak toksisitesi üzerinde melatoninin rolü

    The role of melatonin on aluminum-induced rat small intestine toxicity

    GÜNER SARIKAYA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÖMÜR KARABULUT BULAN

  5. Klorokin ve gama radyasyonunun oluşturduğu ince bağırsak hasarına karşı aposininin etkileri

    The effects of apocynin against chloroquine and gamma radiation induced intestinal injury

    AYÇA SEZEN US

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Biyokimyaİstanbul Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NİHAL ÖMÜR BULAN